黑逍遥散治疗阿尔茨海默病机制研究专题
- 论文汇编
黑逍遥散干预阿尔茨海默病的述评与展望 增强出版
摘要：阿尔茨海默病（AD）是一种多发于老年人群体的神经退行性疾病，中医将其归为“痴呆”“呆病”的范畴，其发生发展与肾、肝、脾三脏的功能密切相关。肝脾肾“三阴并调”经典名方——黑逍遥散，在治疗神经退行性疾病方面具有广阔前景。该文将综合近10年文献资料，从实验研究出发，归纳总结黑逍遥散方药及其有效成分干预AD的作用机制，发现黑逍遥散具有多靶点、多层次、多环节综合调控AD的协同干预优势。结合临床研究，发现黑逍遥散（或联合其他疗法）治疗AD疗效确切，可有效改善AD患者的认知障碍，降低氧化应激水平和抑制可溶性凋亡因子过度表达。该文基于现代医学背景和常用实验方法，旨在为黑逍遥散治疗AD提供理论依据并探索新的研究方向。甚至为其临床应用和药食同源产品的研发提供新思路。关键词：阿尔茨海默病;黑逍遥散;方药;机制;三阴并调480|615|11<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31- 摘要：目的探究黑逍遥散调控肿瘤坏死因子受体超家族成员6（Fas）/Fas配体（FasL）/胱天蛋白酶-8（Caspase-8）/胱天蛋白酶-3（Caspase-3）信号通路干预神经元细胞凋亡防治阿尔茨海默病（AD）的作用及机制。方法选用4月龄SPF级SD雄性大鼠90只，随机选取10只作为空白组，10只作为假手术组（双侧海马各注射生理盐水1 μL），其余70只双侧海马各注射β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）1 μL溶液复制AD模型。筛选出造模成功的大鼠50只，随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组（0.45 mg·kg-1）及黑逍遥散高、中、低剂量组（15.30、7.65、3.82 g·kg-1）。连续灌胃42 d，1次/d。原位末端标记法（TUNEL）染色观察大鼠皮层和海马神经元细胞凋亡情况，免疫组化法（IHC）检测大鼠海马组织B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Fas、FasL、Fas相关死亡结构域蛋白（Fadd） mRNA表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测Fas、FasL、Fadd、Caspase-3、切割型（cleaved）Caspase-3、Caspase-8、cleaved Caspase-8相关蛋白的表达。结果与空白组和假手术组比较，模型组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率显著升高（P<0.01），Bax水平显著增高（P<0.01），Bcl-2水平显著下调（P<0.01），海马组织Fas、FasL、Fadd mRNA表达显著提高（P<0.01），Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达显著增高（P<0.01）；与模型组比较，盐酸多奈哌齐组及黑逍遥散高、中剂量组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率明显下降（P<0.05，P<0.01），Bax水平显著降低（P<0.01），Bcl-2水平显著提高（P<0.01），海马组织Fas、FasL、Fadd mRNA表达明显下调（P<0.05，P<0.01），Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达显著下调（P<0.01）；黑逍遥散低剂量组大鼠皮层和海马区细胞凋亡率明显下降（P<0.05，P<0.01），Bcl-2表达水平显著降低（P<0.01），海马组织FasL、Fadd mRNA表达明显下调（P<0.05），Fas、FasL、Fadd、cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-8蛋白表达明显下调（P<0.05）。结论黑逍遥散可保护AD大鼠皮层和海马区神经元细胞凋亡，其作用机制可能与抑制Fas/FasL/Caspase-8/Caspase-3信号通路介导的细胞凋亡有关。关键词：黑逍遥散;阿尔茨海默病;肿瘤坏死因子受体超家族成员6（Fas）/Fas配体（FasL）/胱天蛋白酶-8（Caspase-8）/胱天蛋白酶-3（Caspase-3）信号通路;细胞凋亡266|431|11<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31
