Detección molecular cuantitativa de la angélica china y sus productos procesados basada en el método Herb-Q

ZHANG Mingyu ,  

JIANG Wenjun ,  

JI Baoyu ,  

WANG Yue ,  

ZHANG Haitao ,  

ZHANG Haobo ,  

FENG Xue ,  

LI Xiwen ,  

摘要

Objetivo: La angélica china (当归), como un medicamento tradicional ampliamente utilizado, presenta frecuentes fenómenos de adulteración en el mercado, lo que afecta gravemente la eficacia clínica de las preparaciones. Actualmente, la tecnología para la identificación cualitativa de adulteraciones ya está bastante madura, pero los métodos cuantitativos para detectar adulteraciones en los productos procesados aún no están desarrollados. Este estudio realiza una investigación cuantitativa utilizando como ejemplo la angélica china y su análogo cercano y frecuentemente falsificado, “tu dang gui” (angélica coreana), con el fin de establecer un método cuantitativo molecular para detectar hierbas (Herb-Q), sirviendo como un modelo para el desarrollo de técnicas cuantitativas para la angélica y sus productos relacionados con la salud. El método se basa en el cribado de sitios específicos de polimorfismos de nucleótido único (SNP) en el genoma completo del cloroplasto de la angélica china y coreana. Los sitios específicos de la angélica fueron seleccionados para el estudio metodológico cuantitativo utilizando polvos mezclados de hierbas con diferentes proporciones de adulteración (linealidad, límite de cuantificación, límite de detección y reproducibilidad). Se utilizaron tres diferentes proporciones de adulteración (15%, 25%, 35%) en un polvo de la fórmula activa para verificar la precisión del método Herb-Q en la detección cuantitativa de medicinas chinas que contienen angélica. Resultados: Al comparar 123 secuencias del genoma del cloroplasto del género Angelica, con base en la conservación intraespecífica, la especificidad interespecífica y los requisitos para la secuenciación de pirosecuenciación de alto rendimiento, se determinaron como sitios moleculares específicos el sitio 9674 (A/G) en NC_042826.1 y el sitio 38592 (T/C) en NC_029393.1 para la angélica china y coreana, respectivamente. Se seleccionó el sitio específico de la angélica 9674 (A/G) para la relación lineal establecida con el método Herb-Q, presentando un valor R²=0.9974 (>0.99), demostrando una buena linealidad. El límite de cuantificación y el límite de detección fueron ambos del 2.0%, con buena reproducibilidad (desviación estándar relativa (RSD) <2.0%). El sistema cuantitativo basado en Herb-Q detectó la cantidad de adulteración de angélica coreana en el polvo de la fórmula activa, con un error medio del 1.3% en tres repeticiones moleculares. Conclusión: Este estudio muestra que el método de detección cuantitativa Herb-Q basado en el sitio 9674 (A/G) del genoma del cloroplasto NC_042826.1 de la angélica china posee buena aplicabilidad, objetividad y precisión para la angélica china, la “tu dang gui” y sus productos procesados, proporcionando soporte técnico para la detección cuantitativa de productos derivados de angélica disponibles en el mercado, como preparaciones medicinales chinas, suplementos dietéticos y productos para la salud.

关键词

Método de detección molecular cuantitativa de hierbas (Herb-Q); angélica china; adulteración; secuenciación con pirosecuenciación; estudio cuantitativo

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