栀子提取物在呼吸道病毒防治中的应用与机制研究专题
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- 摘要：目的探索与流感病毒核蛋白（NP）相互作用的宿主因子，研究其对流感病毒复制的影响，以及栀子环烯醚萜苷（IGE）抑制流感病毒的作用机制。方法利用酵母双杂交系统筛选与流感病毒NP相互作用的宿主因子；通过免疫共沉淀实验对异质核糖核蛋白（HNRNPD）、氨基葡萄糖6磷酸脱氨酶1（GNPDA1）、Poly/rC结合因子1（PCBP1）、激活信号转导和转录激活因子（STAT）蛋白1抑制因子（PIAS1）进行验证；通过双荧光素酶实验比较PIAS1和HNRNPD对流感病毒复制的影响，并检测在转染核糖核蛋白体复合物（RNP）及PIAS1敲低的情况下，给予栀子环烯醚萜苷对流感病毒复制的影响。将ICR小鼠随机分为正常组、模型组、达菲组和IGE高、中、低剂量组，每组10只。除正常组外各组滴鼻感染甲型流感病毒FM1株建立病毒性肺炎模型。IGE高、中、低剂量组分别给予50、25、12.5 mg∙kg-1 IGE灌胃，达菲组给予27.5 mg∙kg-1达菲灌胃，正常组和模型组灌服等体积蒸馏水，连续4 d。实验结束后，蛋白免疫印迹法检测肺组织中PIAS1、NP、磷酸化（p）-STAT3、STAT3、p-STAT1、STAT1的蛋白表达。结果在酵母双杂交实验中，发现了16个流感病毒NP的潜在互作宿主靶点；免疫共沉淀实验发现HNRNPD和PIAS1可以与流感病毒NP相互作用；双荧光素酶报告实验中PIAS1敲低和过表达都可明显影响IAV RNP活性（P<0.05，P<0.01），HNRNPD对IAV RNP的影响差异无统计学意义；IGE高、低剂量组均可使流感病毒复制减少（P<0.05），并可逆转PIAS1敲低导致的流感病毒复制增加（P<0.05，P<0.01）。IGE各剂量组不同程度地降低感染小鼠肺组织PIAS1、NP、p-STAT3、p-STAT1、STAT1的表达量（P<0.05，P<0.01）。结论PIAS1和流感病毒NP相互作用，并能够抑制流感病毒的复制，栀子环烯醚萜苷可能通过PIAS1/STAT1通路抑制IAV RNP的活性，从而发挥抗病毒作用。关键词：激活信号转导和转录激活因子（STAT）蛋白1抑制因子（PIAS1）;甲型流感病毒;流感病毒核蛋白（NP）;栀子环烯醚萜苷;核糖核蛋白241|369|1<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-09-26
- 摘要：目的观察雾化吸入BD-77对多种呼吸道病毒感染动物模型的治疗作用，并利用蛋白质组学手段，探究BD-77广谱抗病毒作用机制。方法流感病毒H1N1/FM1实验选用ICR小鼠分为正常组、模型组、达菲组、75、37.5 g·L-1均分别吸入20 min组、25 min组；人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43实验选用BALB/c小鼠正常组、模型组、磷酸氯喹组、BD-77的75、37.5、18.75、9.375 g·L-1剂量组，每组10只，分别采用流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染致肺炎模型，检测小鼠肺指数、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肺组织病毒载量、酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测肺组织中相关炎性因子，并对OC43感染小鼠肺组织进行蛋白质组学分析。结果与正常组比较，各感染组小鼠肺指数显著升高（P<0.01）、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43小鼠肺组织内能检测到病毒核酸，且人冠状病毒229E感染小鼠肺组织中白细胞介素-6（IL-6）、IL-10、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量均显著升高（P<0.01）；BD-77能够明显降低流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠的肺指数（P<0.05，P<0.01）；显著降低人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠的肺内病毒载量（P<0.01）；显著降低人冠状病毒229E感染小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α的含量（P<0.01）。OC43感染小鼠肺组织蛋白质组学显示，BD-77调节了腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信号通路、TNF信号通路、NOD样（NOD-like）信号通路、IL-17信号通路、叉头框蛋白O（FoxO）信号通路和转化生长因子-β（TGF-β）信号通路等。结论雾化吸入BD-77能够有效治疗流感病毒H1N1/FM1、人冠状病毒229E和人冠状病毒OC43感染小鼠所致肺炎，并且可能是通过调节细胞代谢平衡、增强宿主免疫功能、减轻炎症反应来发挥抗病毒作用的。关键词：呼吸道病毒;雾化吸入法;BD-77;蛋白质组学;肺部炎症271|207|0<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-09-26
- 摘要：目的利用人血管紧张素转化酶2（hACE2）转基因小鼠模型，进行BD-77抗新型冠状病毒SARS-CoV-2药效学研究，并初步探讨BD-77抗SARS-CoV-2的作用机制。方法建立SARS-CoV-2奥密克戎（Omicron）和德尔塔（Delta）变异株感染VeroE6细胞模型并给予BD-77，观察BD-77体外抗病毒作用效果；通过试剂盒体外检测BD-77对SARS-CoV-2病毒（Delta/Omicron）刺突S蛋白与血管紧张素转化酶2（ACE2）结合的影响；采用色谱法检测BD-77对新冠病毒S蛋白和N蛋白的结合作；hACE2转基因C57BL/6小鼠分为空白组、SARS-CoV-2感染组、BD-77给药37.5、75 mg·kg-1组，每组各8只，建立SARS-CoV-2感染hACE2转基因小鼠致肺炎模型，观察小鼠生存情况，检测小鼠肺组织病毒滴度并观察肺组织病变情况。结果BD-77在体外对Omicron和Delta变异株有一定的抑制作用，半数抑制浓度（IC50）分别为526.3、653.0 mg·L-1；BD-77对SARS-CoV-2病毒的WT、Omicron和Delta变异株S蛋白与ACE2的结合无明显抑制作用；BD-77与新冠病毒S蛋白、N蛋白无结合作用；空白组小鼠无死亡，SARS-CoV-2感染小鼠死亡率为75%、小鼠肺组织中有大量病毒复制、且肺组织、间质有大面积炎症渗出；与模型组比较，BD-77给药37.5 mg·kg-1组和75 mg·kg-1组能够降低小鼠死亡率、明显降低小鼠肺组织中病毒滴度（P<0.05）并改善肺部病变情况。结论BD-77显示出在体内外对SARS-CoV-2病毒的显著抑制效果。然而，其作用机制并非直接抑制病毒或干预病毒与宿主的结合过程。这一发现提示了对BD-77的作用机制需要通过进一步的实验来深入研究和阐明。关键词：新型冠状病毒（SARS-CoV-2）;BD-77;人血管紧张素转化酶2（hACE2）转基因小鼠模型;德尔塔（Delta）变异株;奥密克戎（Omicron）变异株211|259|1<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-09-26
