Effect of Salvianolic Acid B Combined with Puerarin on Pyroptosis of SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation

TU Shuxin; WANG Yan; HE Xiaoli

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20231106

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Effect of Salvianolic Acid B Combined with Puerarin on Pyroptosis of SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation

更新时间：2023-12-28

- Effect of Salvianolic Acid B Combined with Puerarin on Pyroptosis of SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 30, Issue 3, Pages: 54-63(2024)
- 作者机构：
  
  中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231106
  CLC： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- Received：17 April 2023，
  
  Published Online：31 May 2023，
  
  Published：05 February 2024
- 稿件说明：
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涂舒欣,王艳,贺晓丽.丹酚酸B-葛根素联用对氧糖剥夺/复氧损伤的SH-SY5Y神经细胞焦亡的影响[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(03):54-63.

TU Shuxin,WANG Yan,HE Xiaoli.Effect of Salvianolic Acid B Combined with Puerarin on Pyroptosis of SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(03):54-63.
涂舒欣,王艳,贺晓丽.丹酚酸B-葛根素联用对氧糖剥夺/复氧损伤的SH-SY5Y神经细胞焦亡的影响[J].中国实验方剂学杂志,2024,30(03):54-63. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231106.

TU Shuxin,WANG Yan,HE Xiaoli.Effect of Salvianolic Acid B Combined with Puerarin on Pyroptosis of SH-SY5Y Cells Injured by Oxygen-glucose Deprivation/Reoxygenation[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2024,30(03):54-63. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231106.

摘要

目的

基于细胞焦亡探讨丹酚酸B和葛根素联用对氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤的SH-SY5Y神经细胞的保护作用及机制。

方法

利用SH-SY5Y细胞构建OGD/R损伤模型，设立空白组、OGD/R组、10 μmol·L

-1

丹酚酸B组、100 μmol·L

-1

葛根素组、10 μmol·L

-1

丹酚酸B和100 μmol·L

-1

葛根素联用组及10 μmol·L

-1

NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体抑制剂MCC950组。除空白组外，其余各组细胞在OGD/R 6 h后迅速复糖复氧12 h进行OGD/R造模。采噻唑蓝（MTT）法检测细胞存活率，光学显微镜下观测细胞形态，分光光度计法检测培养上清中乳酸脱氢酶（LDH）释放率，Hoechst/碘化丙啶（PI）染色检测细胞膜损伤情况，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测NLRP3、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）、凋亡斑点样蛋白（ASC）和白细胞介素-1

（IL-1

） mRNA表达水平，免疫荧光检测NLRP3和Caspase-1蛋白表达的变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测IL-1

、ASC、NLRP3、Caspase-1和剪切胱天蛋白酶-1（cleaved Caspase-1）蛋白表达的变化。

结果

与空白组比较，OGD/R组SH-SY5Y细胞存活率显著降低（

0.01），细胞形态受损，培养上清中LDH渗漏率显著提高（

0.01），细胞膜破损，细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1

mRNA表达水平显著提高（

0.01），IL-1

、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平显著提高（

0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B、葛根素与丹酚酸B和葛根素联用均能显著提高OGD/R损伤后SH-SY5Y细胞的存活率（

0.01）；与单用组比较，联用组具有更好的效果（

0.01）。与OGD/R组比较，丹酚酸B和葛根素联用及MCC950均能改善细胞形态，降低细胞上清液LDH的渗漏（

0.01），减轻细胞膜损伤水平，降低SH-SY5Y细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC和IL-1

的mRNA表达水平（

0.05，

0.01），降低IL-1

、ASC、NLRP3、Caspase-1和cleaved Caspase-1蛋白的表达水平（

0.05，

0.01）。

结论

结果表明，丹酚酸B和葛根素联用能减轻OGD/R对SH-SY5Y细胞造成的损伤，这可能与其能够抑制细胞焦亡相关。

Abstract

Objective

To investigate the effect and mechanism of salvianolic acid B combined with puerarin in protecting the SH-SY5Y cells from the damage by oxygen-glucose deprivation/reoxygenation （OGD/R） based on pyroptosis.

Method

SH-SY5Y cells were used to establish the model of OGD/R， and cells were classified into the control， OGD/R， 10 μmol·L

-1

salvianolic acid B， 100 μmol·L

-1

puerarin， 10 μmol·L

-1

salvianolic acid B + 100 μmol·L

-1

puerarin， and 10 μmol·L

-1

NOD-like receptor protein 3 （NLRP3） inhibitor MCC950 groups. Except the control group， other groups were rapidly reoxygenated for 12 h after 6 h OGD for modeling. The cell survival rate was determined by the methyl thiazolyl tetrazolium （MTT） assay. An optical microscope was used to observe the cell morphology. A spectrophotometer was used to determine the content of lactic dehydrogenase （LDH） in culture supernatant. Cell damage was measured by Hoechst/PI staining. The mRNA levels of NLRP3， cysteinyl aspartate specific proteinase-1 （Caspase-1）， gasdermin D （GSDMD）， apoptosis-associated speck-like protein （ASC）， and interleukin-1

（IL-1

） were determined by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）. The protein activation of Caspase-1 and NLRP3 was detected by immunofluorescence. Western blot was employed to determine the protein levels of IL-1

， ASC， NLRP3， Caspase-1， and cleaved Caspase-1.

Result

Compared with the control group， the OGD/R group showed decreased cell survival rate （

0.01）， damaged cell morphology， increased leakage rate of LDH （

0.01）， up-regulated mRNA levels of NLRP3， Caspase-1， GSDMD， ASC， and IL-1

（

0.01）， and up-regulated protein levels of IL-1

， ASC， NLRP3， Caspase-1， and cleaved Caspase-1 （

0.01）. Compared with the OGD/R group， salvianolic acid B， puerarin， and salvianolic acid B combined with puerarin improved cell survival rate （

0.01）， and the combined treatment group outperformed salvianolic acid B and puerarin used alone （

0.01）. Salvianolic acid B combined with puerarin and MCC950 both improved cell morphology， reduced the leakage of LDH （

0.01）， alleviated cell damage， and down-regulated the mRNA levels of NLRP3， Caspase-1， GSDMD， ASC， and IL-1

（

0.05，

0.01） and also the protein levels of IL-1

， ASC， NLRP3， Caspase-1， and cleaved Caspase-1 （

0.05，

0.01）.

Conclusion

The results indicated that salvianolic acid B combined with puerarin can alleviate the OGD/R-induced damage of SH-SY5Y cells by inhibiting pyroptosis.

关键词

Keywords

references

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