Mecanismo de acción de Yijing Tang en el tratamiento del deterioro de la función de reserva ovárica mediado por estrés oxidativo inducido por sobrecarga crónica de hierro

YU Jing ,  

LIANG Chengcheng ,  

HU Heng ,  

LI Zhe ,  

CHU Haijing ,  

CHU Jijun ,  

摘要

El objetivo es investigar el mecanismo por el cual Yijing Tang inhibe el estrés oxidativo inducido por la sobrecarga crónica de hierro y mejora la función de reserva ovárica en ratones. Métodos: 72 ratones C57BL/6J con ciclo estral normal se dividieron aleatoriamente en grupo control, grupo modelo, grupos de dosis baja, media y alta de Yijing Tang, y grupo de dehidroepiandrosterona, con 12 ratones por grupo. El grupo control recibió inyecciones intraperitoneales de solución salina; los otros grupos recibieron inyecciones intraperitoneales de dextrano de hierro a 0.5 g·kg-1 una vez a la semana durante 8 semanas para establecer el modelo de sobrecarga crónica de hierro. Después de la última inyección, los grupos de dosis baja, media y alta de Yijing Tang recibieron por vía oral solución acuosa de Yijing Tang a 18.165, 36.33 y 72.66 g·kg-1, respectivamente; el grupo de dehidroepiandrosterona recibió 10.8125 mg·kg-1 por vía oral; los grupos control y modelo recibieron agua destilada en cantidades equivalentes, una vez al día durante 4 semanas. Se pesaron semanalmente los ratones y se monitoreó la ingesta de alimentos; se observaron cambios en el ciclo estral por frotis vaginal; se pesaron wet weights de ovarios bilaterales y útero; se observaron cambios histopatológicos en el tejido ovárico con hematoxilina y eosina (HE); se evaluaron niveles de iones de hierro mediante tinción de azul de Prusia; se midieron hormonas séricas [hormona foliculoestimulante (FSH), hormona luteinizante (LH), estradiol (E2), hormona antimülleriana (AMH)] por ELISA; se evaluaron niveles bioquímicos de malondialdehído (MDA) y superóxido dismutasa (SOD) en tejido ovárico; se detectaron niveles de especies reactivas de oxígeno (ROS) en tejido ovárico mediante tinción en cortes congelados; se examinó la ultraestructura mitocondrial por microscopía electrónica de transmisión; se evaluó la expresión de ARNm de proteínas relacionadas con hierro (Fth1, Ftl, Tf, Tfr1, Cat, GPX1) mediante PCR en tiempo real; se evaluó la expresión proteica de Ft, Fth1, Ftl, Tf, TfR, GPX4 por Western blot. Resultados: comparado con el grupo control, el grupo modelo mostró reducción significativa en peso corporal, severa alteración del ciclo estral (P<0.01), aumento significativo del índice uterino (P<0.01), disminución significativa del índice ovárico (P<0.01), reducción significativa de folículos antrales, aumento significativo de folículos atrésicos, y aumento significativo de depósitos de hierro en estroma ovárico; niveles séricos de AMH y E2, actividad de SOD, y expresión de proteínas y ARNm de Tf, Tfr1, GPX1 y Cat en tejido ovárico disminuyeron significativamente (P<0.05, P<0.01); niveles séricos de FSH y LH, contenido de MDA, y expresión de proteínas y ARNm de Fth1 y Ftl aumentaron significativamente (P<0.05, P<0.01); intensidad de fluorescencia de ROS aumentó significativamente (P<0.01); expresión de proteína GPX4 disminuyó significativamente (P<0.01); daño mitocondrial aumentó y crestas mitocondriales disminuyeron o desaparecieron. En comparación con el grupo modelo, los grupos de dosis baja, media, alta de Yijing Tang y el grupo de dehidroepiandrosterona aumentaron peso corporal, mejoraron el ciclo estral (P<0.05, P<0.01), disminuyeron índice uterino (P<0.05), aumentaron índice ovárico (P<0.05, P<0.01), aumentaron folículos antrales, disminuyeron folículos atrésicos, y disminuyeron significativamente depósitos de hierro; aumentaron niveles séricos de AMH y E2, actividad de SOD, y expresión de Tf, Tfr1, GPX1 y Cat (P<0.05, P<0.01); disminuyeron niveles séricos de FSH y LH, contenido de MDA, y expresión de Fth1 y Ftl (P<0.05, P<0.01); disminuyó intensidad de fluorescencia de ROS (P<0.05, P<0.01); aumentó expresión de proteína GPX4 (P<0.01); daños mitocondriales disminuyeron y morfología mitocondrial mejoró notablemente. Conclusión: Yijing Tang mejora la función de reserva ovárica mediante la regulación al alza de Tf, Tfr1, GPX4 y a la baja de Ft, Fth1, Ftl, alivia la disfunción del metabolismo del hierro causada por sobrecarga crónica de hierro, atenúa el estrés oxidativo en tejido ovárico y restaura la morfología mitocondrial.

关键词

Yijing Tang; sobrecarga crónica de hierro; metabolismo del hierro; estrés oxidativo; deterioro de la función de reserva ovárica

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