Objetivo: El promotor U6 es un elemento clave que impulsa la expresión del ARN guía (sgRNA) en el sistema de edición genética CRISPR/Cas9 en plantas dicotiledóneas; se compone de secuencias palindrómicas cortas repetidas (CRISPR). Los promotores U6 endógenos de la especie suelen tener una actividad de transcripción más alta, lo que mejora significativamente la eficiencia de la edición genética. Este estudio tiene como objetivo identificar los promotores U6 endógenos en Artemisia annua para optimizar su sistema CRISPR/Cas9, lo cual tiene gran importancia para la mejora molecular de esta planta. Métodos: Basados en la secuencia altamente conservada del snRNA U6 de Arabidopsis, se seleccionaron secuencias de promotores U6 endógenos del genoma completo de Artemisia annua. Luego se construyeron vectores recombinantes con el gen de luciferasa (LUC) bajo el control de promotores U6 candidatos, se realizó una transformación transitoria en tabaco y se evaluó la actividad de transcripción de cada promotor mediante imagenología in vivo y un sistema de reporte de luciferasa doble. Resultados: Se clonaron con éxito 8 promotores U6 endógenos de Artemisia annua. El análisis de secuencias mostró que estos promotores contienen elementos cis conservados, USE y caja TATA, que afectan su actividad transcriptional. La detección por luciferasa doble mostró que la actividad de transcripción de AaU6-3, AaU6-1 y AaU6-5 fue significativamente mayor que AtU6-26 de Arabidopsis, siendo AaU6-3 el de mayor actividad. Conclusión: Este estudio identificó tres promotores U6 endógenos con alta actividad transcripcional en Artemisia annua, proporcionando elementos funcionales importantes para construir un sistema eficaz de edición génica, ayudando a promover la mejora molecular precisa y la innovación de recursos genéticos de calidad en Artemisia annua.

Artemisia annua;promotor U6;actividad transcripcional