补中益气汤防治自身免疫性甲状腺炎的药效及机制研究专题
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- 摘要：目的探讨补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎（AIT）模型小鼠肿瘤坏死因子受体超家族成员6（Fas）/Fas相关死亡结构域蛋白（FADD）/胱天蛋白酶-8（Caspase-8）细胞凋亡信号通路的影响。方法SPF级8周龄NOD.H-2h4小鼠120只，其中100只饲以高碘水（0.05% NaI）喂养，8周后制成AIT模型，按随机数字表法分为模型组、补中益气汤低、中、高剂量组（4.78、9.56、19.12 g·kg-1）、西药（硒酵母片）组（3.033×10-5 g·kg-1），每组20只，另设20只空白组小鼠。依据分组连续给药8周后取材，原位末端标记法（TUNEL）检测小鼠甲状腺细胞凋亡情况；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测甲状腺组织中Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3 mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测甲状腺组织Fas、FADD、Caspase-8、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、活化的（cleaved）Caspase-8、cleaved Caspase-3蛋白的表达并应用免疫组织化学染色法检测甲状腺组织Fas、Caspase-3蛋白定位表达情况。结果与空白组比较，模型组小鼠荧光显微镜下凋亡细胞阳性表达较多，Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-3的表达明显升高（P<0.05，P<0.01）；与模型组比较，各给药组小鼠荧光显微镜下甲状腺凋亡细胞阳性表达减少，Fas、FADD、Caspase-8、Caspase-3、cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-3的表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论补中益气汤可有效改善AIT小鼠甲状腺细胞凋亡，改善炎性损伤，其机制可能与抑制Fas/FADD/Caspase-8信号通路有关。关键词：补中益气汤;自身免疫性甲状腺炎;细胞凋亡;肿瘤坏死因子受体超家族成员6（Fas）201|443|8<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-08-21
- 摘要：目的探讨补中益气汤通过微小RNA-155（miR-155）/Nedd4家族相互作用蛋白1（Ndfip1）/磷酸酯酶与张力蛋白同源物（Pten）轴调控辅助性T细胞17（Th17）改善自身免疫性甲状腺炎（AIT）的作用机制。方法将100只SPF级8周龄NOD.H-2h4小鼠饲以高碘水（0.05%碘化钠）喂养，8周后制成AIT模型，按随机数字表法分为模型组、补中益气汤低、中、高剂量组（4.78、9.56、19.12 g·kg-1）、西药组（硒酵母片3.033×10-5 g·kg-1），每组20只，另设20只空白组小鼠，空白组及模型组灌胃等体积蒸馏水。连续给药8周后，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测小鼠甲状腺组织miR-155-5p、Ndfip1、Pten、蛋白质酪氨酸激酶1（Jak1）、信号传导和转录激活因子3（Stat3）、维甲酸相关孤儿受体γt（RORγt）、白细胞介素-17（IL-17）mRNA的表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测小鼠甲状腺组织Ndfip1、Pten、Jak1、Stat3、RORγt、IL-17蛋白的表达；免疫组化法检测小鼠甲状腺组织中Ndfip1、Pten蛋白表达；流式细胞术检测小鼠脾脏Th17细胞比例。结果与空白组比较，模型组小鼠脾脏Th17细胞比例显著升高（P<0.01），miR-155-5p、Jak1、Stat3、RORγt、IL-17的表达显著升高（P<0.01），Ndfip1、Pten的表达显著降低（P<0.01）；与模型组比较，各给药组小鼠脾脏Th17细胞比例降低（P<0.05，P<0.01），miR-155-5p、Jak1、Stat3、RORγt、IL-17的表达明显减少（P<0.05，P<0.01），Ndfip1、Pten的表达升高（P<0.05，P<0.01）。结论补中益气汤可改善AIT小鼠自身免疫失常，其机制可能与通过miR-155调控Ndfip1/Pten轴进而调控Th17细胞分化有关。关键词：补中益气汤;自身免疫性甲状腺炎（AIT）;辅助性T细胞17（Th17）;微小RNA-155（miR-155）;Nedd4家族相互作用蛋白1（Ndfip1）;磷酸酯酶与张力蛋白同源物（Pten）366|331|5<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-08-21
