Construcción y análisis de las características biológicas del modelo animal de metástasis de cáncer de colon con síndrome de deficiencia de bazo, calor y humedad
El objetivo es construir y evaluar un modelo animal de metástasis de cáncer de colon (CRC) con deficiencia de bazo, calor y humedad, y síndrome de toxina sanguínea, y analizar las características biológicas del modelo. Los métodos incluyen la asignación aleatoria de 30 ratones BALB/c al grupo de cirugía ficticia, grupo modelo y grupo de síndrome de deficiencia de bazo, calor y humedad (PXSRYD). Los ratones del grupo de cirugía ficticia solo fueron operados sin inyección, los ratones del grupo modelo recibieron una inyección de 1×106 células CT26 en la cecum, y el grupo PXSRYD se les aplicó un modelo de síndrome con dieta descontrolada + exceso de trabajo + alto contenido de azúcar y grasa + alta temperatura y humedad. Se elaboró una tabla de puntuación macroscópica de caracterización de síntomas para evaluar el estado general de los ratones. Se examinó la situación de los tumores in situ y las metástasis hepáticas, se examinaron las características patológicas de los tumores in situ y las metástasis hepáticas mediante la tinción de hematoxilina y eosina (HE), se examinaron los marcadores relacionados con la invasión tumoral como el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), la metaloproteasa de matriz (MMP)-2, MMP-9, entre otros, mediante inmunohistoquímica (IHC), se midió el contenido de D-xilosa mediante el método orcinol, se midieron los niveles de lípidos en suero mediante el método de placa, se evaluó la infiltración de macrófagos relacionados con tumores (TAM) mediante citometría de flujo (FCM) y fluorescencia de inmunohistoquímica (IF), se midió la expresión de ARNm de los marcadores de diferenciación clúster 86 (CD86), óxido nítrico sintasa inducible (iNOS), clúster 163 de diferenciación (CD163), clúster 206 de diferenciación (CD206) mediante reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa de fluorescencia en tiempo real (PCR en tiempo real), y se analizaron las características biológicas del modelo mediante el método ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA) para detectar los niveles de interleucina (IL)-10, IL-17, y factor de quimiocinas ligando 4 (CXCL4). Resultados: en términos de la evaluación macroscópica de los síntomas, en comparación con el grupo de cirugía ficticia, la puntuación de síntomas del grupo modelo aumentó (P<0.01), mientras que en comparación con el grupo modelo, la puntuación de síntomas del grupo PXSRYD aumentó significativamente (P<0.01); En cuanto a las características biológicas, en comparación con el grupo de cirugía ficticia, el volumen y la masa tumoral del grupo modelo aumentaron (P<0.01), el número y el área de las metástasis hepáticas aumentaron (P<0.05), las células del tejido tumoral local estaban densamente dispuestas, con núcleos grandes, tinción profunda, mitosis atípica, núcleos anómalos, y el área de tinción positiva para el antígeno nuclear de proliferación celular Ki67 aumentó (P<0.01), los niveles de densidad óptica media (AOD) de VEGF, MMP-2, MMP-9 aumentaron (P<0.05, P<0.01), no hubo diferencias estadísticamente significativas en el contenido de D-xilosa, los niveles de colesterol total (TC), triglicéridos (TG) y lipoproteínas de baja densidad (LDL-C) aumentaron, y el nivel de lipoproteínas de alta densidad (HDL-C) disminuyó (P<0.01), la proporción de TAM CD86+ y CD206+ disminuyó en la lavado peritoneal y el tejido tumoral in situ, respectivamente (P<0.05, P<0.01), la expresión de ARNm de CD86, iNOS disminuyó, y la expresión de ARNm de CD206 aumentó en el tejido tumoral in situ (P<0.01), no hubo diferencias estadísticamente significativas en la expresión de ARNm de CD163, los niveles de IL-10, IL-17 aumentaron (P<0.01), no hubo diferencias estadísticamente significativas en los niveles de CXCL4; en comparación con el grupo modelo, no hubo diferencias estadísticamente significativas en el volumen y la masa tumoral del grupo PXSRYD, pero el número y el área de las metástasis hepáticas aumentaron significativamente (P<0.01), las células del tejido tumoral local estaban más densamente dispuestas, con núcleos grandes, tinción profunda, mitosis atípica, núcleos anómalos, y el área de tinción positiva para el antígeno nuclear de proliferación celular Ki67 aumentó significativamente (P<0.01), los niveles de densidad óptica media (AOD) de VEGF, MMP-2, MMP-9 aumentaron (P<0.01), el contenido de D-xilosa disminuyó significativamente (P<0.01), los niveles de colesterol total (TC), triglicéridos (TG) y lipoproteínas de baja densidad (LDL-C) aumentaron, y el nivel de lipoproteínas de alta densidad (HDL-C) disminuyó significativamente (P<0.01), la proporción de TAM CD86+ y CD206+ aumentó significativamente en el lavado peritoneal y el tejido tumoral in situ, respectivamente (P<0.01), la expresión de ARNm de CD206 aumentó significativamente, y la expresión de ARNm de CD86, iNOS disminuyó significativamente, CD163 no mostró diferencias estadísticamente significativas en la expresión de ARNm, los niveles de IL-10, IL-17, CXCL4 aumentaron significativamente (P<0.01). Conclusión: el modelo de metástasis de cáncer de colon preparado mediante inyección en la cecum y un modelo de síndrome con dieta descontrolada + exceso de trabajo + alto contenido de azúcar y grasa + alta temperatura y humedad presenta características de síndrome de deficiencia de bazo, calor y humedad, así como cambios significativos en las características patológicas, marcadores de invasión tumoral, marcadores inmunológicos del tumor, entre otros, y puede usarse como uno de los estándares de evaluación biológica.
关键词
Cáncer de colon; Metástasis; Síndrome de deficiencia de bazo, calor y humedad; características biológicas