Modified Ditan Tang Regulates Biorhythm-related Genes in Rat Model of Non-alcoholic Fatty Liver Disease

PANG Zhiwen; LIU Yu; SONG Nan; WANG Jie; ZHU Jingxuan; HUA Zhen; PEI Yupeng; WANG Qun

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20241214

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Modified Ditan Tang Regulates Biorhythm-related Genes in Rat Model of Non-alcoholic Fatty Liver Disease

更新时间：2025-03-04

- Modified Ditan Tang Regulates Biorhythm-related Genes in Rat Model of Non-alcoholic Fatty Liver Disease
- Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol. 31, Issue 6, Pages: 115-124(2025)
- 作者机构：
  
  1.河南中医药大学，郑州 450046
  2.辽宁中医药大学，沈阳 110847
  3.山东中医药大学附属医院，济南 250011
  4.辽宁中医药大学中医药创新工程技术中心，沈阳 110847
  5.辽宁中医药大学中医脏象理论及应用教育部重点实验室，沈阳 110847
- 作者简介：
- 基金信息：
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20241214
  CLC： R285;R289;R256.4
- Received：06 June 2024，
  
  Accepted：04 November 2024，
  
  Online First：07 August 2024，
  
  Published：20 March 2025
- 稿件说明：
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庞智文,刘玉,宋囡等.加味涤痰汤对非酒精性脂肪肝病大鼠生物节律相关基因的影响及机制[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(06):115-124.

PANG Zhiwen,LIU Yu,SONG Nan,et al.Modified Ditan Tang Regulates Biorhythm-related Genes in Rat Model of Non-alcoholic Fatty Liver Disease[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(06):115-124.
庞智文,刘玉,宋囡等.加味涤痰汤对非酒精性脂肪肝病大鼠生物节律相关基因的影响及机制[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(06):115-124. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241214.

PANG Zhiwen,LIU Yu,SONG Nan,et al.Modified Ditan Tang Regulates Biorhythm-related Genes in Rat Model of Non-alcoholic Fatty Liver Disease[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(06):115-124. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20241214.

摘要

目的

探讨加味涤痰汤对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）大鼠生物节律正负转录/翻译反馈回路（TTFL）相关基因的影响及其防治NAFLD的作用机制。

方法

65只健康SPF雄性SD大鼠随机分为正常组（20只）、模型组（15只）、加味涤痰汤低剂量组（10只）、加味涤痰汤中剂量组（10只）、加味涤痰汤高剂量组（10只）。模型组和加味涤痰汤低、中、高剂量组采用高脂饲料饲喂12周，并于第9周开始，加味涤痰汤低剂量组给予加味涤痰汤煎液2.68 g·kg

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、加味涤痰汤中剂量组给予加味涤痰汤煎液5.36 g·kg

-1

·d

-1

、加味涤痰汤高剂量组给予加味涤痰汤煎液10.7

2 g·kg

-1

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-1

，灌胃4周，正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃4周。全自动生化分析仪检测大鼠血清中甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平，TG、游离脂肪酸（NEFA）测定试剂盒检测肝脏TG、NEFA水平，苏木素-伊红（HE）染色法观察大鼠下丘脑、肝脏病理形态学表现，油红O染色法观察大鼠肝脏脂质沉积情况，免疫组化染色法检测下丘脑、肝脏芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1（BMAL1/ARNTL）水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠下丘脑、肝脏BMAL1、时钟基因（CLOCK）、周期蛋白2（PER2）和隐花色素1（Cry1） mRNA和蛋白水平。

