Influencia de la percepción de Apaf1 en las vías de apoptosis/pirptosis mediadas por MPT sobre la acumulación lipídica en hepatocitos y la intervención con sopa Diti Tang

ZHU Jingxuan ,  

SONG Nan ,  

LIU Yu ,  

DONG Yuanguang ,  

JIA Lianqun ,  

PEI Yupeng ,  

摘要

El objetivo es investigar si la sopa Diti Tang (DTT) mejora la acumulación de lípidos en hepatocitos inducida por ácido oleico (OA) mediante la regulación del factor activador de caspasa 1 (Apaf1), que detecta la transición de permeabilidad mitocondrial (MPT) que media las vías de apoptosis/pirptosis. Método: las células de carcinoma hepatocelular humano (HepG2) se indujeron con 800 μmol/L de OA para construir un modelo de acumulación lipídica en hepatocitos. Se seleccionaron las mejores condiciones de intervención para suero con DTT e inhibidor de Apaf1 ZYZ488 mediante pruebas de proliferación y viabilidad celular (CCK-8). Las células HepG2 se dividieron en grupo control, OA (800 μmol/L), OA (800 μmol/L) + suero control (SC) (10 %), OA (800 μmol/L) + DTT (10 %), OA (800 μmol/L) + ZYZ488 (1 μmol/L). Se evaluaron los cambios en la acumulación lipídica en hepatocitos mediante tinción con Oil Red O, y la detección de niveles de triglicéridos (TG) y ácidos grasos libres no esterificados (NEFA); la apertura del poro de transición de permeabilidad mitocondrial (MPTP) y el cambio del potencial de membrana mitocondrial mediante tinción fluorescente con Calcein AM y JC-1; el conteo de células apoptóticas y pirptóticas mediante citometría de flujo; la expresión de Apaf1, GSDME, PARP1, Caspasa-3, Caspasa-4, Caspasa-9 mediante PCR cuantitativa en tiempo real; la expresión de Apaf1 mediante inmunofluorescencia; y el análisis de proteínas Apaf1, GSDME, PARP1, Caspasa-3, Caspasa-4, Caspasa-9, Caspasa-3 clivado y Caspasa-9 clivado mediante Western blot. Resultados: el suero que contiene DTT redujo significativamente los niveles de TG y NEFA inducidos por OA en células HepG2 (P<0,01), mejorando efectivamente la acumulación de gotas lipídicas en hepatocitos. El suero DTT inhibió la apertura excesiva de MPTP y la disminución del potencial de membrana mitocondrial (P<0,01). Además, redujo significativamente la expresión de proteínas clave y ARNm en las vías de apoptosis (Caspasa-9/Caspasa-3/PARP1) y pirptosis (Caspasa-4/Caspasa-3/GSDME) mediadas por Apaf1 (P<0,05), con efectos similares a ZYZ488. Conclusión: la sopa Diti Tang puede mejorar la acumulación lipídica en hepatocitos mediante la inhibición de las vías de apoptosis y pirptosis mediadas por Apaf1 que detecta MPT.

关键词

acumulación lipídica en hepatocitos;sopa Diti Tang;factor activador de caspasa 1 (Apaf1);poro de transición de permeabilidad mitocondrial (MPT);apoptosis;pirptosis

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