Целью исследования было определить, влияет ли формула Jinshui Huanxian II (ECC-JHF II) и жесткость матрицы на эпителиально-мезенхимальный переход (EMT) при интервенции в процесс легочного фиброза через регуляцию интегрина β1 (ITG β1). Метод: Модель легочного фиброза у мышей была создана однократным введением блеомицина (BLM) внутритрахеально. Для наблюдения за течением заболевания мышей убивали до моделирования и на 7, 14, 21, 28, 42 дни после моделирования для анализа соответствующих показателей. Для оценки эффективности фармакологического вмешательства мышам на 29-й день после моделирования проводили желудочный зондовый ввод ECC-JHF II и пирфенидона (PFD) в течение 14 дней, затем мышей умерщвляли для оценки функции легких, патологических изменений, отложения коллагена, жесткости легочной ткани и маркеров EMT. In vitro различной жесткости гидрогели на основе многофункционального полиэтиленгликоля с восьмиконечными группами меркаптана (PEG-SH) и малеилимида (PEG-MAL) были подготовлены с использованием биоматериалов. Низкие, средние и высокие дозы ECC-JHF II (15.31, 30.63, 61.25 мг/л) добавлялись в культуру человеческих альвеолярных эпителиальных клеток II типа, выращиваемых на жесткой матрице, чтобы исследовать влияние ECC-JHF II на EMT, вызванный трансформирующим фактором роста-β1 (TGF-β1). ECC-JHF II применяли к клеткам II типа, культивируемым на мягкой (3.8 кПа) и жесткой (~ГПа) матрице, и оценивавали уровни мРНК и экспрессию белков эпителиального маркера E-кадгерина (CDH1), мезенхимальных маркеров N-кадгерина (CDH2) и виментинa (VIM), а также ITG β1 с помощью количественной ПЦР в реальном времени и иммунологического флуоресцентного анализа. Вестерн-блоттинг использовался для определения белковых уровней CDH1, CDH2 и ITG β1. Механизм биомеханического воздействия ECC-JHF II на EMT и легочный фиброз проверяли с помощью снижения экспрессии и специфической активации ITG β1. Результаты: ECC-JHF II улучшал BLM-индуцированный легочный фиброз у мышей, проявляющийся значительным увеличением минутного объема вентиляции (MV) и выдоха на 50% объема дыхания (EF50) по сравнению с моделью (p<0.05), значительным увеличением дыхательного объема (TV) после лечения (p<0.01). Иммуногистохимия показала уменьшение воспаления и повреждения альвеол, снижение отложения коллагена типа I (COL-I) и значительное уменьшение жесткости легочной ткани (p<0.01), замедляя прогресс заболевания. Анализ ПЦР в реальном времени показал повышение экспрессии CDH1 и значительное снижение CDH2 и VIM в группе ECC-JHF II по сравнению с моделью (p<0.05, p<0.01), что указывает на ингибирование EMT и улучшение легочного фиброза. In vitro исследования показывали, что ECC-JHF II и размягчение матрицы могут обратить фенотип EMT, заметно повышая CDH1 и снижая CDH2 и VIM в условиях мягкой матрицы (p<0.01, p<0.05). Кроме того, ECC-JHF II ингибировал экспрессию ITG β1 in vivo и in vitro, и модульное снижение и специфическая активация ITG β1 показали его участие в регуляции эффекта ECC-JHF II на EMT и легочный фиброз. Заключение: ECC-JHF II и размягчение матрицы могут блокировать процесс EMT и улучшать легочный фиброз, возможно, путем ингибирования ITG β1, вовлеченного в механотрансдукцию. Это исследование впервые раскрывает новый биомеханический механизм вмешательства ECC-JHF II в легочный фиброз.

формула Jinshui Huanxian; составная формула; легочный фиброз; жесткость матрицы; интегрин β1; эпителиально-мезенхимальный переход