左归丸防治肾亏所致嗣孕功能异常的机制研究专题
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- 摘要：目的该研究旨在利用现代网络药理学技术与液相色谱-质谱联用仪（LC-MS）代谢组学技术探讨左归丸改善多囊卵巢综合征（PCOS）的潜在机制。方法该研究基于左归丸的活性成分及其治疗多囊卵巢综合征的潜在靶点进行生物信息学方法预测，将SD大鼠分为空白组（Con），PCOS模型制备组，采用来曲唑（1 mg·kg-1）灌胃+高脂饮食（HFD），建立PCOS大鼠模型并鉴定。造模结束后将PCOS模型制备组分为模型组（Mod）灌胃等量生理盐水、二甲双胍组（Met）灌胃300 mg·kg-1二甲双胍，左归丸组（Zgw）灌胃左归丸浓缩液（1.62 g·kg-1），记录体质量、发情周期，苏木素-伊红染色观察卵巢形态，酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定血清促卵泡激素（FSH）、黄体生成素（LH）、抗苗勒管激素（AMH）、睾酮（T）、雌二醇（E2）含量，计算LH/FSH比值，通过正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）对大鼠血清代谢组学进行分析，筛选代谢物的富集通路，联合网络药理学，进行关联分析，构建化合物-反应-酶-基因网络。结果数据库筛选出左归丸的503种潜在靶蛋白，以及5 843个多囊卵巢综合征的疾病基因，交集靶点共271个。基因本体（GO）富集分析涉及对脂多糖的反应等，京都基因和基因组百科全书（KEGG）富集得到119条通路。动物实验发现与Con组比较，Mod组体质量、LH、AMH水平显著升高（P<0.01），FSH水平差异无统计学意义，但LH/FSH比Con组显著升高（P<0.01），雌激素水平显著下降（P<0.01），囊性卵泡增多，与Mod组比较，Zgw组与Met组体质量显著下降（P<0.01），Zgw组大鼠闭锁卵泡和囊性卵泡减少，成熟卵泡和黄体增多，颗粒层变厚。Zgw组大鼠血清T、FSH、LH、AMH、LH/FSH水平显著下降（P<0.01），经左归丸治疗后，E2水平显著升高（P<0.01）。代谢组学PCA与OPLS-DA结果显示Zgw组与Mod组之间差异有统计学意义，代谢差异物中，Zgw组中有26个代谢物上调，网络药理学KEGG富集通路与代谢物富集通路共有8条交集通路，拓扑分析结果涉及类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢等通路，构建化合物-反应-酶-基因网络发现了关键靶点为蛋白激酶B1（Akt1）、表皮生长因子受体（EGFR）、前列腺素内过氧化物合酶2（PTGS2）、丝裂原活化蛋白激酶1（MAPK1）。结论左归丸通过调控类固醇激素生物合成途径改善了激素水平，促进了卵泡的生成与发育，进而改善了卵巢功能，这可能是其治疗PCOS的潜在机制。关键词：左归丸;多囊卵巢综合征;网络药理学;代谢组学;类固醇激素生物合成途径476|379|4<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31
- 摘要：目的观察左归丸对产前应激（PS）模型大鼠子代雌性大鼠卵巢储备功能的影响，基于Toll样受体4/核转录因子-κB p65（TLR4/NF-κB p65）信号通路探讨其作用机制。方法制备32只孕鼠，随机分为正常组、模型组、左归丸组（18.9 mg·kg-1）、维生素E组（1.44 mg·kg-1） 4组，每组8只，除正常组以外，其余3组在确定妊娠的第11天开始通过慢性不可预测轻度应激法（CUMS）复制PS孕鼠模型，造模的同时进行相应药物的灌胃治疗，直至生产。以蔗糖偏好实验（SPT）、旷场实验（OFT）、血清皮质酮（CORT）含量评估PS孕鼠模型。通过监测发情周期、观察卵巢形态学变化、酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测75日龄子代大鼠血清雌二醇（E2）、促黄体生成素（LH）、卵泡刺激素（FSH）、抗苗勒管激素（AMH）水平评价卵巢储备功能；计算卵巢指数和子宫指数；ELISA检测血清白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；苏木素-伊红（HE）染色观察出生当天和75日龄子代卵巢组织形态的改变；免疫荧光法（IF）检测75日龄子代大鼠卵巢中NF-κB p65的入核情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测卵巢组织TLR4、NF-κB p65等相关蛋白的表达。结果与正常组比较，出生当天模型组子代仔鼠原始卵泡数大幅度显著减少（P<0.01），75日龄模型组子代大鼠动情周期紊乱，卵巢指数、子宫指数显著降低（P<0.01），黄体数减少，闭锁卵泡显著增多（P<0.01），性成熟模型组子代大鼠血清AMH、E2水平显著降低（P<0.01），LH、FSH水平升高（P<0.01），IL-1β、TNF-α水平明显升高（P<0.05，P<0.01），TLR4、NF-κB p65、髓分化因子88（MyD88）、磷酸化NF-κB抑制因子α（p-IκBα）蛋白表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，出生当天左归丸组，维生素E组仔鼠原始卵泡数显著增多（P<0.01），75日龄左归丸组、维生素E组大鼠动情周期恢复，卵巢指数明显升高（P<0.05，P<0.01），子宫指数均明显升高（P<0.05），黄体数均显著增加（P<0.01），闭锁卵泡数均显著减少（P<0.01），血清AMH、E2水平均明显升高（P<0.05，P<0.01），LH、FSH水平明显降低（P<0.05，P<0.01），IL-1β、TNF-α水平均明显降低（P<0.05，P<0.01），TLR4、NF-κB p65、MyD88、p-IκBα蛋白表达均明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论左归丸能有效改善先天肾虚子代大鼠卵巢储备功能，作用机制可能与TLR4/NF-κB p65信号通路有关。关键词：产前应激;子代;Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-
