动物药材DNA分子鉴定专题
通过“Cocktail”探针底物法筛选细辛挥发油成分对CYP1A2，CYP2D6，CYP2E1，CYP3A4和CYP2C19 5种人肝微粒体酶的抑制作用。采用半柔性分子对接的方式研究挥发油成分及中间体与CYP1A2酶的结合能力。
主题关键词： 分子鉴定
- 论文汇编
- 摘要：目的：海龙是我国重要的动物药材，用药历史悠久，基原众多。该研究的目的是澄清海龙尤其是尖海龙的物种基原，为海龙类药材的鉴定和质量标准提供依据。方法：对历代海龙本草文字记载、图片和照片进行考证，结合形态和DNA序列分析，对中国科学院动物研究所、中国食品药品检定研究院等标本馆馆藏动物标本、中药标本及我国主要中药市场市售样本进行药源调查，推断本草及2015年版《中国药典》中海龙的物种基原。结果：从我国7个省份的药店或药材经销商处收集到标为“尖海龙”的36批药材，以及中药标本馆中历年来存留的8批“尖海龙”样品的形态与DNA均符合舒氏海龙Syngnathus schlegeli (Kaup，1856)。2015年版《中国药典》收载海龙性状描述也为舒氏海龙鉴别特征。中国的尖海龙S. acus可能是舒氏海龙S. schlegeli的错误鉴定。结论：2015年版《中国药典》中海龙的基原应修订为刁海龙Solegnathus hardwickii (Gray，1830)，拟海龙Syngnathoides biaculeatus (Bloch，1785)或舒氏海龙S.schlegeli (Kaup，1856)的干燥品。2015年版《中国药典》收载的尖海龙S. acus应修订为舒氏海龙S. schlegeli。并建议增加鉴别方法，完善海龙质量控制标准。关键词：海龙;基原;《中国药典》;尖海龙;舒氏海龙106|115|0<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
- 摘要：目的：蜈蚣是我国传统的中药材，具有良好的药用价值。目前市场上蜈蚣的混伪品日益增多，临床用药的安全性和有效性难以保证。该研究建立了一种蜈蚣基原物种的特异性聚合酶链式反应(PCR)方法，以准确、简便的鉴别蜈蚣及其常见混伪品。方法：通过比较蜈蚣及其混伪品基原物种的COI基因序列差异，根据变异位点设计蜈蚣正品少棘巨蜈蚣的特异性鉴别引物WG-500.F和WG-500.R，采集蜈蚣原动物样本及药材样本，优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。结果：少棘巨蜈蚣原动物样本及蜈蚣正品药材使用设计的蜈蚣鉴别引物经PCR扩增和凝胶电泳后出约500 bp的单一明亮条带，其他混伪品如多棘蜈蚣、模棘蜈蚣、哈氏蜈蚣、海南蜈蚣等均无条带出现。结论：PCR鉴别方法可准确鉴别蜈蚣原动物和药材的真伪，具有高度特异性，为中药材蜈蚣的真伪鉴别提供了良好的科学依据。该方法具有简单、直观等特点，有利于广泛的普及与应用，在中药材鉴定方面有着广阔的应用前景。关键词：蜈蚣;聚合酶链式反应;少棘巨蜈蚣;混伪品93|90|5<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
