基于叶绿体DNA序列和ISSR分子标记的菘蓝不同种质遗传变异分析

朱田田; 杜弢; 晋玲; 王富胜; 康舒淇; 徐丽; 张明惠; 林和

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20221015

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基于叶绿体DNA序列和ISSR分子标记的菘蓝不同种质遗传变异分析

药学基础 | 更新时间：2022-08-11

- 基于叶绿体DNA序列和ISSR分子标记的菘蓝不同种质遗传变异分析
- Genetic Diversity Analysis of Isatis indigotica Germplasm Materials by Chloroplast DNA Variation and ISSR Molecular Marker
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第18期页码：117-126
- 作者机构：
  
  1.甘肃中医药大学，兰州 730000
  2.西北中藏药省部共建协同创新中心，兰州 730000
  3.甘肃省珍稀中药资源评价与保护利用工程研究中心，兰州 730000
  4.定西市农业科学研究院，甘肃定西 743000
  5.兰州大学信息科学与工程学院，兰州 730000
- 作者简介：
  
  朱田田，副教授，硕士生导师，从事中药资源评价与分子生药学研究，E-mail：ztt0935@163.com
  晋玲，教授，博士生导师，从事中药资源开发与质量综合评价研究，E-mail：zyxyjl@163.com
- 基金信息：
  
  道地药材生态种植及质量保障项目(国中医药科技〔2020〕153号);中国工程院战略研究与咨询项目(GS2021ZDA06-2);中央本级重大增减支项目(2060302);甘肃省重点研发计划项目(21YF5FA110;20YF8NJ166);定西市科技计划项目(DX2020N10)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221015
  中图分类号： R284.2;R289;R22;R2-031;R33
- 纸质出版日期：2022-09-20，
  
  网络出版日期：2022-06-20，
  
  收稿日期：2022-02-04，
- 稿件说明：
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朱田田,杜弢,晋玲等.基于叶绿体DNA序列和ISSR分子标记的菘蓝不同种质遗传变异分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(18):117-126.

ZHU Tiantian,DU Tao,JIN Ling,et al.Genetic Diversity Analysis of Isatis indigotica Germplasm Materials by Chloroplast DNA Variation and ISSR Molecular Marker[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(18):117-126.
朱田田,杜弢,晋玲等.基于叶绿体DNA序列和ISSR分子标记的菘蓝不同种质遗传变异分析[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(18):117-126. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221015.

ZHU Tiantian,DU Tao,JIN Ling,et al.Genetic Diversity Analysis of Isatis indigotica Germplasm Materials by Chloroplast DNA Variation and ISSR Molecular Marker[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(18):117-126. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20221015.

摘要

目的

对47个菘蓝种质进行序列变异和遗传多样性分析，开展其遗传分化和遗传结构研究。

方法

采用试剂盒提取法提取菘蓝基因组DNA，用2条叶绿体DNA（cp DNA）序列和5条简单重复序列（ISSR）引物进行扩增并测序，通过软件Chromas、Mega 7.0、DanSP5、GenALEx对得到的序列进行校正、拼接及序列特征分析，利用软件PERMUT、PopGen1.31进行遗传多样性参数和遗传结构分析，最后利用NTSYS软件得到47个菘蓝种质的非加权组平均法（UPGMA）聚类树状图。

结果

菘蓝47个种质的129个样本被成功扩增和测序，2个cp DNA序列经拼接后长度为1 412 bp，共有377个多态性变异位点，单倍型数为36个，Fu and Li's D*检验在

0.01水平上显著；基于cp DNA的核苷酸多样性（

）、平均遗传多样性（

）和总遗传多样性（

）分别为0.119 89、0.787和0.891，遗传分化系数遗传分化系数（

Gst

）、核苷酸分化系数（

Nst

）和群体间遗传分化指数（

Fst

）分别为0.117、0.468和0.488，基因流（

）值为0.615；基于ISSR的多态位点百分率（PPB）、香农（Shannon）信息多样性指数(

)、Nei's基因遗传多样度指数(

)和Gst平均值为78.85%、0.334 8、0.218 6和0.754 4，

值为0.162 8。

结论

菘蓝在物种水平上遗传多样性较高，具有丰富的单倍型类型，不同种质居群间遗传分化较明显，且基因交流不频繁，遗传变异主要存在于居群间，种群近期积累了较多的低频基因突变，推测其历史上曾经历了显著的区域扩张。

Abstract

Objective

To analyze the sequence variation and genetic diversity of 47

Isatis indigotica

germplasm materials， and carry out the study on the genetic differentiation and structure.

Method

Genomic DNA of 47

I. indigotica

germplasm materials were extracted by kit extraction method. Two chloroplast DNA （cp DNA） sequences and five inter-simple sequence repeat （ISSR） primers were used for amplification and sequencing. Chromas， Mega 7.0， DanSP5， and GenALEx were used to calibrate， splice， and analyze the sequence characteristics. PERMUT and PopGen 1.31 were used to analyze the genetic diversity parameters and genetic structure， and NTSYS was used to obtain the unweighted pair-group method with arithmetic means（UPGMA） clustering tree plot of 47

I. indigotica

germplasm materials.

Result

A total of 129 samples from 47

I. indigotica

germplasm materials were successfully amplified and sequenced. The length of 2 cp DNA sequences after spliced was 1 412 bp， and there were 377 polymorphic variation loci， and 36 haplotypes. Fu and Li's D* test was significant （

0.01）. The values of

，

， and

based on cp DNA were 0.119 89， 0.787， and 0.891， respectively. The genetic differentiation coefficients of gene differentiation coefficient（

Gst

）， nucleotide differentiation coefficient（

Nst

）， and fixation index（

Fst

） were 0.117， 0.468， and 0.488， respectively， and the gene flow （

） was 0.615. The mean values of PPB， Shannon information diversity index（

）， Nei's genetic diversity index（

）， and

Gst

based on ISSR were 78.85%， 0.334 8， 0.218 6， and 0.754 4， respectively， and the

value was 0.162 8.

Conclusion

I. indigotica

has high genetic diversity and abundant haplotypes at the species level， with abundant haplotypes. Genetic differentiation among different germplasm materials is obvious， and gene exchange is not frequent. Genetic variation mainly exists among populations. The population has accumulated various low-frequency gene mutations recently， suggesting that it has experienced significant regional expansion in the history.

关键词

菘蓝种质叶绿体DNA（cp DNA）简单重复序列（ISSR）分子标记遗传变异

Keywords

Isatis indigoticagermplasmchloroplast DNA （cp DNA）inter-simple sequence repeat （ISSR）genetic variation

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