κ B p65（NF-κ B p65）信号通路;左归丸;卵巢储备功能217|233|1<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31 - 摘要：目的通过铁死亡通路的变化，探讨左归丸对环磷酰胺所致卵巢早衰（POF）大鼠卵巢功能的影响机制。方法40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、左归丸低、高剂量组（2、8 g·kg-1），每组10只。模型组、左归丸低、高剂量首日按50 mg·kg-1腹腔注射环磷酰胺（CTX），第2~15天按8 mg·kg-1剂量，制备卵巢早衰模型。造模后，各组给与相应剂量药物或生理盐水灌胃4周后，苏木素-伊红（HE）染色法观察各组大鼠卵巢组织病理变化；电镜扫描观察鼠卵巢组织的线粒体变化；生化法及酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清大鼠促卵泡素（FSH）、雌二醇（E2）、促黄体生成素（LH）、抗缪勒管激素（AMH）、丙二醛（MDA）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和铁含量水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、重肽铁蛋白（FTH1）、酰基辅酶A合成酶长链家族成员4（ACSL4）蛋白表达。结果与正常组比较，模型组大鼠卵巢组织中闭锁卵泡明显增多，且线粒体体积萎缩、碎裂、空泡化，线粒体内嵴减少或呈现松散、紊乱的形态；与模型组比较，左归丸高剂量组大鼠卵巢成熟卵泡增多，卵巢线粒体体积增大，空泡化症状减轻，嵴数量增多且排序整齐；与正常组比较，模型组大鼠的铁含量、MDA含量、FSH和LH浓度、GPX4蛋白、SLC7A11蛋白和FTH1蛋白的表达水平明显升高（P<0.05，P<0.01），SOD、CAT活力、E2和AMH浓度及ACSL4的表达明显降低（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，各给药组大鼠铁含量、MDA含量、FSH和LH浓度、GPX4蛋白、SLC7A11蛋白和FTH1蛋白的表达水平明显降低（P<0.05，P<0.01），CAT活力、E2和AMH浓度及ACSL4的表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；其中，左归丸中剂量组CAT活力则升高，差异无统计学意义。结论左归丸可能通过调节SLC7A11/GPX4通路来抑制铁死亡的发生，从而改善POF大鼠的卵巢功能。关键词：卵巢早衰;铁死亡;谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）;溶质载体家族7成员11（SLC7A11）344|316|4<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31
- 摘要：左归丸作为中医经典方剂之一，具有峻补真阴、填精益髓的功效，在临床上广泛应用于治疗因先天精亏而导致的疾病。该文通过系统回顾“先天不足”等相关古籍，以及左归丸治疗先天不足的现代科研文献，从左归丸的组方原则和中医理论中先天不足的概念出发，探讨了左归丸治疗先天不足的理论基础，并结合现代研究成果互参互证。古代医家早已发现父母之不足，可以导致子代形体发育异常、机体羸弱，张景岳将先天精气分为真阴、元阳，以“阴阳互济”组方左归丸，专补先天真阴。实验研究发现，左归丸能提高间隙连接蛋白43（Cx43）蛋白表达及间隙连接细胞间通讯（GJIC）功能，促进骨髓基质细胞（BMSCs）成骨分化成熟，改善先天精亏引起的骨发育异常；增强皮质颤蛋白（Reelin）表达和活性等改善脑发育异常；上调Cx43蛋白表达，干预磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路等改善生殖功能异常；促进T细胞发育成熟，激活胸腺内Wnt/β-链蛋白（β-catenin）信号通路等改善免疫功能异常；促进β-catenin的表达，抑制微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达改善皮肤功能异常。还能通过中医“精-神”之间的相关性，干预指导干细胞的分化。左归丸在部分儿科、男科、妇科疾病、老年疾病、内科疾病、骨科疾病和皮肤疾病的临床应用中均显示出显著的治疗效果。基于实验与临床应用的验证，文章进一步分析了“先天不足”的具体内涵，提出“先天不足”应细分精气阴阳，其中“先天精亏”属于真阴不足，可以导致子代的“肾精不足”，出现基于“肾藏精”的功能表达异常。药理学研究发现左归丸中菟丝子、枸杞子、牛膝含有槲皮素和山柰酚等有效成分，影响环加氧酶2（PTGS2）、白细胞介素-6（IL-6）、丝裂原活化蛋白激酶14（MAPK14）、肿瘤坏死因子（TNF）、17号染色体基因（TP53）、血管内皮生长因子A（VEGFA）、白蛋白（ALB）等靶点，在生殖系统发育、激素反应等方面发挥作用，左归丸在滋补肾中先天真阴方面相较于六味地黄丸具有独特的优势，能对“先天精亏”所致病证取得更好的临床疗效。通过该研究，期望对左归丸的功效有更全面、更深入的认识，对其临床应用有更深刻的体会，为先天不足、先天精亏的预防和治疗提供新的视角和方法，也希望为其在现代医疗保健，尤其是子代优育中的应用提供更多的科学依据和实践指导。关键词：左归丸;先天精亏;肾藏精;研究进展325|301|3<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-07-31
