黄芩汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制研究专题
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- 摘要：溃疡性结肠炎是一种病因尚不明确的慢性肠道疾病，主要症状为腹痛、腹泻、黏液脓血便等，并可伴有多种并发症，转化为结肠癌的风险较高。近年来溃疡性结肠炎和相关结肠癌的发病率有上升的趋势，严重影响人体健康和生活质量。手术和免疫抑制剂等是现代临床治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌的主要方法，但这些方法均有不同的不良反应，治疗效果不理想。多年来，中医药由于其不良反应小，疗效显著，在治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌方面备受关注。黄芩汤出自《伤寒论》，由黄芩、芍药、甘草和大枣组成，具有清热止利、和中止痛之功效，用于治疗溃疡性结肠炎疗效显著。黄芩汤成分复杂，以多靶点多途径发挥作用。经文献查阅并结合本课题组多年的研究成果，发现黄芩汤治疗溃疡性结肠炎和相关结肠癌的作用机制可能与保护肠黏膜屏障，抑制炎症反应，促进线粒体自噬，抑制氧化应激，调控肠道菌群、细胞周期、基因表达，抑制细胞增殖和促进细胞凋亡等多种机制相关。现将近年来的研究情况进行较为详尽的综述，以期能够为黄芩汤作用机制的深入研究及临床用药提供理论参考。关键词：溃疡性结肠炎;结肠癌;黄芩汤;机制350|186|5<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2023-05-17
- 摘要：目的研究黄芩汤对溃疡性结肠炎（UC）模型小鼠的药效，并探究黄芩汤在UC中是否能调节肠道菌群，发挥屏障保护作用。方法雄性Balb/c小鼠按体质量随机分为正常组、模型组、黄芩汤高（20 g·kg-1）、中（10 g·kg-1）、低（5 g·kg-1）剂量组、菌群干扰组、菌群干扰模型组、菌群干扰黄芩汤组（黄芩汤，20 g·kg-1）。灌胃抗生素（杆菌肽200 mg·kg-1、万古霉素200 mg·kg-1）8 d构建菌群干扰模型，自由饮用3%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液7 d构建UC模型，黄芩汤给药治疗7 d。实验结束后处死小鼠，取血、结肠及粪便，苏木素-伊红（HE）染色观察结肠病变，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织中紧密连接蛋白1（Claudin1）、黏蛋白1（MUC1）、咬合蛋白（Occludin）、闭锁小带蛋白-1（ZO-1） mRNA和蛋白的表达，提取小鼠粪便DNA进行高通量测序分析。结果与正常组比较，模型组小鼠血清IL-4、IL-6、TNF-α含量明显升高（P<0.05，P<0.01），IL-10明显降低（P<0.05）；与模型组比较，黄芩汤给药组IL-4、IL-6、TNF-α含量下降（P<0.05，P<0.01），IL-10含量显著上升（P<0.01），Claudin1、MUC1、Occludin、ZO-1 mRNA和蛋白表达明显上升（P<0.05，P<0.01）。菌群干扰后，小鼠肠道菌物种多样性及丰度降低，变形菌门（Proteobacteria）增多（P<0.01），厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidetes）减少（P<0.01）；DSS诱发UC后，拟杆菌门和柔壁菌门（Tenericutes）明显减少（P<0.05）；黄芩汤高、中、低3个剂量组中拟杆菌门、柔壁菌门明显增多（P<0.05，P<0.01），厚壁菌门减少（P<0.05），乳酸菌属（Lactobacillus）、毛螺菌属（Lachnospiraceae NK4A136 group）、大肠埃希菌志贺属（Escherichia-Shigella）、螺杆菌（Helicobacter）的丰度与黄芩汤剂量呈正比。结论黄芩汤可以抑制UC小鼠的炎症反应，回调失衡的肠道菌群，修复损伤的肠黏膜屏障。关键词：黄芩汤;溃疡性结肠炎;肠道菌群;肠黏膜屏障373|429|10<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2023-05-17
- 摘要：目的以RAW264.7细胞为炎症模型，探究黄芩汤的抗炎作用机制。方法制备黄芩汤，筛选对RAW264.7细胞的安全剂量；将RAW264.7细胞接种于24孔板中，先后加入黄芩汤和脂多糖（LPS），分别采用Griess法和酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定一氧化氮（NO）和白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、前列腺素E2（PGE2）的含量；将RAW264.7细胞接种于6孔板中，设空白组、LPS组、LPS+黄芩汤组、核转录因子-κB p65（NF-κB