胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制

李朝燕; 陈伟霞; 秦梦梦; 李佳; 徐燕; 赵爱光

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20192323

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胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制

药理 | 更新时间：2021-02-09

- 胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制
- Mechanism of Weichang' an on Autophagy of MKN45 Cells
- 中国实验方剂学杂志 2020年26卷第1期页码：71-77
- 作者机构：
  
  1.上海中医药大学　附属龙华医院，上海　 200032
  2.河南省中医院，郑州　 450002
- 作者简介：
  
  [第一作者]　李朝燕，博士，主治医师，从事中西医结合防治消化道恶性肿瘤研究，E-mail：lizhaoyan2008@hotmail.com
  *赵爱光，博士，主任医师，从事中西医结合防治消化道恶性肿瘤研究，E-mail：aiguangzhao@qq.com
- 基金信息：
  
  国家重点研发计划项目(2017YFC1700605);国家“重大新药创制”科技重大专项(2017ZX09304-001);国家中医临床研究基地业务建设科研专项(JDZX2015068);上海中医药大学附属龙华医院龙医学者（育苗计划）项目(LYTD-44)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20192323
  中图分类号： R22; R242; R2-031; R285.5
- 收稿日期：2019-04-21，
  
  网络出版日期：2019-08-19，
  
  纸质出版日期：2020-01-05
- 稿件说明：
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李朝燕, 陈伟霞, 秦梦梦, 等. 胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制[J]. 中国实验方剂学杂志, 2020,26(1):71-77.

Zhao-yan LI, Wei-xia CHEN, Meng-meng QIN, et al. Mechanism of Weichang' an on Autophagy of MKN45 Cells[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2020, 26(1): 71-77.
李朝燕, 陈伟霞, 秦梦梦, 等. 胃肠安诱导胃癌MKN45细胞自噬的机制[J]. 中国实验方剂学杂志, 2020,26(1):71-77. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20192323.

Zhao-yan LI, Wei-xia CHEN, Meng-meng QIN, et al. Mechanism of Weichang' an on Autophagy of MKN45 Cells[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2020, 26(1): 71-77. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20192323.

摘要

目的：

观察健脾复方胃肠安对人胃癌MKN45细胞自噬的影响，探讨其抗肿瘤的作用机制。

方法：

体外培养人胃癌MKN45细胞，采用细胞活力检测法(CCK-8)检测不同质量浓度胃肠安(250，500，1 000，2 000 mg·L

-1

)作用体外培养的人胃癌细胞MKN45细胞，共孵育24，48，72 h，检测细胞增殖活力的改变；采用吖啶橙(AO)染色和单丹磺胺戊二胺(MDC)染色观察胃肠安对胃癌MKN45细胞自噬小体及自噬囊泡的变化；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)，酵母ATG6同源物(Beclin1)，泛素结合蛋白-1(p62)，自噬相关基因5(ATG5)，自噬相关基因7(ATG7)mRNA和蛋白的表达。

结果：

CCK-8实验显示，与空白组比较，胃肠安(500，1 000，2 000 mg·L

-1

)可明显抑制MKN45细胞的增殖能力(

0.05，

0.01)；AO和MDC染色显示，与空白组比较，随着胃肠安浓度的增加，自噬小体和自噬囊泡含量逐渐增加；Real-time PCR和Western blot结果显示，与空白组比较，胃肠安(1 000 mg·L

-1

)组细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ，Beclin1，ATG5，ATG7 mRNA和蛋白表达升高(

0.05)，p62表达下降(

0.05，

0.01)。

结论：

胃肠安可诱导人胃癌MKN45细胞自噬，其机制涉及上调自噬相关基因Beclin1，ATG5，ATG7 mRNA和蛋白表达，下调p62 mRNA和蛋白表达，促进自噬标志蛋白LC3-I向LC3-Ⅱ转化。

Abstract

Objective:

To explore the effect of Weichang' an (WCA) on the autophagy of human gastric cancer MKN45 cells and its possible anti-cancer mechanism.

Method:

MKN45 cells were cultured

in vitro

and incubated with different concentrations (250

500

1 000

2 000 mg·L

-1

) of WCA for 24

72 h. Cell counting kit-8 (CCK-8) assay was used to detect the cell proliferation. AO/EB Dyeing (AO) staining and monodansylcadaverin (MDC) staining were used to observe the changes of the effect of WCA on autophagosome and autophagic vesicles in gastric cancer MKN45 cells at 48 h. Real-time polymerase chain reaction (Real-time PCR) and Western blot were used to detect microtubule-associated protein 1 light chain 3 (LC3)

Beclin1

sequestosome 1 (p62)

human autophagy-related gene 5 (ATG5)

human autophagy-related gene 7 (ATG7) mRNA and protein expression levels.

