Estudio del mecanismo por el cual Er Chen Tang repara la barrera inmunológica ileal y mejora la masa corporal de ratones obesos inducidos por la dieta basado en transcriptómica unicelular

CHEN Jiawei ,  

LIU Maohui ,  

CHEN Jilan ,  

ZHU Jiushuang ,  

MEI Yingxiu ,  

JIN Yue ,  

XIA Xiuwen ,  

DING Weijun ,  

摘要

El objetivo es investigar el efecto de la decocción Er Chen Tang en la mejora de la masa corporal de ratones con obesidad simple inducida por una dieta alta en grasas y el mecanismo de acción. Método: primero, se utilizó la transcriptómica de células individuales (Sc-RNAseq) para analizar los cambios en los niveles de transcripción en el tejido íleon de ratones del grupo normal y del grupo modelo de obesidad inducida por dieta alta en grasas. Luego, se construyó un modelo de ratón con obesidad simple mediante alimentación con dieta alta en grasas. Los ratones modelados con éxito se dividieron aleatoriamente en el grupo modelo y grupos de dosis baja, media y alta de Er Chen Tang (7.5, 15, 30 g·kg-1), con 8 ratones por grupo, y se tomaron 8 ratones de la misma edad como grupo normal. Se midió la masa corporal en momentos fijos durante 4 semanas de administración por gavage. La prueba de tolerancia a la glucosa, el comportamiento, la tinción con hematoxilina y eosina (HE) y las pruebas bioquímicas evaluaron la eficacia general de Er Chen Tang para mejorar la obesidad. El acoplamiento proteico predijo el grado de unión entre las proteínas correspondientes. El acoplamiento molecular predijo el grado de unión entre los componentes clave de Er Chen Tang y las proteínas diana. La reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa en tiempo real (PCR en tiempo real) detectó los niveles de expresión del ARNm de TNF-α, iNOS, IL-1β, CD68, CD206, ZO-1 y Claudin-5 en el íleon. La inmunofluorescencia observó la expresión y distribución de Claudin-5 y ZO-1. Resultados: los resultados preliminares de la secuenciación unicelular indicaron que en comparación con el grupo normal, el análisis GO de genes diferenciales de células inmunes del grupo modelo se enriqueció principalmente en funciones biológicas relacionadas con el metabolismo de lípidos e inflamación, así como la vía inflamatoria JAK/STAT. En comparación con el grupo normal, el grupo modelo mostró un aumento significativo de la masa corporal (P<0.01), un aumento significativo de los niveles de glucosa en sangre (P<0.01), una disminución significativa de la fuerza de las extremidades (P<0.01), un aumento notable de la masa hepática (P<0.05), un aumento notable de ALT y AST séricos (P<0.05, P<0.01), un aumento de las vacuolas grasas hepáticas, un aumento notable del volumen de adipocitos en el tejido adiposo blanco epididimal e inguinal, y un aumento de la inflamación; en comparación con el grupo modelo, los grupos de diferentes dosis de Er Chen Tang mostraron una disminución significativa de la masa corporal (P<0.01), una reducción significativa de los niveles de glucosa en sangre (P<0.01), un aumento notable de la fuerza de las extremidades (P<0.05, P<0.01), una disminución notable de la masa hepática (P<0.05, P<0.01), una reducción significativa de ALT y AST séricos (P<0.05, P<0.01), una reducción de las vacuolas grasas hepáticas, una disminución notable del volumen de adipocitos en el tejido adiposo blanco epididimal e inguinal, y una mejora de la inflamación. Existe la posibilidad de interacción entre las proteínas CD68 y ZO-1, Claudin-5, así como entre CD206 y ZO-1, Claudin-5. Los componentes clave de Er Chen Tang, Nobiletina, Diosmetina y Naringenina, mostraron una fuerte energía de unión con las proteínas diana ZO-1 y Claudin-5. En comparación con el grupo normal, en el grupo modelo hubo un aumento significativo en la expresión de ARNm de genes proinflamatorios TNF-α, iNOS, IL-1β, CD68 (P<0.05, P<0.01) y una disminución significativa en la expresión de ARNm del gen antiinflamatorio CD206 (P<0.01), así como una disminución significativa en la expresión de ARNm de genes de proteínas de unión estrecha Claudin-5 y ZO-1 (P<0.05, P<0.01); en comparación con el grupo modelo, los grupos de diferentes dosis de Er Chen Tang mostraron una disminución significativa en la expresión de ARNm de genes proinflamatorios TNF-α, iNOS, IL-1β, CD68 (P<0.05, P<0.01), un aumento significativo en la expresión de ARNm del gen antiinflamatorio CD206 (P<0.05, P<0.01), y un aumento significativo en la expresión de ARNm de genes Claudin-5 y ZO-1 (P<0.05, P<0.01). En comparación con el grupo normal, la expresión proteica de Claudin-5 y ZO-1 disminuyó significativamente en el grupo modelo (P<0.01); en comparación con el grupo modelo, la expresión proteica de Claudin-5 y ZO-1 aumentó significativamente en los grupos de diferentes dosis de Er Chen Tang (P<0.05, P<0.01). Conclusión: Er Chen Tang puede mejorar significativamente el aumento de la masa corporal inducido por una dieta alta en grasas, y su mecanismo puede estar relacionado con la mejora del ambiente inflamatorio del íleon, mejorando así la barrera inmunológica ileal dañada.

关键词

obesidad; tejido adiposo; inflamación; barrera inmunológica; proteínas de unión estrecha

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