- 摘要：目的基于核因子E2相关性因子2（Nrf2）/过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）/谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）通路探讨补中益气汤改善自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠铁死亡的作用机制。方法将120只SPF级8周龄NOD.H-2h4小鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组及西药组，各20只，除空白组外，采用经典的高碘水（0.05%碘化钠）喂养，8周后制成AIT模型。补中益气汤低、中、高剂量组分别予4.78、9.56、19.12 g·kg-1补中益气汤灌胃，西药组给予3.033×10-5 g·kg-1硒酵母片混悬液灌胃，空白组及模型组给予等体积蒸馏水灌胃，连续8周后实施取材。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠甲状腺组织病理形态；采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清抗甲状腺过氧化物酶抗体（TPOAb）、抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）含量；试剂盒检测小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平；采用免疫荧光检测甲状腺组织中GPX4定位表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测甲状腺组织Nrf2、PPARγ、溶质载体家族7成员11（SLC7A11）、溶质载体家族3成员2（SLC3A2）、溶血卵磷脂酰基转移酶3（LPCAT3）、GPX4 mRNA表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测甲状腺组织Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、LPCAT3、GPX4蛋白表达。结果与空白组比较，模型组小鼠光镜下可见甲状腺组织内明显的淋巴细胞浸润现象，血清中TGAb、TPOAb含量显著升高（P<0.01），MDA水平显著升高，SOD水平显著降低（P<0.01）；甲状腺组织中Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、GPX4表达显著降低（P<0.01），LPCAT3的表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，补中益气汤各剂量组及西药组小鼠光镜下甲状腺组织内的淋巴细胞浸润程度减轻，血清中TPOAb、TGAb含量明显降低（P<0.05，P<0.01），MDA水平明显降低、SOD水平明显升高（P<0.05，P<0.01）；甲状腺组织中Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、GPX4表达明显升高、LPCAT3的表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。与西药组比较，补中益气汤各剂量组甲状腺组织中Nrf2、PPARγ、SLC7A11、SLC3A2、GPX4、LPCAT3表达总体趋势差异明显（P<0.05，P<0.01）。结论补中益气汤可有效改善AIT的炎症损伤，其作用机制可能与调控Nrf2/PPARγ/GPX4抑制铁死亡进程有关。关键词：补中益气汤;自身免疫性甲状腺炎;铁死亡;核因子E2相关性因子2（Nrf2）/过氧化物酶体增殖物激活受体
γ （PPARγ ）/谷胱甘肽过氧化酶4（GPX4）信号通路283|193|8<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-08-21 - 摘要：目的基于Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-κB（NF-κB）/黑色素瘤缺乏因子2（AIM2）炎性小体信号通路探索补中益气汤改善自身免疫性甲状腺炎（AIT）小鼠炎症损伤的作用机制。方法选用基因易感8周龄NOD.H-2h4小鼠120只，随机分为空白组、模型组、补中益气汤低、中、高剂量组（4.78、9.56、19.12 g·kg-1）、西药组（硒酵母片，3.033×10-5 g·kg-1）。各组AIT模型小鼠自由饮用0.05%碘化钠水溶液8周，建立AIT模型，空白组自由饮用蒸馏水。依据分组灌胃各给药组小鼠药液8周后取材，肉眼观察甲状腺组织肿胀情况，称量脾脏质量，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测甲状腺组织高迁移率族蛋白1（HMGB1）、TLR4、AIM2、NF-κB p65、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、IL-1β mRNA的表达，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测甲状腺组织HMGB1、TLR4、AIM2、NF-κB p65、磷酸化（p）-NF-κB p65、ASC、Caspase-1、IL-1β蛋白的表达，免疫荧光染色观察小鼠甲状腺组织HMGB1、AIM2、NF-κB p65的蛋白表达情况。结果与空白组比较，模型组小鼠甲状腺组织明显肿胀，脾脏质量明显增加，甲状腺组织HMGB1、TLR4、NF-κB p65、AIM2、ASC、Caspase-1、IL-1β表达显著升高（P<0.01）；与模型组比较，补中益气汤各剂量组小鼠甲状腺组织肿胀情况好转，脾脏质量明显下降，甲状腺组织HMGB1、TLR4、AIM2、NF-κB p65、p-NF-κB p65、ASC、Caspase-1、IL-1β表达明显降低（P<0.05，P<0.01）。结论补中益气汤可有效改善AIT的炎症损伤，调控TLR4/NF-κB/AIM2炎性小体信号通路的异常活化可能是其干预机制之一。关键词：补中益气汤;Toll样受体4（TLR4）/核转录因子-
κ B（NF-κ B）信号通路;黑色素瘤缺乏因子2（AIM2）炎性小体;自身免疫性甲状腺炎;炎症902|259|10<HTML><印刷PDF><网络PDF>更新时间：2024-08-21
