Mecanismo de regulación de la fórmula Mimenghua de la vía de señalización MEK/Ras/Raf/ERK en la respuesta inflamatoria de un modelo animal de ojo seco

TAN Shi ,  

LIU Pei ,  

ZHONG Yuan ,  

TIAN Sainan ,  

JIANG Pengfei ,  

QIN Genyan ,  

PENG Qinghua ,  

PENG Jun ,  

摘要

El objetivo es explorar el papel y el mecanismo de la fórmula Mimenghua en la regulación de la vía de señalización de la quinasa activada por mitógenos (MEK)/oncogén de sarcoma de rata (Ras)/quinasa de sarcoma de fibroblastos acelerada rápida (Raf)/quinasa reguladora de señales extracelulares (ERK) para inhibir la respuesta inflamatoria en un modelo animal de ojo seco. Se seleccionaron 60 ratones C57BL/6J de 8 semanas de edad, mitad machos y mitad hembras, y se eligieron aleatoriamente 10 como grupo en blanco, mientras que los 50 restantes fueron expuestos a un sistema seco controlado y se les administraron gotas oftálmicas con solución de cloruro de benzalconio al 0.2% en el ojo durante 4 semanas para establecer el modelo de ojo seco. Después de la creación exitosa del modelo, los ratones se dividieron aleatoriamente en grupo modelo, grupo con ácido hialurónico, grupo con dosis baja de la fórmula Mimenghua (4.83 g/kg), grupo con dosis media (9.67 g/kg) y grupo con dosis alta (19.34 g/kg). El grupo modelo recibió una cantidad igual de solución salina fisiológica por vía oral durante 4 semanas, y el grupo con ácido hialurónico recibió gotas oculares dos veces al día durante 14 días consecutivos. Cada dos semanas se midieron la secreción lacrimal, el tiempo de ruptura de la película lagrimal y la fluorescencia corneal en cada grupo. Después de 4 semanas de tratamiento, los ratones fueron sacrificados y se extrajeron las glándulas lagrimales y la córnea para observación histológica con tinción de hematoxilina-eosina (HE), detección de expresión proteica de MEK, Ras, Raf, ERK mediante Western blot, detección de expresión de MEK, Ras, Raf, ERK e interleucina-1β (IL-1β) en glándulas lagrimales y córnea mediante ELISA, y detección de expresión de ARNm de MEK, Ras, Raf, ERK mediante PCR en tiempo real (Real-time PCR). Los resultados mostraron un aumento significativo en la secreción lacrimal después del tratamiento en los grupos de fórmula Mimenghua y ácido hialurónico (P<0.05), así como un tiempo de ruptura de la película lagrimal significativamente prolongado (P<0.05). Se observó recuperación de las lesiones superficiales del ojo en los ratones. Los resultados de Western blot mostraron una disminución significativa en la expresión de proteínas MEK, Ras, Raf, ERK en tejidos de glándulas lagrimales y córnea en los grupos de ácido hialurónico y dosis alta de fórmula Mimenghua (P<0.05). Los resultados de ELISA mostraron que el nivel de IL-1β fue más alto en el grupo modelo y disminuyó significativamente en los grupos de ácido hialurónico y fórmula Mimenghua (P<0.05). Los resultados de ELISA y PCR en tiempo real mostraron aumentos significativos de MEK, Ras, Raf, ERK en tejidos de córnea y glándulas lagrimales en el grupo modelo (P<0.05), y una reducción significativa en la expresión de estos en los grupos de ácido hialurónico y fórmula Mimenghua (P<0.05), indicando que la fórmula Mimenghua puede reducir la expresión de MEK, Ras, Raf, ERK en tejidos de glándulas lagrimales y córnea. Conclusión: La fórmula Mimenghua puede aumentar la secreción lacrimal, prolongar el tiempo de ruptura de la película lagrimal y promover la reparación corneal inhibiendo la vía de señalización MEK/Ras/Raf/ERK en tejidos corneales y lagrimales, aliviando la respuesta inflamatoria.

关键词

ojo seco;fórmula Mimenghua;respuesta inflamatoria;cornea;glándula lagrimal

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