诃子、甘草与制草乌合用调控心脏代谢酶CYP2J3减毒机制

李晗; 宋玲; 高云航; 陈腾飞; 侯红平; 彭博; 叶祖光; 张广平

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.202202326

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诃子、甘草与制草乌合用调控心脏代谢酶CYP2J3减毒机制

药理 | 更新时间：2023-08-07

- 诃子、甘草与制草乌合用调控心脏代谢酶CYP2J3减毒机制
- Detoxification Mechanism of Combined Chebulae Fructus， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta in Regulating Cardiac Metabolic Enzyme CYP2J3
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第17期页码：88-95
- 作者机构：
  
  中国中医科学院中药研究所，北京 100700
- 作者简介：
  
  李晗，副研究员，从事中药药理与毒理研究工作，E-mail：hli1989@ icmm.ac.cn
  张广平，研究员，从事中药药理与毒理研究工作，E-mail：iamzgp@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(82204740);中国中医科学院科技创新工程项目(CI2021B015);中国中医科学院科技创新工程重大攻关项目(CI2021A04802)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.202202326
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R287
- 收稿日期：2022-07-13，
  
  网络出版日期：2022-10-08，
  
  纸质出版日期：2023-09-05
- 稿件说明：
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李晗,宋玲,高云航等.诃子、甘草与制草乌合用调控心脏代谢酶CYP2J3减毒机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(17):88-95.

LI Han,SONG Ling,GAO Yunhang,et al.Detoxification Mechanism of Combined Chebulae Fructus， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta in Regulating Cardiac Metabolic Enzyme CYP2J3[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(17):88-95.
李晗,宋玲,高云航等.诃子、甘草与制草乌合用调控心脏代谢酶CYP2J3减毒机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(17):88-95. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202202326.

LI Han,SONG Ling,GAO Yunhang,et al.Detoxification Mechanism of Combined Chebulae Fructus， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta in Regulating Cardiac Metabolic Enzyme CYP2J3[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(17):88-95. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.202202326.

摘要

目的

基于心脏细胞色素P450（CYP450）系统分别考察诃子、甘草与制草乌及有效成分鞣花酸、甘草苷与乌头碱合用的减毒机制。

方法

在体内实验方面，大鼠随机分为空白组，制草乌组（0.25 g·kg

-1

），诃子组（0.25 g·kg

-1

），甘草组（0.25 g·kg

-1

）和诃子+甘草+制草乌合用组（0.25 g·kg

-1

+ 0.25 g·kg

-1

+ 0.25 g·kg

-1

，以制草乌为标准），给药8 d后测定大鼠肌酸激酶（CK）与乳酸脱氢酶（LDH），观察大鼠心脏组织的病理学改变，并选择实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞色素P2J3（CYP2J3） mRNA和蛋白表达水平的变化；在体外实验方面，设空白组、乌头碱组、鞣花酸组、甘草苷组与乌头碱+鞣花酸+甘草苷合用组，利用高内涵分析技术检测其对细胞数目、DNA含量、活性氧（ROS）和线粒体膜电位（MMP）的影响，同时检测CYP2J3 mRNA和蛋白表达水平的变化。

结果

体内实验中，与空白组比较，制草乌组大鼠血清中CK、LDH水平均明显升高（

0.05，

0.01），合用组CK、LDH活性降低；同时病理染色结果显示诃子和甘草可减轻制草乌导致的心脏损伤；Real-time PCR结果显示，与空白组比较，制草乌可下调CYP2J3 mRNA转录水平（

0.05），与诃子、甘草合用后可上调该亚型的表达（

0.01）；蛋白翻译水平与mRNA转录水平基本一致。体外实验中，高内涵分析结果显示，与空白组比较，乌头碱组的细胞数量、DNA含量与MMP的荧光值显著降低（

0.01），合用组的细胞数量、DNA含量与MMP的荧光值也明显降低（

0.05，

0.01），但其相应荧光值均高于乌头碱组；与空白组比较，乌头碱下调CYP2J3 mRNA转录水平（

0.05），合用组能够逆转乌头碱下调CYP2J3 mRNA的能力（

0.05）。

结论

诃子、甘草与制草乌合用减毒机制主要是鞣花酸、甘草苷与乌头碱合用后，上调了CYP2J3表达，促进花生四烯酸（AA）代谢生成环氧二十碳三烯酸（EETs），进而降低心脏损伤的作用，且这种作用可能起始于转录环节。

Abstract

Objective

To investigate the detoxification mechanism of Chebulae Fructus， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and Prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta， and their effective components ellagic acid， liquiritin and aconitine based on cardiac cytochrome P450 （CYP450） system.

Method

in vivo

experiments， rats were randomly divided into control group， prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta group （0.25 g·kg

-1

）， Chebulae Fructus group （0.252 g·kg

-1

）， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma group （0.25 g·kg

-1

） and combination group （0.25 g·kg

-1

Chebulae Fructus+0.25 g·kg

-1

Glycyrrhizae Radix et Rhizoma+0.25 g·kg

-1

prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta， with prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta as standard）. After 8 days of administration， creatine kinase （CK） and lactate dehydrogenase （LDH） in rats were detected to observe the pathological changes of heart tissue. Real-time PCR and Western blot were performed to detect the mRNA and protein expressions of CYP2J3， respectively. In

in vitro

experiments， control group， aconitine group， ellagic acid group， liquiritin group and combination group （aconitine+ellagic acid+liquiritin） were set， and their effects on cell number， DNA content， reactive oxygen species （ROS） and mitochondrial membrane potential （MMP） were detected by high content analysis. The changes in the mRNA and protein expressions of CYP2J3 were also observed.

Result

In vivo

experiments， compared with the control group， the prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta group had increased CK and LDH in serum （

0.05，

0.01）， while the combination group had decreased activities of CK and LDH. Additionally， pathological staining results showed that Chebulae Fructus and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma reduced the cardiac toxicity caused by prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta. Real-time PCR found that compared with the control group， prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta down-regulated the mRNA level of CYP2J3 （

0.05）， while up-regulated that expression when used in combination with Chebulae Fructus and Glycyrrhizae Radix et Rhizoma （

0.01）. The protein and mRNA translation levels were basically consistent.

In vitro

experiments， high content analysis revealed that there was a decrease in the cell number， DNA content and MMP fluorescence value of the aconitine group （

0.01） and the combination group （

0.05，

0.01）， and the fluorescence value of the combination group was higher than that of the aconitine group. Moreover， aconitine down-regulated the mRNA level of CYP2J3 （

0.05）， but the down-regulating ability of aconitine was reversed in the combination group （

0.05）.

Conclusion

The detoxification mechanism of combined Chebulae Fructus， Glycyrrhizae Radix et Rhizoma and prepared Aconiti Kusnezoffii Radix Cocta is mainly that the combination of ellagic acid， liquiritin and aconitine can up-regulate the expression of CYP2J3， and promote the metabolism of arachidonic acid （AA） to produce epoxyeicosatrienoic acids （EETs）， thus reducing the cardiac toxicity， and this effect may start from the transcriptional link.

关键词

Keywords

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