El objetivo es explorar el papel y el mecanismo de la pulverización Taishan Panshi (TSPSP) en la inhibición del daño por estrés oxidativo en las células trofoblásticas humanas (HTR-8/SVneo), y comprender el mecanismo del tratamiento con TSPSP para el aborto espontáneo (SA). Se realizó un análisis diferencial de genes relacionado con SA a través de la base de datos clínica (GEO), asociado con estrés oxidativo. Mediante farmacología de redes, se seleccionaron los componentes activos de TSPSP y se construyó una red “medicina tradicional china - componentes - objetivos - enfermedad” para predecir el mecanismo de acción de TSPSP. In vitro, las células HTR-8/SVneo se dividieron en grupo blanco, grupo modelo, grupos con sueros que contienen TSPSP 2.5%, 5%, 10%, y un grupo inhibidor de Nrf2 (ML385, 30 μmol/L). Excepto el grupo blanco, los demás fueron estimulados con H2O2 (150 μmol/L) por 3 horas para inducir el modelo de daño oxidativo. Tras confirmarse el modelo, los grupos blanco y modelo recibieron 10% de suero vacío, los grupos TSPSP recibieron sueros con las concentraciones respectivas, y el grupo inhibidor recibió 30 μmol/L ML385 además del suero TSPSP 10%. Las células se cultivaron durante 24 h y se recogieron muestras. Se evaluó la proliferación celular (CCK-8), la migración (ensayo de herida), los niveles de MDA, Fe2+, GSH (ELISA), ROS intracelular (DCF-DA), expresión proteica y de ARNm de KEAP1, Nrf2, FoxO3 (inmunofluorescencia, PCR en tiempo real), así como niveles proteicos de KEAP1, Nrf2, FoxO3, GPX4, SOD (Western blot). El análisis GEO mostró que los genes KEAP1, Nrf2 y FoxO3 están asociados con la enfermedad; se identificaron 9 vías significativas relacionadas con el estrés oxidativo (P<0.05), incluyendo 3 que involucran a Nrf2 y FoxO3. La farmacología de redes identificó 246 objetivos activos de TSPSP y 2804 para SA, con 154 objetivos potenciales en intersección. El análisis topológico mostró alta relevancia de KEAP1, Nrf2; el análisis GO y KEGG indicó que los objetivos están involucrados en la respuesta al estrés oxidativo, las vías FoxO y MAPK. Experimentalmente, el modelo mostró una significativa disminución en la viabilidad celular (P<0.01), la viabilidad aumentó con TSPSP (P<0.01); ML385 la redujo a ~70% (P<0.01). Los niveles de MDA, Fe2+, ROS aumentaron y GSH y migración disminuyeron en el modelo (P<0.01). KEAP1 y FoxO3 proteína y ARNm aumentaron, mientras que Nrf2, GPX4 y SOD disminuyeron (P<0.01). TSPSP invirtió estos cambios (P<0.01); ML385 revirtió los efectos de TSPSP (P<0.05). Conclusión: TSPSP inhibe el daño oxidativo inducido por H2O2 en células trofoblásticas a través de la activación de la vía KEAP1/Nrf2/FoxO3.

Pulverización Taishan Panshi; aborto espontáneo; proteína Kelch-like ECH-associated protein 1/factor nuclear E2 relacionado/proteína FoxO3 (KEAP1/Nrf2/FoxO3) vía de señalización; células trofoblásticas humanas; daño por estrés oxidativo