El objetivo es explorar el efecto y mecanismo del polvo Taishan Panshi (TSPSP) en la inhibición del daño por estrés oxidativo en células del trofoblasto humano (HTR-8/SVneo), y comprender el mecanismo terapéutico de TSPSP para el aborto espontáneo (SA). Se utilizaron bases de datos clínicas (GEO) para el análisis diferencial de genes en SA y su vinculación con el estrés oxidativo, farmacología de redes para filtrar los componentes activos de TSPSP, construir una red «hierba-componente-objetivo-enfermedad» y predecir el mecanismo de acción de TSPSP. En experimentos in vitro, las células del trofoblasto HTR-8/SVneo se dividieron en grupo control, grupo modelo, grupos con suero medicado TSPSP al 2.5%, 5%, 10% y grupo inhibidor del factor Nrf2 (ML385, 30 μmol·L⁻¹). Excepto el grupo control, los demás se estimularon con 150 μmol·L⁻¹ H_2O_2 durante 3 h para construir un modelo de daño por estrés oxidativo celular. Tras el modelado, el grupo control y modelo recibieron 10% de suero control, los grupos suero medicado recibieron sus concentraciones respectivas, el grupo inhibidor Nrf2 recibió 10% de suero TSPSP más 30 μmol·L⁻¹ de ML385. Las células se cultivaron 24 h bajo estas condiciones y se recolectaron para análisis posteriores. La actividad proliferativa celular se midió por CCK-8, la migración celular por ensayo de raspado, los niveles de MDA, Fe^2+, GSH por ELISA; los niveles intracelulares de ROS con sonda fluorescente (DCF-DA); las expresiones de proteínas y ARNm de KEAP1, Nrf2, FoxO3 por inmunofluorescencia y PCR en tiempo real; los niveles proteicos de KEAP1, Nrf2, FoxO3, GPX4, SOD por Western blot. Los resultados de la base GEO indicaron que los genes KEAP1, Nrf2, FoxO3 están relacionados con la enfermedad; tras cruzar con rutas de estrés oxidativo, se obtuvieron 9 rutas significativamente diferenciales (P<0.05), incluyendo 3 que contienen Nrf2, FoxO3. La farmacología de redes identificó 246 objetivos de componentes activos TSPSP y 2804 objetivos relacionados con SA; tras intersección, 154 objetivos potenciales. El análisis topológico mostró valores altos para KEAP1, Nrf2; los análisis GO y KEGG indicaron que los objetivos comunes están principalmente involucrados en la respuesta al estrés oxidativo y vías de señalización FoxO y MAPK. In vitro, en comparación con el control, la viabilidad celular en el grupo modelo disminuyó significativamente (P<0.01); en los grupos TSPSP aumentó significativamente (P<0.01); en el grupo ML385 disminuyó a aproximadamente 70% (P<0.01). En el modelo aumentaron MDA, Fe^2+, ROS, disminuyeron GSH y migración (P<0.01); aumentó la expresión de proteína y mRNA de KEAP1, FoxO3 y disminuyó de Nrf2, GPX4, SOD (P<0.01). En comparación con el modelo, en los grupos TSPSP disminuyeron MDA, Fe^2+, ROS, aumentaron GSH y migración; con ML385 se revirtieron estas tendencias (P<0.05, P<0.01). Conclusión: TSPSP puede inhibir el daño por estrés oxidativo en células del trofoblasto inducido por H_2O_2, el mecanismo probablemente relacionado con la activación de la vía señalizadora KEAP1/Nrf2/FoxO3.

Polvo Taishan Panshi; aborto espontáneo; proteína Kelch relacionada con ECH/factor nuclear E2 relacionado 2/proteína FoxO3 (KEAP1/Nrf2/FoxO3); trofoblasto humano; daño por estrés oxidativo