降糖消脂片对代谢相关脂肪性肝病小鼠肝脏生物钟相关基因CLOCK、BMAL1、REV-ERB<italic style="font-style: italic">α</italic>、REV-ERB<italic style="font-style: italic">β</italic>的影响

陈潇潇; 侯敏; 王攀; 任钧国; 刘建勋

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221844

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降糖消脂片对代谢相关脂肪性肝病小鼠肝脏生物钟相关基因CLOCK、BMAL1、REV-ERBα、REV-ERBβ的影响

药理 | 更新时间：2022-08-11

- 降糖消脂片对代谢相关脂肪性肝病小鼠肝脏生物钟相关基因CLOCK、BMAL1、REV-ERBα、REV-ERBβ的影响
- Effect of Jiangtang Xiaozhi Tablet on Liver Circadian Clock-related Genes CLOCK， BMAL1， REV-ERBα， and REV-ERBβ in Mice with Metabolic Dysfunction-associated Fatty Liver Disease
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第18期页码：20-29
- 作者机构：
  
  中国中医科学院西苑医院基础医学研究所，中药药理北京市重点实验室，北京 100091
- 作者简介：
  
  陈潇潇，在读硕士，从事中药药理学研究，E-mail：chenxiangjiao@126. com
  任钧国，研究员，博士生导师，从事中药药理学研究，Tel：010-62835612，E-mail：reek2003@163.com
- 基金信息：
  
  国家“重大新药创制”科技重大专项(2017ZX09301018);中国中医科学院基本科研业务费自主选题项目(ZZ11-027;zz110324)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221844
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R575
- 纸质出版日期：2022-09-20，
  
  网络出版日期：2022-07-22，
  
  收稿日期：2022-04-06，
- 稿件说明：
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陈潇潇,侯敏,王攀等.降糖消脂片对代谢相关脂肪性肝病小鼠肝脏生物钟相关基因CLOCK、BMAL1、REV-ERBα、REV-ERBβ的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(18):20-29.

CHEN Xiaoxiao,HOU Min,WANG Pan,et al.Effect of Jiangtang Xiaozhi Tablet on Liver Circadian Clock-related Genes CLOCK， BMAL1， REV-ERBα， and REV-ERBβ in Mice with Metabolic Dysfunction-associated Fatty Liver Disease[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(18):20-29.
陈潇潇,侯敏,王攀等.降糖消脂片对代谢相关脂肪性肝病小鼠肝脏生物钟相关基因CLOCK、BMAL1、REV-ERBα、REV-ERBβ的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(18):20-29. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221844.

CHEN Xiaoxiao,HOU Min,WANG Pan,et al.Effect of Jiangtang Xiaozhi Tablet on Liver Circadian Clock-related Genes CLOCK， BMAL1， REV-ERBα， and REV-ERBβ in Mice with Metabolic Dysfunction-associated Fatty Liver Disease[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(18):20-29. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221844.

摘要

目的

研究降糖消脂片（JTXZT）对代谢相关脂肪性肝病的改善作用，从生物钟相关基因昼夜运动输出周期（CLOCK）、脑和肌肉芳烃受体核转录因子样蛋白-1基因（BMAL1）、孤儿核激素受体

（REV-ERB

）、孤儿核激素受体

（REV-ERB

）的角度研究降糖消脂片的作用机制。

方法

将50只雄性SPF级C57BL/6J小鼠随机分为正常组（10只）与模型组（40只），正常组饲喂正常饲料，模型组饲喂高脂饲料。4周后将模型组随机分为4组，每组10只，即模型组、降糖消脂片高、低剂量（12.5、6.25 g·kg

-1

）组、奥利司他组（70 mg·kg

-1

），正常组和模型组小鼠灌胃等体积蒸馏水，连续灌胃8周；测定体质量，生化法检测血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）含量，酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清游离脂肪酸（FFA）、瘦素的含量；苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠肝组织和附睾脂肪病理变化、马松（Masson）染色观察肝纤维化程度、油红O染色观察脂质变化情况；蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫组化检测生物钟相关基因CLOCK、BMAL1、REV-ERB

、REV-ERB

蛋白表达水平的变化。

结果

与正常组比较，模型组小鼠TG，TC，LDL-C，HDL-C，AST，ALT，FFA、瘦素含量明显升高（

0.05，

0.01），肝组织细胞出现明显气球样变性和灶性小泡性脂肪变，脂肪细胞显著增大，有炎细胞聚集灶及纤维组织的增生，固醇调节元件结合蛋白1（SREBP1）和过氧化物酶体增殖物激活受体