Result:

WCA showed a dose-and-time-dependent growth inhibition at the concentration above 1 000 mg·L

-1

. Compared with the blank group

WCA (500

1 000

2 000 mg·L

-1

) significantly inhibited the proliferation of MKN45 cells (

0.05

0.01). AO staining and MDC staining showed that autophagosomes and autophagic sacs increased with the rise of WCA concentration compared with the blank group. Real-time PCR and Western blot showed that the expressions of autophagy-related proteins LC3-Ⅱ

Beclin1

ATG5

ATG7

mRNA and protein increased gradually after WCA (1 000 mg·L

-1

) intervention

while p62 expression decreased (

0.05

0.01).

Conclusion:

WCA induces the autophagy of human gastric cancer MKN45 cells in a time-and dose-dependent manner

in vitro

which may be related to the up-regulation of LC3-Ⅱ

Beclin1

ATG5 and ATG7 as well as the down-regulation of p62 and LC3-Ⅰ.

关键词

Keywords

references

F Bray , J Ferlay , I Soerjomataram , et al . Global cancer statistics 2018: GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries [J]. CA Cancer J Clin , 2018 , 68 ( 6 )： 394 - 424 .

W CHEN , R ZHENG , P D Baade , et al . Cancer statistics in China, 2015 [J]. CA Cancer J Clin ， 2016 , 66 ( 2 )： 115 - 132 .

单磊，汪子书．胃癌转移分子机制研究进展 [J]. 包头医学院学报， 2017 , 33 ( 10 )： 121 - 124 .

L Bruckova , T Soukup , B Visek , et al . Proliferative potential and phenotypic analysis of long-term cultivated human granulosa cells initiated by addition of follicular fluid [J]. J Assist Reprod Genet , 2011 , 28 ( 10 )： 939 - 950 .

Y SONG , P ZHANG , Y SUN , et al . AMPK activation-dependent autophagy compromises oleanolic acid-induced cytotoxicity in human bladder cancer cells [J]. Oncotarget , 2017 , 8 ( 40 )： 67942 - 67954 .

A YANG , Y ZHAO , Y WANG , et al . Huaier suppresses proliferative and metastatic potential of prostate cancer PC3 cells via downregulation of Lamin B1 and induction of autophagy [J]. Oncol Rep , 2018 , 39 ( 6 )： 3055 - 3063 .

S R LIN , Y S FU , M J Tsai , et al . Natural compounds from herbs that can potentially execute as autophagy inducers for cancer therapy [J]. Int J Mol Sci , 2017 , 18 ( 7 )： 1412 .

陈伟霞，牛垚飞，邹煜明，等．胃肠安对人胃癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用 [J]. 中国实验方剂学杂志， 2018 , 24 ( 1 )： 91 - 95 .

何萍，梁云麒，胡兵，等．胃肠安对人胃癌MGC-803细胞裸鼠皮下移植瘤生长及细胞凋亡的作用 [J]. 上海中医药大学学报， 2018 , 32 ( 1 )： 65 - 69 .

陈伟霞，牛垚飞，陈彬，等．健脾中药胃肠安对胃癌MKN45细胞侵袭迁移能力的影响 [J]. 中华中医药学刊， 2018 , 36 ( 9 )： 2121 - 2124 .

李佳，陈伟霞，李朝燕，等 . 胃肠安颗粒剂与汤剂抑制人胃癌裸鼠皮下移植瘤生长、淋巴结转移作用比较及对RUFY3，SNAI1，VEGF和EMT蛋白的影响 [J]. 中国实验方剂学杂志， 2019 , 25 ( 5 )： 92 - 97 .

苑伟，陈彬，赵爱光，等．健脾复方对人胃癌细胞株MKN-45裸小鼠皮下移植瘤模型非特异性免疫功能的影响 [J]. 中华中医药杂志， 2013 , 28 ( 9 )： 2766 - 2770 .

邹煜明，陈伟霞，牛垚飞，等．健脾中药胃肠安与5-FU相互作用的中效原理评价 [J]．中医学报， 2019 ， 34 ( 2 )： 333 - 338 .