- 摘要：目的探究黑逍遥散通过调控环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/N-甲基-D-天冬氨酸受体（NMDAR）信号通路干预APP/PS1小鼠突触可塑性的作用及其机制。方法选取4月龄雄性C57BL/6J小鼠12只作空白组，同月龄雄性APP/PS1双转基因小鼠60只，随机分为模型组、KW-6002（腺苷受体的拮抗剂）组（3 mg·kg-1）及黑逍遥散高、中、低剂量组（22.10、11.05、5.53 g·kg-1），每组12只，对应药物连续干预90 d。透射电镜观察海马神经元突触超微结构，高尔基染色观察海马CA1区神经元树突棘密度，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测cAMP、PKA、N-甲基-D-天冬氨酸受体1（NR1）、N-甲基-D-天冬氨酸受体2A（NR2A）、N-甲基-D-天冬氨酸受体2B（NR2B）、突触后致密物质95（PSD95）、突触蛋白1（SYN1）的蛋白表达，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测cAMP、PKA、NR1的mRNA表达，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测小鼠海马白细胞介素-12（IL-12）、白细胞介素-4（IL-4）含量。结果与空白组比较，模型组小鼠海马CA1区突触前膜与突触后膜分界线清晰程度欠佳，突触囊泡明显减少且分布散乱，突触后膜密度降低，海马CA1区神经元树突棘形态欠规整，排列不连续、密度减少（P<0.01），海马cAMP、PKA、NR1、NR2A、NR2B、PSD95、SYN1的蛋白表达降低（P<0.01），cAMP、PKA、NR1的mRNA表达下调（P<0.01），海马IL-12含量增多、IL-4含量减少（P<0.01）；与模型组比较，各用药组小鼠海马CA1区突触前膜与后膜分界线清晰明了且结构完整，突触囊泡增多，排列密集，突触后膜密度增加，神经元树突棘形态较为规则，排列连续，成熟型树突棘密度增多（P<0.05，P<0.01），海马cAMP、PKA、NR1、NR2A、NR2B、PSD95、SYN1的蛋白表达增加（P<0.05，P<0.01），cAMP、PKA、NR1的mRNA表达提高（P<0.01），海马IL-12含量降低（P<0.01），IL-4含量增加（P<0.01）。结论黑逍遥散能改善APP/PS1小鼠海马神经元结构形态，其作用机制可能与激活cAMP/PKA/NMDAR信号通路、修复突触可塑性有关。关键词：黑逍遥散;阿尔茨海默病;突触可塑性;环磷酸腺苷（cAMP）/蛋白激酶A（PKA）/
N -甲基-D -天冬氨酸受体（NMDAR）信号通路288|220|10<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31 - 摘要：目的探讨黑逍遥散调控RAS蛋白（RAS）/RAF激酶（RAF）/有丝分裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路干预阿尔茨海默病（AD）大鼠氧化应激的作用及其机制。方法4月龄SPF级Wistar雄性大鼠100只，随机选取10只作为空白组，10只作为假手术组（双侧海马注射生理盐水1 μL），其余80只双侧海马注射β淀粉样蛋白1-42（Aβ1-42）溶液1 μL复制AD模型。遴选造模合格大鼠50只，随机分为模型组、盐酸多奈哌齐组（0.5 mg·kg-1）及黑逍遥散高、中、低剂量组（15.30、7.65、3.82 g·kg-1）。连续灌胃42 d，每天1次。灌胃结束后，Morris水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力，尼式染色法检测海马CA3区神经元病理结构改变，免疫荧光观察Aβ沉积和tau蛋白磷酸化水平，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测海马组织RAS、RAF、磷酸化（p）-RAF、MEK、p-MEK、ERK、p-ERK蛋白表达，生化法检测海马组织活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果与假手术组比较，模型组大鼠第5天逃避潜伏期显著延长（P<0.01），目标象限游泳距离显著缩短（P<0.01），尼氏小体数量减少，染色不均；Aβ、p-tau荧光强度显著增强（P<0.01），海马组织中RAS、p-RAF、p-MEK、p-ERK蛋白表达显著增高（P<0.01），ROS和MDA含量显著增高（P<0.01），SOD活性显著降低（P<0.01）；与模型组比较，盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散高、中、低剂量组大鼠第5天逃避潜伏期显著缩短（P<0.01），目标象限游泳距离显著增加（P<0.01）；尼氏染色显示神经元排列整齐，细胞形态、结构完整，尼氏小体清晰可见，盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散高、中、低剂量组Aβ、p-tau荧光强度显著下调（P<0.01），RAS、p-RAF、p-MEK、p-ERK蛋白表达明显增高（P<0.05，P<0.01），ROS、MDA含量显著降低（P<0.01），SOD活性显著增高（P<0.01）。结论黑逍遥散可能通过RAS/RAF/MEK/ERK信号通路干预氧化应激，降低Aβ和p-tau水平，抑制海马神经元损伤，从而改善学习记忆能力。关键词：黑逍遥散;阿尔茨海默病;RAS蛋白（RAS）/RAF激酶（RAF）/有丝分裂原活化蛋白激酶激酶（MEK）/细胞外信号调节激酶（ERK）信号通路;氧化应激224|250|12<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31