p65）抑制剂（PDTC）组、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）抑制剂（SB203580）组、细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂（PD98059）组、c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂（SP600125）组、Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）抑制剂（AG490）组，先后加入相应的抑制剂和黄芩汤，并经LPS刺激后，提取RNA和蛋白，分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测NF-κB p65、p38 MAPK、ERK、JNK和JAK mRNA及蛋白的表达水平，探究黄芩汤通过调控NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）和JAK/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路发挥抗炎作用的机制。结果与空白组比较，LPS刺激后，模型组细胞中NO、IL-6、TNF-α、PGE2的浓度明显增加（P<0.05，P<0.01），与模型组比较，加入黄芩汤后，NO、IL-6、TNF-α、PGE2分泌量有减少趋势（P<0.05，P<0.01）；与空白组比较，模型组细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65 mRNA及总蛋白表达明显升高（P<0.05，P<0.01），与模型组比较，黄芩汤孵育后，炎症细胞内p38 MAPK、ERK、JNK、JAK和NF-κB p65总蛋白及mRNA的表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；同时各抑制剂组细胞内NF-κB p65总蛋白及mRNA表达均有下降趋势（P<0.05，P<0.01）。结论黄芩汤能够通过NF-κB、MAPK和JAK/STAT信号通路抑制炎症反应。关键词：黄芩汤;炎症;核转录因子-
κ B（NF-κ B）信号通路;丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路;Janus酪氨酸蛋白激酶（JAK）/信号转导及转录激活因子（STAT）信号通路273|281|13<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2023-05-17 - 摘要：目的以Caco-2细胞为载体，结合基因干扰（RNAi）技术，通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2（Nrf2）通路发挥的抗氧化应激作用。方法将处于对数生长期的Caco-2细胞，经siRNA转染，构建siRNA Caco-2细胞；将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后，提取RNA和蛋白，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）技术检测血红素氧合酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、谷胱甘肽巯基转移酶（GST）、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）及Nrf2 mRNA和蛋白的表达；同时，采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力及丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）的表达水平。结果与空白组比较，仅有黄芩汤400 mg·L-1组与萝卜硫素（SFN）组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量（P<0.01）；而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px活力均有增加的趋势，且黄芩汤400 mg·L-1组和SFN组与空白组比较差异有显著统计学意义（P<0.01）；同时，各组细胞HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2蛋白及mRNA的表达量均有明显升高的趋势（P<0.05，P<0.01）。经转染后，与空白组比较，模型组细胞内MDA和ROS的含量升高，而GSH-Px和SOD的活力及HO-1、GST、Keap1和NQO1蛋白及mRNA的表达量均有不同程度地降低（P<0.05，P<0.01），与药物孵育后，与模型组比较，SFN组细胞内SOD活力和SFN组、黄芩汤各给药组GSH-Px活力显著升高（P<0.01），黄芩汤400 mg·L-1组、200 mg·L-1组和SFN组细胞内SOD和GSH-Px活力均有升高的趋势（P<0.01），黄芩汤400 mg·L-1组和SFN组MDA有降低的趋势，且各给药组ROS均有降低（P<0.01）；HO-1、GST、Keap1、NQO1和Nrf2的蛋白及mRNA表达均有不同程度增加（P<0.05，P<0.01）。结论黄芩汤可以通过调控Nrf2通路发挥抗氧化应激的作用。关键词：黄芩汤;氧化应激;Caco-2细胞;RNA干扰;核因子E2相关因子2（Nrf2）信号通路224|138|5<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2023-05-17
