El objetivo es investigar el mecanismo mediante el cual la decocción Zhuluantang inhibe la autofagia excesiva de las células granulosas ováricas humanas (KGN) y mejora la insuficiencia ovárica prematura (POI) a través de la vía de señalización fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K)/proteína quinasa B (Akt)/proteína diana de la rapamicina (mTOR). Métodos: Se determinó la concentración óptima de ciclofosfamida para establecer un modelo celular POI en células KGN mediante el ensayo CCK-8. Basándose en esto, se examinó el efecto de suero medicado con decocción Zhuluantang en la viabilidad del modelo celular KGN. Tras determinar la mejor concentración de administración, las células KGN se dividieron en los grupos: grupo en blanco (20% suero vacío), grupo modelo (20% suero vacío + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida), grupo suero medicado con Zhuluantang (20% suero medicado con Zhuluantang + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida), grupo inhibidor de autofagia (20% suero vacío + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida + 20 μmol·L^-1 fosfato de hidroxicloroquina), grupo inhibidor de autofagia + suero medicado con Zhuluantang (20% suero medicado con Zhuluantang + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida + 20 μmol·L^-1 fosfato de hidroxicloroquina) y grupo Bujiale (20% suero medicado con Bujiale + 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida). Tras 48 h de cultivo, se detectó la tasa de apoptosis de las células KGN mediante citometría de flujo. La expresión de proteínas PI3K, p-Akt, Akt, p-mTOR y mTOR en cada grupo fue detectada por Western blot, así como proteínas relacionadas con la autofagia como Beclin1, ATG5 y LC3. El grado de autofagia se evaluó mediante tinción con MDC. Resultados: El tratamiento con 5 μmol·L^-1 ciclofosfamida durante 48 h en células KGN permitió construir un modelo celular POI, inhibiendo significativamente la proliferación celular de KGN, con una inhibición dependiente de la concentración. El suero medicado con Zhuluantang a concentraciones del 20% y 30% promovió la proliferación celular y alivió el efecto inhibidor de la ciclofosfamida; ambas concentraciones mostraron una eficacia similar. En comparación con el grupo en blanco, la tasa de apoptosis en el grupo modelo aumentó significativamente (P<0,01), los niveles de expresión de proteínas PI3K, p-Akt y p-mTOR disminuyeron significativamente (P<0,01), mientras que las proteínas relacionadas con la autofagia Beclin1, LC3 y ATG5 aumentaron significativamente (P<0,01). No se observaron cambios significativos en los niveles de proteínas Akt y mTOR. La intensidad de fluorescencia MDC aumentó significativamente (P<0,01). En comparación con el grupo modelo, las tasas de apoptosis en los grupos en blanco, modelo, suero medicado con decocción, inhibidor de autofagia, inhibidor de autofagia + suero medicado y Bujiale se redujeron significativamente (P<0,05, P<0,01), siendo la mejor eficacia en el grupo inhibidor de autofagia + suero medicado. Los niveles de expresión de proteínas PI3K, p-Akt y p-mTOR aumentaron significativamente (P<0,05, P<0,01), especialmente en el grupo inhibidor de autofagia + suero medicado (P<0,01). Los niveles de proteínas Beclin1 y ATG5 disminuyeron significativamente (P<0,05, P<0,01). Los grupos suero medicado con decocción y Bujiale mostraron una disminución significativa en la expresión de proteína LC3 (P<0,05, P<0,01). Los grupos inhibidor de autofagia y el grupo de inhibidor de autofagia + suero medicado mostraron una disminución en LC3, pero sin significancia estadística. Conclusión: La decocción Zhuluantang podría inhibir la autofagia excesiva mediante la activación de la vía PI3K/Akt/mTOR, revirtiendo el daño causado por la ciclofosfamida en el modelo celular KGN y mejorando la POI.

Decocción Zhuluantang; insuficiencia ovárica prematura; ciclofosfamida; autofagia