A E Slagter , E P M Jansen , H W M van Laarhoven , et al . CRITICS-Ⅱ： a multicentre randomised phase Ⅱ trial of neo-adjuvant chemotherapy followed by surgery versus neo-adjuvant chemotherapy and subsequent chemoradiotherapy followed by surgery versus neo-adjuvant chemoradiotherapy followed by surgery in resectable gastric cancer [J]． BMC Cancer ， 2018 , 18 ( 1 )： 877 .

H Wilke , K Muro , E Van Cutsem et al . Ramucirumab plus paclitaxel versus placebo plus paclitaxel in patients with previously treated advanced gastric or gastro-esophageal junction adenocarcinoma (RAINBOW). a double-blind, randomized phase 3 trial [J]. Lancet Oncol ， 2014 ， 15 ( 11 )： 1224 - 1235 .

J LI , S QIN , J XU ， et al . Randomized, double-blind, placebo-controlled phase Ⅲ trial of apatinib in patients with chemotherapy-refractory advanced or metastatic adenocarcinoma of the stomach or gastroesophageal junction [J]. J Clin Oncol ， 2016 ， 34 ( 13 )： 1448 - 1454 .

L ZHANG , C WU , Y ZHANG ， et al . Comparison of efficacy and toxicity of traditional Chinese medicine (TCM) herbal mixture LQ and conventional chemotherapy on lung cancer metastasis and survival in mouse models [J]. PLoS One ， 2014 , 9 ( 10 )： e109814 .

段连香，郑坚，赵爱光，等．中医药辨证治疗对老年晚期胃癌预后影响的同期对照研究 [J]．肿瘤学杂志， 2018 , 24 ( 8 )： 800 - 807 .

Y XU , A G ZHAO , Z Y LI , et al . Survival benefit of traditional Chinese herbal medicine (a herbal formula for invigorating spleen) for patients with advanced gastric cancer [J]. Integr Cancer Ther ， 2013 , 12 ( 5 )： 414 - 422 .

F Pietrocola , V Izzo , M Niso-Santano , et al . Regulation of autophagy by stress-responsive transcription factors [J]. Semin Cancer Biol ， 2013 , 23 ( 5 )： 310 - 322 .

H Y ZHENG , X Y ZHANG , X F WANG ， et al . Autophagy enhances the aggressiveness of human colorectal cancer cells and their ability to adapt to apoptotic stimulus [J]. Cancer Bio Med ， 2012 , 9 ( 2 )： 105 - 110 .

F Scarlatti , R Maffei , I Beau , et al . Role of non-canonical Beclin 1-independent autophagy in cell death induced by resveratrol in human breast cancer cells [J]. Cell Death Differ ， 2008 , 15 ( 8 )： 1318 - 1329 .

R Ishimura , K Tanaka , M Komatsu ． Dissection of the role of p62/Sqstm1 in activation of Nrf2 during xenophagy [J]. FEBS Lett , 2014 , 588 ( 5 )： 822 - 828 .

M C Gomez-Puerto , H Folkerts , A T Wierenga , et al . Autophagy proteins ATG5 and ATG7 are essential for the maintenance of human CD34 ＋ hematopoietic stem-progenitor cells [J]. Stem Cells ， 2016 , 34 ( 6 )： 1651 - 1663 .

侯贝贝，游宇，刘玉晖，等 . 补阳还五汤对LPS诱导巨噬细胞活化与自噬的影响 [J]．中国实验方剂学杂志， 2019 ， 25 ( 11 )： 16 - 23 .

J L CHEN , C J CHANG , J Y WANG , et al . In vitro and in vivo effects of Jia-Wei-Xiao-Yao-San in human breast cancer MCF-7 cells treated with tamoxifen [J]. Integr Cancer Ther ， 2014 , 13 ( 3 )： 226 - 239 .

N ZOU , Y WEI , F LI , et al . The inhibitory effects of compound Muniziqi granule against B16 cells and harmine induced autophagy and apoptosis by inhibiting Akt/mTOR pathway [J]. BMC Complement Altern Med ， 2017 , 17 ( 1 )： 517 .

焦延娜，韩淑燕 . 抗癌中药单体对肿瘤细胞自噬的调控 [J]．中国实验方剂学杂志， 2017 ， 23 ( 7 )： 206 - 214 .

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