- 摘要：目的：建立一种快速、高效、简便的鹿茸、鹿角位点特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法。方法：通过比较梅花鹿、马鹿及其混伪品的COI，Cytb基因序列差异，根据Cytb片段上的3个SNP (single nucleotide polymorphism)变异位点设计出一对鹿茸的特异性鉴别引物LR-238上游和LR-238下游，并对影响PCR结果的主要因素退火温度，PCR循环次数，模板DNA浓度，Taq酶用量和及影响重复性的Taq酶种类和PCR仪型号等进行方法学考察和优化。结果：进行方法学考察确定最优鉴别条件的基础上，当PCR退火温度为56 ℃，循环次数为35次的条件下，鹿茸、鹿角正品均能扩增出约250 bp片段，其他9种混伪品麋鹿、白唇鹿、水鹿、坡鹿、黇鹿、骡鹿、驯鹿、驼鹿、狍及阴性对照无条带。不同来源的药用的马鹿亚种东北马鹿、塔河马鹿、天山马鹿、阿拉善马鹿、阿勒泰马鹿、新西兰马鹿，梅花鹿亚种东北梅花鹿、华南梅花鹿样品使用建立的位点特异性PCR鉴别方法均产生约250 bp特异性鉴别条带。结论：该文设计的鉴别引物具有高度的专属性，所建立的位点特异性PCR鉴别方法可用于鹿茸、鹿角的准确鉴别。关键词：鹿茸;鹿角;特异性聚合酶链式反应;混伪品;梅花鹿;马鹿121|109|10<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
- 摘要：目的：近年来，中药材地龙的商品价格不断上涨，市场的混伪品随之增加。其主要鉴别特征在药材中大部分丢失，难以区分。因此，急需建立一种准确、稳定的中药材地龙基原鉴别方法。方法：根据地龙及其混伪品的COI基因序列差异找到变异位点，从而设计参环毛蚓、通俗环毛蚓、威廉环毛蚓及栉盲环毛蚓的特异性鉴别引物，优化反应体系并进行耐受性和适用性的考察和验证。在此基础上将特异性引物组合，构建多重聚合酶链式反应(PCR)体系，从而建立了一种高效准确、操作简便、专属性强、重复性好的中药材地龙及其常见混伪品的多重位点PCR鉴别方法。结果：在该方法下广地龙基原参环毛蚓可得到366 bp片段，沪地龙基原通俗环毛蚓和威廉环毛蚓可得到487 bp片段，栉盲环毛蚓可得到475 bp片段，其他混伪品均无条带。将之组合形成的多重PCR可在一次鉴定操作中根据条带位置同时鉴别沪地龙和广地龙。结论：该文所建立的多重位点特异性PCR鉴别方法可准确鉴别中药材地龙真伪。关键词：地龙;多重位点特异性聚合酶链式反应;分子鉴别;混伪品;参环毛蚓;通俗环毛蚓;威廉环毛蚓;栉盲环毛蚓138|130|9<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
- 摘要：目的：以水牛角鉴别为例建立中药重组酶介导扩增(Recombination-aid amplification，RAA)快速鉴别方法，用于水牛角及其混伪品牦牛角的鉴别。方法：通过比较水牛角及其混伪品牦牛角基原物种的线粒体基因组序列差异，寻找高变异区域，根据变异位点设计水牛角正品水牛的特异性RAA鉴别引物SNJ-1.F和SNJ-1.R及荧光探针SNJ-1.probe，使用碱裂解法提取DNA，优化RAA反应体系，在37 ℃下恒温孵育15～20 min，通过凝胶电泳及实时荧光监测反应结果，使用DNA测序方法验证RAA鉴别结果的准确性。结果：在37 ℃恒温孵育20 min后，水牛角RAA产物凝胶电泳图谱出现约140 bp特异性鉴别条带，使用实时荧光RAA鉴别时，水牛角正品均在6.21～8.37 min出现特异性扩增，牦牛角样品均在10.08 min后才出现扩增，COI片段DNA测序鉴别结果与荧光RAA鉴别结果相吻合。结论：特异性RAA技术可在20 min内快速鉴别水牛角，可用于水牛角药材、饮片及其制品的快速现场鉴定。该方法具有简单、快速、无需大型仪器等特点，在中药现场鉴定、药检抽查等方面有着广阔的应用前景。关键词：水牛角;牦牛角;重组酶介导扩增;混伪品;现场鉴定114|130|3<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
