Establecimiento y evaluación del modelo de ratones isquémicos de agotamiento de qi y yin basado en la metabolómica

YUAN Yue ,  

GAO Yunxiao ,  

ZHANG Qiuyan ,  

CHEN Xiaoxiao ,  

SHI Yali ,  

HU Longxiao ,  

LIU Jianxun ,  

REN Junguo ,  

摘要

Métodos de inducción del modelo de ratones isquémicos de agotamiento de qi y yin con la uricana y el método de fotoquímica combinada, y evaluación biológica básica del modelo establecido. Las 40 ratones C57BL6/J se distribuyeron al azar en un grupo normal y un grupo modelo, cada uno con 20 ratones. El grupo normal no recibió tratamiento, el grupo modelo recibió una inyección intraperitoneal de STZ (55 mg/kg-1) una vez al día durante 5 días consecutivos. Después de la inducción de STZ, 14 días después, se seleccionaron al azar 10 ratones del grupo normal para formar el grupo fotoquímico, y 10 ratones del grupo modelo se seleccionaron al azar para formar el grupo STZ + fotoquímico. Se inyectó una solución de rosa bengala (125 mg/kg-1) en combinación con una irradiación láser a 520 nm para inducir trombosis en los ratones y provocar un ictus. Se evaluaron cambios en los indicadores de qi y yin en los ratones, incluyendo observaciones generales del estado de salud, masa corporal, fuerza de agarre, temperatura rectal, pruebas de comportamiento, metabolismo energético, valores R, G y B de la lengua, contenido de ATP, factor de liberación corticotrópica, nivel de triyodotironina, etc.; y se evaluó el cambio patológico del ictus en los ratones midiendo los niveles de SOD, IL-1β, IL-6, TNF-α en el suero sanguíneo y usando la escala de Bederson. Por último, se utilizó el método de cromatografía líquida-ionización de electrospray de alta eficiencia-espectrometría de masas de tiempo de vuelo (UPLC-Q-TOF-MS) para detectar los metabolitos endógenos de los ratones. Se realizó un análisis estadístico multivariado utilizando el método de análisis discriminante de factores parciales (PLS-DA) y el método de análisis discriminante de factores ortogonales parciales (OPLS-DA) para identificar los metabolitos diferenciales con criterios de selección de datos: valor VIP > 1, factor de diferencia (FC) < 0,8 o> 1,2, P < 0,05, obtener metabolitos diferenciales, y utilizar el sitio web Metabo Analyst 3.0 para enriquecer las vías metabólicas de los metabolitos diferenciales para explorar el perfil metabólico y la base biológica de los ratones isquémicos de agotamiento de qi y yin. Resultados Con respecto a los indicadores de qi y yin, en comparación con el grupo normal, los ratones del grupo modelo mostraron una reducción de la masa corporal, un aumento de la temperatura rectal, una disminución de la capacidad motora de las extremidades y la eficiencia del metabolismo energético, una disminución del contenido de ATP, una disminución de los valores R, G, B de la lengua, una disminución de la velocidad de regulación de la glucosa en sangre (P < 0,05, P < 0,01). Con respecto a los indicadores de enfermedad, en comparación con el grupo normal, se observaron puntuaciones de Bederson, una disminución de la fuerza de agarre, una disminución de los niveles de SOD y un aumento de los niveles de factores inflamatorios en los grupos fotoquímico y STZ + fotoquímico (P < 0,05). Los resultados de la detección metabolómica mostraron un buen modelo de separación de componentes entre los grupos de ratones, con diferencias significativas entre los componentes. Tras la identificación de los datos de espectrometría de masa, se identificaron 44 metabolitos diferenciales en los ratones isquémicos de agotamiento de qi y yin, incluidos 32 metabolitos al alza, principalmente lípidos triacilglicéridos, diacilgliceroles, fosfolípidos y amidas lipídicas neuronales; 12 metabolitos a la baja, principalmente aminoácidos y fosfatos. El enriquecimiento de las vías metabólicas de los metabolitos diferenciales reveló que estas vías estaban principalmente asociadas a la biosíntesis del ácido fólico, a la biosíntesis del esqueleto terpeno, al metabolismo de los fosfolípidos glicerol, al metabolismo de la vitamina B6 y a las vías de metabolismo de los lípidos glicerol y esfingolípidos, y estas vías estaban principalmente implicadas en el transporte lipídico, la resistencia a la insulina y el metabolismo energético, entre otros procesos internos. Conclusiones El método de inducción STZ combinado con la fotoquímica puede establecer con éxito un modelo de ratones isquémicos de agotamiento de qi y yin, e intervenir en la biosíntesis del ácido fólico del esqueleto terpeno, el metabolismo de los fosfolípidos glicerol, el metabolismo de la vitamina B6 y las vías de metabolismo de los lípidos glicerol y esfingolípidos, y otros procesos internos.

关键词

método fotoquímico; ictus; agotamiento de qi y yih; combinación de enfermedades; metabolómica; uricana (STZ)

阅读全文