Mechanism of Xiayuxue Tang in Inhibiting Hepatocellular Carcinoma Cells by Regulating YAP1/SIRT5 Signaling Axis to Mediate Succinate Metabolism and Succinylation

LU Linzhu ,  

GUO Qianqian ,  

TIAN Xuefei ,  

CHEN Bin ,  

TAN Nianhua ,  

摘要

El objetivo: investigar la regulación del metabolismo del ácido succínico y la inhibición de las células cancerosas hepáticas por sangre. Métodos: Preparar sangre que contenga sangre; Utilización del método de verificación de la actividad de proliferación celular (CCK-8) para observar el efecto de diferentes concentraciones de ácido succínico en la proliferación de las células HepG2, MHCC97H y determinar la concentración experimental posterior; Utilización posterior del método CCK-8 para verificar el efecto de la sangre que contenga sangre (5%, 10%, 15%) en la proliferación de las células HepG2, MHCC97H; Verificar el efecto de la sangre que contenga sangre (5%, 10%, 15%) en la proliferación de las células HepG2, MHCC97H, el período, la migración, la invasión y la apoptosis utilizando citometría de flujo, experimentos de scraping celular y Transwell; Cambio del metabolismo del ácido succínico y la acetilación del ácido succínico mediante la determinación del contenido de ácido succínico, la determinación de la actividad de succinato deshidrogenasa (SDH) y el método de inmunotransferencia de proteínas (Western blot); Reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real utilizando PCR en tiempo real, Western blot para determinar la expresión de la proteína asociada a Yes y el factor de información 5 (SIRT5); Aplicar el docking molecular para verificar la unión de los componentes principales de la sangre a las proteínas diana. Resultados: En comparación con el grupo de control, 1-2 mmol/L de ácido succínico promueve significativamente la proliferación de las células HepG2, MHCC97H (P<0,01); En comparación con el grupo de control, la sangre que contiene sangre (5%, 10%, 15%) inhibe significativamente la proliferación de las células HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01); En comparación con el grupo de control, la sangre que contiene sangre (5%, 10%, 15%) inhibe significativamente la proliferación de las células HepG2, MHCC97H, su migración, invasión e induce la apoptosis de las células HepG2, MHCC97H (P<0,01); Además, en comparación con el grupo sanguíneo, la sangre (5%, 10%, 15%) con ácido aumenta significativamente el nivel de proliferación de las células HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01), la capacidad de migración e invasión (P<0,05, P<0,01), disminuye el porcentaje de las células en la etapa G0/G1 (P<0,01) y disminuye el nivel de apoptosis de las células (P<0,01). En cuanto al metabolismo del ácido succínico, en comparación con el grupo de control, la sangre que contiene sangre (5%, 10%, 15%) ; reduce el nivel de ácido succínico en las células HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01), aumenta la actividad de SDH (>0,01), y reduce significativamente el nivel de acetilación del ácido succínico. En cuanto a la vía YAP1/SIRT5, en comparación con el grupo de control, la sangre que contiene sangre (5%, 10%, 15%) después de la intervención reduce significativamente el ARNm y la expresión de proteína YAP1 en las células HepG2, MHCC97H (P<0,05, P<0,01), mientras que la expresión de ARNm y proteína SIRT5 aumenta significativamente (P<0,05, P<0,01). Los resultados del docking molecular muestran una buena capacidad de unión entre YAP1 y SIRT5, así como entre los principales componentes activos de la sangre y YAP1, SIRT5. Conclusión: La sangre se espesa al regular el eje de señal YAP1/SIRT5, interviniendo en el metabolismo del ácido succínico y la acetilación del ácido succínico, reforzando el efecto inhibitorio sobre las células cancerosas hepáticas.

关键词

hepatocellular carcinoma;Xiayuxue Tang;succinate;succinylation;yes-associated protein 1 (YAP1);sirtuin 5 (SIRT5)

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