El objetivo es investigar si la Decocción Modificada de Núcleo de Melocotón y Rhubarb (JTCT) trata la fibrosis hepática mediante la inhibición de la capilarización de los sinusoides hepáticos, y verificar si su mecanismo específico está relacionado con la vía de señalización del gen homólogo a ‘Notch’ de la mosca de la fruta y la vía de señalización de la óxido nítrico sintasa endotelial (eNOS). Métodos: 50 ratones C57BL/6 se dividieron aleatoriamente en grupo normal, grupo modelo (5 mL·kg^-1·3 d^-1), y grupos de dosis baja, media y alta de JTCT (JTCT-L, JTCT-M, JTCT-H) (16.6, 33.3, 66.6 g·kg^-1·d^-1). Excepto el grupo normal, los demás ratones recibieron inyecciones intraperitoneales de solución de tetracloruro de carbono (CCl4) al 20% en aceite de oliva cada 3 días durante 4 semanas para inducir el modelo de fibrosis hepática. Paralelamente, los grupos JTCT-L, JTCT-M y JTCT-H recibieron administración oral diaria por dosis durante 4 semanas (los grupos normal y modelo fueron tratados con volumen equivalente de solución salina). Se aislaron células endoteliales sinusoidales hepáticas primarias (LSECs) de hígados de rata mediante perfusión extracorpórea con colagenasa, gradiente de densidad Percoll y eliminación selectiva de células de Kupffer, las cuales fueron confirmadas fenotípicamente antes del experimento. Tras cultivo hasta fase logarítmica, se usó un kit de interferencia por ARN pequeño (siRNA) para transfección transitoria con el fin de silenciar la expresión de la guanilato ciclasa soluble (sGC). Posteriormente se realizó otra transfección con siRNA para silenciar sGC y se aplicó el activador Notch Jagged-1. Se utilizó el kit CCK-8 para evaluar la inhibición de la proliferación celular de LSECs por JTCT; PCR cuantitativa en tiempo real y Western blot se usaron para detectar la expresión génica y proteica de las vías Notch y eNOS; y Fluo-4/AM para marcar la concentración intracelular de Ca^2+. Resultados: en comparación con el grupo normal, el grupo modelo mostró degeneración grasa, infiltración de células inflamatorias, degeneración y necrosis de hepatocitos, desorganización de la estructura lobulillar y proliferación de tejido fibroso; los niveles séricos de hidroxiprolina (Hyp), alanina aminotransferasa (ALT) y aspartato aminotransferasa (AST) aumentaron significativamente (P<0.01); la expresión de Notch1, Hes1, CD31, factor de von Willebrand (vWF) aumentó significativamente (P<0.01), mientras que la expresión de p-eNOS/eNOS y sGC disminuyó notablemente (P<0.01). En comparación con el grupo modelo, las dosis de JTCT redujeron significativamente los niveles séricos de Hyp, ALT y AST (P<0.01); disminuyeron la expresión hepática de Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0.05, P<0.01); y aumentaron notablemente la expresión de p-eNOS/eNOS y sGC (P<0.05, P<0.01), siendo la mejora más significativa en el grupo JTCT-H (P<0.01). In vitro, comparado con el grupo LSEC-1día, el grupo LSEC-5días mostró un aumento significativo de Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0.01) y disminución de p-eNOS/eNOS y sGC (P<0.01); la concentración de Ca^2+ intracelular aumentó significativamente (P<0.01). Comparado con el grupo LSEC-5días, el grupo JTCT mostró reducciones significativas en Notch1, Hes1, CD31, vWF (P<0.01) y aumentos en p-eNOS/eNOS (P<0.01); la concentración intracelular de Ca^2+ disminuyó significativamente (P<0.01). No hubo diferencias significativas en expresión o concentración de Ca^2+ entre los grupos Jagged1 y Jagged1+JTCT. Comparado con el grupo LSEC-5días, el grupo sGC-KO mostró aumentos significativos en CD31 y vWF (P<0.01). No hubo diferencias significativas entre sGC-KO y sGC-KO+JTCT. Conclusión: JTCT trata fibrosis hepática al inhibir la activación de la vía de señalización Notch y restaurar la actividad de la vía eNOS para inhibir la capilarización de las LSECs.

Decocción modificada de núcleo de melocotón y rhubarb; capilarización de sinusoides hepáticos; vía de señalización del gen homólogo Notch; vía de señalización de la sintetasa de óxido nítrico endotelial (eNOS); fibrosis hepática