结果

与正常组比较，模型组大鼠血清中TG、TC、LDL-C、AST、ALT水平显著升高（

0.01），HDL-C水平明显降低（

0.05），肝脏中TG、NEFA水平显著升高（

0.01），下丘脑神经元细胞固缩深染，脑区见大量空泡，肝脏见明显脂质沉积，下丘脑和肝脏中CLOCK、BMAL1 mRNA和蛋白表达显著升高（

0.01），Cry1、PER2 mRNA和蛋白表达显著降低（

0.01）；给予加味涤痰汤治疗后，加味涤痰汤低、中、高剂量组大鼠血清中TG、TC、LDL-C、ALT、AST水平明显降低（

0.05，

0.01），HDL-C水平明显升高（

0.05），肝脏中TG、NEFA水平明显降低（

0.05，

0.01），下丘脑神经元细胞核固缩深染有所改善，肝脏脂质沉积状况减轻，下丘脑、肝脏中CLOCK、BMAL1 mRNA和蛋白表达明显降低（

0.05，

0.01），Cry1、PER2 mRNA和蛋白表达明显升高（

0.05，

0.01）。

结论

加味涤痰汤可减轻NAFLD大鼠肝脏脂质沉积，并影响NAFLD大鼠生物节律TTFL中相关基因CLOCK、BMAL1、Cry1、PER2表达。

Abstract

Objective

To investigate the effects of modified Ditan tang on genes related to the transcription-translation feedback loop （TTFL） of biorhythm in the rat model of non-alcoholic fatty liver disease （NAFLD） and its mechanism for prevention and treatment of NAFLD.

Methods

Sixty-five healthy SPF male SD rats were randomly assigned into blank （

=20）， model （

=15）， and low-， medium-， and high-dose （2.68， 5.36， and 10.72 g·kg

-1

·d

-1

， respectively） modified Ditan tang （

=10） groups. Other groups except the blank group were fed a high-fat diet for 12 weeks. The modified Ditan tang groups we

re treated with the decoction at corresponding doses by gavage， and the blank and model groups were treated with an equal volume of normal saline from the 9th week for 4 weeks. The levels of triglyceride （TG）， total cholesterol （TC）， low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C）， aspartate aminotransferase （AST）， and alanine aminotransferase （ALT） in the serum were measured by an automatic biochemical analyzer. TG and non-esterified fatty acid （NEFA） assay kits were used to measure the levels of TG and NEFA in the liver. The pathological changes in the hypothalamus and liver were observed by hematoxylin-eosin staining， and the lipid deposition in the liver was observed by oil red O staining. The levels of brain-muscle ARNT-like protein 1 （BMAL1/ARNTL） in the hypothalamus and liver were determined by immunohistochemical staining. The mRNA and protein levels of BMAL1， circadian locomotor output cycles kaput （CLOCK）， period circadian clock 2 （PER2）， and cryptochrome1 （Cry1） in the hypothalamus and liver were determined by Real-time PCR and Western blot， respectively.

Results

Compared with the blank group， the model group showed elevated levels of TG， TC， LDL-C， AST， and ALT （

0.01） and a lowered level of HDL-C （

0.05） in the serum， elevated levels of TG and NEFA in the liver （

0.01）， pyknosis and deep staining of hypothalamic neuron cells， and a large number of vacuoles in the brain area. In addition， the model group showed lipid deposition in the liver， up-regulated mRNA and protein levels of CLOCK and BMAL1 （

0.01）， and down-regulated mRNA and protein levels of Cry1 and PER2 （

0.01） in the hypothalamus and liver. Compared with the model group， all the three modified Ditan tang groups showed lowered levels of TG， TC， LDL-C， ALT， and AST （

0.05，

0.01） and an elevated level of HDL-C （

0.05） in the serum， and lowered levels of TG and NEFA （

0.05，

0.01） in the liver. Furthermore， the three groups showed alleviated pyknosis and deep staining of hypothalamic neuron cells， reduced lipid deposition in the liver， down-regulated mRNA and protein levels of CLOCK and BMAL1 （

0.05，

0.01）， and up-regulated mRNA and protein levels of Cry1 and PER2 （

0.05，

0.01） in the hypothalamus and liver.

Conclusion

Modified Ditan tang can reduce lipid deposition in the liver and regulate the expression of CLOCK， BMAL1， Cry1， and PER2 in the TTFL of NAFLD rats.

关键词

Keywords

references

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