Función y mecanismo de la tableta Qiangjin en la regulación de la vía de señalización Keap1/Nrf2 para reducir el daño por estrés oxidativo en varicocele

DONG Liang ,  

YANG Fang ,  

ZHANG Jingyi ,  

TANG Xinyi ,  

LI Yulin ,  

YU Xujun ,  

CHANG Degui ,  

摘要

El objetivo es explorar el mecanismo por el cual la tableta Qiangjin mejora la función espermatogénica en la varicocele (VC) a través de la vía de señalización Kelch-like ECH-associated protein 1 (Keap1)/factor nuclear eritroide 2 relacionado con el factor 2 (Nrf2) que medía el estrés oxidativo. Métodos: Se dividieron aleatoriamente 10 ratas SD en grupo en blanco y grupo modelo, y se verificó la estabilidad del modelo mediante pruebas patológicas. Se dividieron aleatoriamente 36 ratas SD en grupo blanco, grupo modelo, grupo de dosis baja de Qiangjin (0,23 g·kg^-1), grupo de dosis media (0,46 g·kg^-1), grupo de dosis alta (0,92 g·kg^-1) y grupo Maiziling (61,7 mg·kg^-1), con 6 ratas por grupo. Se estableció un modelo experimental de varicocele izquierdo (ELV) en las ratas mediante ligadura parcial de la vena renal izquierda (simulando el síndrome del exprimidor humano), con administración continua por vía oral durante 28 días, una vez al día. Se estableció un modelo de cultivo testicular in vitro mediante cámaras Transwell, con intervención usando suero medicado con Qiangjin (2,3, 4,6, 9,2 g·kg^-1). Se observó la morfología del riñón izquierdo al microscopio, se midió el diámetro de la vena espermática izquierda (LSV) con micrómetro; se registró el peso corporal semanal de las ratas y se pesaron el epidídimo y los testículos; se observaron cambios patológicos en el tejido testicular mediante tinción con hematoxilina-eosina (HE); se midieron los niveles de testosterona (T) y de especies reactivas de oxígeno (ROS) en el sobrenadante celular y el tejido testicular mediante ELISA; el contenido de ROS se analizó por citometría de flujo; se realizaron análisis inmunohistoquímicos para Keap1, Nrf2, 3β-hidroxiesteróide deshidrogenasa (3β-Hsd), proteína de unión GATA-4 (Gata-4), receptor tirosina quinasa oncogénico (C-kit); la ultraestructura tisular se observó mediante microscopía electrónica de transmisión (TEM); la apoptosis celular se detectó con la técnica TUNEL; la expresión de Keap1, Nrf2, glutatión S-transferasa α2 (Gsta2), μ1 (Gstm1), hemooxigenasa-1 (HO-1), quinona oxidorreductasa 1 (Nqo1) y tioredoxina reductasa 1 (Txnrd1) se analizó mediante PCR en tiempo real y Western blot. Resultados: en comparación con el grupo blanco, el grupo modelo mostró un aumento significativo en el contenido de ROS y el porcentaje de células apoptóticas (P<0,01), una disminución notable en la concentración de testosterona (T) (P<0,01), un aumento significativo en la expresión de ARNm y proteína Keap1 (P<0,01), y una disminución notable en la expresión de Nrf2, Gsta2, Gstm1, HO-1, Nqo1 y Txnrd1 (P<0,05). En comparación con el grupo modelo, los grupos de dosis de Qiangjin tuvieron una disminución significativa en el contenido de ROS y el porcentaje de células apoptóticas (P<0,05), una disminución significativa en la expresión de ARNm y proteína Keap1 (P<0,05), y un aumento notable en la expresión de Nrf2, Gsta2, Gstm1, HO-1, Nqo1 y Txnrd1 (P<0,05). Conclusión: El mecanismo por el cual la tableta Qiangjin mejora la función espermatogénica en la varicocele está relacionado con la regulación de la vía de señalización Keap1/Nrf2 y la reducción del daño por estrés oxidativo.

关键词

Varicocele; medicina tradicional china; daño por estrés oxidativo; proteína Kelch-like ECH-associated 1 (Keap1)/factor nuclear eritroide 2 relacionado con factor 2 (Nrf2) vía de señalización; modelo experimental in vitro

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