Mecanismo molecular del tratamiento de EMs por Luoshengnei Fang basado en la vía de señalización TLR4/NF-κB

RUAN Yuanyuan ,  

XU Sai ,  

TANG Jiangyue ,  

LI Xiang ,  

ZOU You ,  

PEI Fangli ,  

WU Lizheng ,  

ZHENG Kaidi ,  

LIN Shuhong ,  

ZHONG Weilan ,  

ZENG Cheng ,  

摘要

Objetivo: investigar el mecanismo de acción de la fórmula tradicional china Luoshengnei Fang en el tratamiento de la endometriosis (EMs) a través de la vía de señalización Toll-like receptor 4 (TLR4) / factor nuclear de transcripción κB (NF-κB). Métodos: en experimentos in vivo, 50 ratas SD hembras fueron divididas aleatoriamente en grupo sham (10) y grupo modelo (40), el modelo de EMs se replicó mediante autoinjerto de endometrio. 36 ratas EMs exitosamente modeladas fueron divididas en grupo modelo, grupos de dosis baja y alta de Luoshengnei Fang (7,87 y 15,74 g/kg) y grupo dienogest (0,2 mg/kg), con 9 ratas por grupo. Se observaron condiciones fisiológicas, volumen de lesiones ectópicas; tinción de hematoxilina-eosina (HE) para estudiar la morfología del endometrio in situ; ELISA para detectar niveles de IL-1β y prostaglandina E2 (PGE2); inmunohistoquímica para expresiones de MMP-9, VEGFA; Western blot para proteínas TLR4, MyD88, p-NF-κB/NF-κB, MMP-9, VEGFA. In vitro, CCK-8 para determinar la mejor concentración de suero medicado, prueba de migración de células iheESCs; intervenciones con suero medicado, TAK-242 (inhibidor de TLR4), LPS (agonista de TLR4), y evaluación de expresiones proteicas del camino TLR4/NF-κB. Resultados: se estableció exitosamente el modelo EMs en 36 ratas; comparado con el grupo sham, el grupo modelo mostró lesiones ectópicas visibles y aumento significativo en puntuación de respuesta (P<0.01); tinción HE mostró engrosamiento epitelial, desorganización estromal, infiltración inflamatoria; niveles elevados de IL-1β, PGE2 (P<0.05, P<0.01); expresión positiva significativa de MMP-9, VEGFA (P<0.01); aumentos significativos en proteínas TLR4, MyD88, p-NF-κB/NF-κB, MMP-9, VEGFA (P<0.05, P<0.01). En grupos medicados, reducción significativa en volumen de lesiones (P<0.01), disminución en la puntuación de respuesta en dosis alta y dienogest (P<0.05, P<0.01); mejora en estado patológico; disminución en PGE2 en dosis baja, y reducción en IL-1β y PGE2 en dosis alta y dienogest (P<0.05, P<0.01); descenso en expresiones positivas de MMP-9, VEGFA (P<0.05, P<0.01); reducción en expresiones proteicas TLR4, MyD88, p-NF-κB/NF-κB, MMP-9, VEGFA (P<0.05, P<0.01). In vitro, suero con 5%, 10%, 20% redujo significativamente supervivencia y migración de iheESCs; disminución significativa en expresiones proteicas en grupos suero y TAK-242 (P<0.01); aumento en grupo LPS (P<0.01); disminución significativa en grupos LPS+suero (P<0.05, P<0.01). Conclusión: Luoshengnei Fang puede actuar modulando la vía TLR4/NF-κB, atenuando inflamación, mejorando lesiones patológicas y suprimiendo procesos biológicos de adhesión, invasión y angiogénesis anormales del endometrio in situ, ejerciendo efecto terapéutico en EMs.

关键词

endometriosis; Luoshengnei Fang; receptor tipo Toll 4 (TLR4) / factor nuclear de transcripción κB (NF-κB) vía de señalización; respuesta inflamatoria

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