Estudio tridimensional "Caracterización microscópica - Análisis químico - Evaluación farmacológica" del principio de fortalecimiento del efecto de Atractylodes tostado con tierra para fortalecer el bazo y detener la diarrea
El objetivo es analizar los cambios en la microestructura, composición química y efecto contra la colitis ulcerosa (UC) antes y después del tostado con tierra del Atractylodes macrocephala (白术), para aclarar el principio de mejora del efecto "fortalecer el bazo y detener la diarrea" mediante este procesamiento. El método emplea microscopía electrónica de barrido con espectroscopía de dispersión de energía (SEM-EDS) para analizar la microestructura y composición elemental antes y después del tostado con tierra, explorando las diferencias y sus causas; se analizan e identifican los componentes químicos en Atractylodes crudo y tostado mediante cromatografía líquida ultrarrápida acoplada a espectrometría de masas de cuadrupolo de tiempo de vuelo (UPLC-Q-TOF-MS) y la plataforma de análisis de productos naturales UNIFI 1.9.2, combinadas con análisis multivariado estadístico como análisis de componentes principales (PCA) y análisis discriminante por mínimos cuadrados parciales ortogonales (OPLS-DA), para investigar las diferencias y el origen de los componentes químicos; se utiliza un modelo murino de UC inducido por sulfato de dextrano de sodio (DSS), evaluando el índice de actividad de la enfermedad (DAI) para valorar la severidad de la inflamación intestinal, observando cambios histopatológicos en el tejido del colon mediante tinción con hematoxilina y eosina (HE), midiendo niveles de factores inflamatorios por ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), analizando la expresión del gen y proteína de la barrera mucosa intestinal con PCR en tiempo real y Western blot, evaluando la diversidad del microbioma intestinal mediante tecnología 16S rRNA, y estudiando los niveles de ácidos grasos de cadena corta (SCFAs) en heces usando cromatografía de espacio de cabeza-gas cromatografía-espectrometría de masas (HS-GC-MS). Según los resultados, se investiga el efecto del tostado con tierra en las barreras biológica, química, mecánica e inmunológica en animales modelo, así como las diferencias y mecanismos de acción en la regulación de la barrera mucosa intestinal en ratones con UC. Resultados: la observación SEM mostró una abundancia de partículas de tierra en el centro focal de la superficie de Atractylodes tostada, acompañada de hinchazones en forma de burbujas, además de numerosas grietas y pliegues en la superficie de la tierra auxiliar. El análisis EDS indicó un aumento significativo en los niveles de Si, Al, Mg, Ca en Atractylodes tostada comparado con crudo, siendo estos elementos los principales componentes de la tierra. Se identificaron 132 compuestos químicos en modo iónico positivo, principalmente terpenos, polifenoles y aminoácidos; y 40 compuestos en modo iónico negativo, principalmente polifenoles y glucósidos. Los sesquiterpenos y los ácidos polifenólicos mostraron cambios evidentes antes y después del proceso. Atractylodes tostada redujo la puntuación DAI en ratones con UC, alivió el acortamiento del colon, redujo los niveles séricos de factores proinflamatorios IL-17, IL-18, IFN-γ, TNF-α, aumentó los niveles de factores antiinflamatorios sIgA, IL-10, IL-4, TNF-β, incrementó la expresión de genes y proteínas clave de la barrera intestinal (ZO-1, Occludin, Claudin-1, MUC2), mejoró la diversidad de la microbiota intestinal y los niveles de SCFAs (P<0.05, P<0.01). Atractylodes crudo y ligeramente tostado mostraron efectos similares pero más débiles, y la tierra auxiliar también mostró cierto efecto. Conclusión: El tostado con tierra puede fortalecer la acción protectora de Atractylodes en la barrera mucosa intestinal de ratones con UC, debido a una doble acción de cambios en la microestructura interna y en la composición química causados por el calentamiento, junto con la adsorción de la tierra auxiliar.
关键词
Atractylodes macrocephala;Método de tostado con tierra;Caracterización microscópica;Microscopía electrónica de barrido - Espectroscopía de dispersión de energía (SEM-EDS);Análisis químico;UPLC-Q-TOF-MS;Barrera mucosa intestinal;Principio de procesamiento