（PPAR

）蛋白表达显著增加（

0.01），而PPAR

蛋白表达明显减少（

0.05），CLOCK、BMAL1、REV-ERB

和REV-ERB

蛋白表达明显减少（

0.05，

0.01）。与模型组比较，JTXZT-H组可明显下调小鼠TG，TC，LDL-C，HDL-C，AST，ALT，FFA、瘦素含量（

0.05，

0.01），JTXZT各组肝组织气球样变性程度及范围明显减轻，肝窦压迫明显减轻，炎细胞浸润及纤维组织增生不明显，SREBP1、PPAR

蛋白表达均明显减少（

0.05，

0.01），PPAR

蛋白表达显著增加（

0.01），CLOCK、BMAL1、REV-ERB

和REV-ERB

蛋白表达明显增多（

0.05，

0.01）。

结论

JTXZT对高脂饮食引起的小鼠代谢相关脂肪性肝病具有显著的改善作用，可能通过上调CLOCK、BMAL1、REV-ERB

和REV-ERB

蛋白的表达，来调控下游相关脂质代谢蛋白（SREBP1、PPAR

、PPAR

）的表达，达到治疗代谢相关脂肪性肝病的作用。

Abstract

Objective

To explore the effect of Jiangtang Xiaozhi tablet （JTXZT） on metabolic dysfunction-associated fatty liver disease and to study the mechanism from the perspective of circadian clock-related genes such as circadian locomotor output cycles kaput （CLOCK）， brain and muscle aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator-like protein 1 （BMAL1）， reverse-eritroblastosis receptor （REV-ERB）

and

Method

A total of 50 male SPF C57BL/6J mice were randomized into normal group （

=10） and modeling group （

=40）. The normal group was fed with normal diet， and the modeling group with high-fat diet for 4 weeks. Then the model mice were randomly classified into model group， high-dose （12.5 g·kg

-1

） and low-dose （6.25 g·kg

-1

） Jiangtang Xiaozhi tablet groups， and orlistat group （70 mg·kg

-1

）， with 10 mice in each group. The normal group and model group received equivalent volume of distilled water （8 weeks）. Then， the body weight of mice was measured， and the content of serum triglyceride （TG）， total cholesterol （TC）， low-density lipoprotein cholesterol （LDL-C）， high-density lipoprotein cholesterol （HDL-C）， aspartate aminotransferase （AST）， and alanine aminotransferase （ALT） was determined with biochemical method. Serum content of free fatty acid （FFA） and leptin was detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Pathological changes of liver tissue and epididymal adipose tissue were observed based on hematoxylin-eosin （HE） staining. Liver fibrosis was examined based on Masson's trichrome staining， and changes of lipids based on oil red O staining. The expression of CLOCK， BMAL1， REV-ERB

， and REV-ERB

was detected by Western blot and immunohistochemistry assay.

Result

Compared with the normal group， the model group had high content of TG， TC， LDL-C， HDL-C， AST， ALT， FFA， and leptin （

0.05，

0.01）， showed ballooning degeneration and focal microvesicular steatosis of liver cells， enlarged adipocytes， and inflammatory cell clusters and fibrous tissue hyperplasia， and displayed increased protein expression of sterol regulatory element binding protein （SREBP） 1 and peroxisome proliferators-activated receptor （PPAR）

（

0.01） and decreased protein expression of PPAR

（

0.05）， CLOCK， BMAL1， REV-ERB

and

（

0.05，

0.01）. Compared with the model group， JTXZT-H group down-regulated the content of TG， TC， LDL-C， HDL-C， AST， ALT， FFA， and leptin in mice （

0.05，

0.01）， and the JTXZT groups demonstrated reduction in the degree and range of ballooning degeneration of liver tissue， alleviation of the compression of hepatic sinusoidal tissue， unobvious inflammatory cell infiltration and fibrous tissue proliferation， reduction in the expression of SREBP1 and PPAR

（

0.05，

0.01）， and rise of the protein expression of PPAR

（

0.01）， CLOCK， BMAL1， REV-ERB

， and REV-ERB

（

0.05，

0.01）.

Conclusion

JTXZT can significantly alleviate the metabolic dysfunction-associated fatty liver disease in mice caused by high-fat diet. The mechanism is the likelihood that it regulates downstream related lipid metabolism proteins （such as SREBP1， PPAR

， and PPAR

）.

关键词

代谢相关脂肪性肝病降糖消脂片生物钟相关基因

Keywords

metabolic dysfunction-associated fatty liver diseaseJiangtang Xiaozhi tabletcircadian clock-related genes

references

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DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221844

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