El objetivo es explorar el efecto de la fórmula de eliminación de estasis y desintoxicación sobre las células endoteliales microvasculares cerebrales (BMECs) después del daño por privación de glucosa y oxígeno (OGD) y el mecanismo de intervención. Método: uso de un kit de detección de recuento de proliferación celular (CCK-8) para determinar el tiempo de OGD, selección de la concentración efectiva de suero medicado de la fórmula; las células se dividieron aleatoriamente en grupo de medio de cultivo con suero en blanco (KBXQ), grupo modelo (OGD), grupo HYXQ (OGD + suero medicado con la fórmula), grupo 3-metiladenina (3-MA) (OGD + 3-MA). Observación de la morfología celular bajo microscopio invertido; observación del número de autofagosomas y autolisosomas dentro de las células bajo microscopio electrónico; detección de la tasa de supervivencia celular mediante el método CCK-8; detección de la tasa de apoptosis mediante la técnica de marcado terminal in situ (TUNEL); detección de la expresión proteica de LC3 y Occludin mediante inmunofluorescencia; medición de la permeabilidad de monocapa celular. Las células se dividieron aleatoriamente en grupos KBXQ, modelo (OGD), HYXQ, inhibidor de fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K) (LY294002) (OGD + LY294002), HYXQ + LY294002 (OGD + suero medicado con fórmula + LY294002). La técnica Western blot se usó para detectar los niveles de expresión de las moléculas clave de autofagia Beclin1, LC3Ⅱ/LC3Ⅰ, p62, Occludin, p-PI3K, PI3K, p-Akt, Akt, p-mTOR y mTOR. Se eligieron 6 h de OGD como condición óptima y 5% como concentración óptima de suero medicado. En comparación con el grupo KBXQ, el grupo modelo mostró daños celulares evidentes bajo el microscopio invertido, aumentó notablemente el número de autofagosomas y autolisosomas dentro de la célula bajo el microscopio electrónico, la tasa de supervivencia celular disminuyó significativamente (P<0.01), la tasa de apoptosis aumentó significativamente (P<0.01), la intensidad de fluorescencia de la proteína LC3 aumentó significativamente (P<0.01), la intensidad de fluorescencia de la proteína Occludin disminuyó significativamente (P<0.01), y la permeabilidad de la monocapa celular aumentó significativamente (P<0.01); en comparación con el grupo modelo, los grupos HYXQ y 3-MA mejoraron significativamente el daño celular, el número de autofagosomas y autolisosomas dentro de la célula se redujo considerablemente, la tasa de supervivencia celular aumentó significativamente (P<0.01), la tasa de apoptosis disminuyó significativamente (P<0.01), la intensidad de fluorescencia de la proteína LC3 disminuyó significativamente (P<0.01), la intensidad de fluorescencia de la proteína Occludin aumentó significativamente (P<0.01), y la permeabilidad de la monocapa celular disminuyó (P<0.05). Los resultados de Western blot mostraron que en comparación con el grupo KBXQ, el grupo modelo mostró un aumento significativo en la expresión de Beclin1 y LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (P<0.01), mientras que los niveles de p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt y p-mTOR/mTOR disminuyeron significativamente (P<0.01); en comparación con el grupo modelo, el grupo HYXQ mostró una disminución significativa en la expresión de Beclin1 y LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (P<0.01) y aumentos significativos en los niveles de p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt y p-mTOR/mTOR (P<0.01); en el grupo LY294002, la expresión de Beclin1 y LC3Ⅱ/LC3Ⅰ aumentó significativamente (P<0.05, P<0.01), mientras que los niveles de p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt y p-mTOR/mTOR disminuyeron significativamente (P<0.01); en comparación con el grupo LY294002, el grupo HYXQ + LY294002 mostró una disminución significativa en la expresión de Beclin1 y LC3Ⅱ/LC3Ⅰ (P<0.01) y aumentos significativos en los niveles de p62, Occludin, p-PI3K/PI3K, p-Akt/Akt y p-mTOR/mTOR (P<0.01). Conclusión: La fórmula de eliminación de estasis y desintoxicación tiene un efecto protector sobre las BMECs lesionadas por OGD, probablemente a través de la activación de la vía autofágica PI3K/Akt/mTOR, inhibiendo la sobreexpresión de la autofagia y protegiendo la proteína Occludin y la función de la barrera endotelial.

células endoteliales microvasculares cerebrales; autofagia; fórmula de eliminación de estasis y desintoxicación; fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K); proteína quinasa B (Akt)