- 摘要：目的：建立一种适用于猪胆粉及其中成药的特异性聚合酶链式反应(PCR)鉴别方法，为复杂组分中动物源性成分的鉴定提供示范。方法：根据猪源性鉴别引物，建立PCR鉴别方法，优化反应体系，并对此方法进行考察和验证。利用建立的PCR鉴别方法，对20批自制猪胆粉药材，19批市售猪胆粉药材和22批含猪胆粉中成药的猪源性成分进行鉴别，将市售的猪胆粉药材和含猪胆粉中成药PCR扩增的阳性产物进行酶切验证和序列测定验证。结果：20批自制猪胆粉药材、猪胆粉对照药材均能扩出约212 bp的特异性鉴别条带，牛和羊参考品均无条带；19批市售猪胆粉药材中仅5批扩出特异性鉴别条带；22批含猪胆粉中成药中有10批检出猪源性成分；猪胆粉对照药材及市售猪胆粉药材PCR扩增的阳性产物经Mnl I酶切后均能产生约200 bp的条带；猪胆粉及其中成药中扩增产物序列与GenBank数据库中相似性最高的物种为Sus scrofa，一致性为99%，与猪的序列高度一致。结论：该文建立的特异性PCR鉴别方法可准确鉴别猪胆粉及其中成药中的猪源性成分。关键词：猪胆粉;中成药;特异性聚合酶链式反应;分子鉴别86|109|9<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
- 摘要：目的：建立鉴别鸡内金及其常见伪品的物种特异性聚合酶链式反应(PCR)方法，对全国中药材及饮片专项抽验任务中所抽取的鸡内金饮片进行真伪鉴别，评价市场上鸡内金的真伪情况。方法：根据鸡、鸭、鹅的12S序列差异，设计或优化物种特异性PCR鉴别引物，对影响PCR结果的主要因素退火温度，PCR循环次数，模板DNA浓度，Taq酶种类等进行方法学考察和优化。使用优化的特异性PCR方法对鸡、鸭、鹅内金样品进行DNA分子鉴别。结果：在进行方法学考察确定最优鉴别条件的基础上，当PCR退火温度为55 ℃，循环次数为30次的条件下，当使用文中筛选得到的鸡物种特异性鉴别引物时，所测鸡内金饮片均检出约为273 bp的特异性扩增条带，混伪品鸭内金和鹅内金均无相应扩增条带；当使用鸭和鹅鉴别引物时，均未检出相应的扩增条带。结论：位点特异性PCR方法能够快速准确的鉴别出鸡内金真伪品，可用于全国中药材及饮片专项抽验任务中鸡内金的真伪鉴定，目前市场上用鸭内金和鹅内金充鸡内金现象较少，质量评价较好。关键词：鸡内金;鸭内金;鹅内金;伪品123|175|9<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
- 摘要：分子生药学是分子生物学和生药学有机融合而形成的一门新兴交叉学科，具有极强的实践性和创新性。在学科课程中，实验教学与理论教学相辅相成，均有其重要意义。各大院校在分子生药学实验课程设置中的首选为“中药分子鉴定”，普遍采用传统的验证性实验的教学模式。而分子生药学作为一门新兴的具有极强前瞻性的学科，许多新方法和新技术不断出现，基础性的实验教学已经不能让学生更好地学习了解这门学科，所以在实验教学中引入最新的科研成果显得尤为重要。基于最新科研成果转化的实验教学不仅能够让学生掌握基本的实验技能，同时能够拓宽学生的知识宽度，培养学生的科研思路，激发学生的科研创新精神。该文对分子生药学学科实验教材的编写、实验平台建设、师资培养、学术交流提出了一些建议和展望，希望实验教材内容制定由易到难、由验证性实验到综合性实验，建设合理规范、高效利用的实验平台，实验课程涉及多领域时可由多专业老师共同完成，鼓励积极开展和参与灵活多样、生动有趣的教学实践活动，以期促进分子生药学的纵深发展。关键词：分子生药学;实验教学;科研成果;实验教材;实验平台;师资培养;学术交流104|69|0<HTML><网络PDF>更新时间：2021-02-09
