肝豆扶木汤通过JNK信号通路对Wilson病肝纤维化小鼠的干预作用

杨悦; 杨文明; 魏涛华; 唐露露; 郝文杰; 钱南南; 饶志红; 杨玉龙

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220605

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肝豆扶木汤通过JNK信号通路对Wilson病肝纤维化小鼠的干预作用

肝豆状核变性中医病因病机理论创新及中医药干预机制研究专题 | 更新时间：2022-05-18

- 肝豆扶木汤通过JNK信号通路对Wilson病肝纤维化小鼠的干预作用
- Intervention of Gandou Fumu Decoction on Liver Fibrosis in Mice with Wilson's Disease Through JNK Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第12期页码：119-126
- 作者机构：
  
  1.安徽中医药大学，合肥 230038
  2.安徽中医药大学第一附属医院，合肥 230031
  3.新安医学教育部重点实验室，合肥 230038
- 作者简介：
  
  杨悦，在读博士，从事中医药防治锥体外系疾病研究，E-mail：yang0419y@163.com
  杨文明，博士，教授，主任医师，博士生导师，从事中医药防治锥体外系疾病，E-mail：yangwm8810@126.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(81973825);国家中医药管理局中医药循证能力建设项目(2019XZZX-NB001);安徽高校协同创新项目(GXXT-2020-025);安徽中医药大学新安医学教育部重点实验室开放基金项目(2020xayx12)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220605
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R284;R33
- 纸质出版日期：2022-06-20，
  
  网络出版日期：2022-01-18，
  
  收稿日期：2021-10-25，
- 稿件说明：
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杨悦,杨文明,魏涛华等.肝豆扶木汤通过JNK信号通路对Wilson病肝纤维化小鼠的干预作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(12):119-126.

YANG Yue,YANG Wen-ming,WEI Tao-hua,et al.Intervention of Gandou Fumu Decoction on Liver Fibrosis in Mice with Wilson's Disease Through JNK Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(12):119-126.
杨悦,杨文明,魏涛华等.肝豆扶木汤通过JNK信号通路对Wilson病肝纤维化小鼠的干预作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(12):119-126. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220605.

YANG Yue,YANG Wen-ming,WEI Tao-hua,et al.Intervention of Gandou Fumu Decoction on Liver Fibrosis in Mice with Wilson's Disease Through JNK Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(12):119-126. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220605.

摘要

目的

研究肝豆扶木汤（GDFMD）对Wilson病肝纤维化小鼠的肝脏保护作用及其可能作用机制。

方法

将50只纯合型TX

小鼠，随机分为5组，每组各10只，另外选取10只野生型小鼠作为正常组。GDFMD高、中、低剂量组分别予以13.92、6.96、3.48 g·kg

-1

，青霉胺组0.1 g·kg

-1

，模型组及正常组使用等量0.9%氯化钠溶液灌胃，每天1次，连续给药4周。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量变化。采用相应试剂盒检测肝组织线粒体腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）含量，Na

-K

-ATP酶活性。苏木素-伊红（HE）和马松（Masson）染色观察小鼠肝组织病理形态学改变及透射电镜观察肝组织超微结构变化。采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路中JNK及其磷酸化蛋白，胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达情况。

结果

与正常组比较，模型组MDA含量明显升高，SOD活性明显下降（

0.05）；与模型组比较，GDFMD高、中、低剂量组及青霉胺组可显著升高SOD活性（

0.01），明显降低MDA含量（

0.05，

0.01）。与正常组比较，模型组ATP含量和Na

-K

-ATP酶活力明显降低（

0.05）；与模型组比较，GDFMD中、高剂量组及青霉胺组可明显提高ATP含量和Na

-K

-ATP酶活力（

0.05，

0.01）。肝组织病理形态结果表明，模型组可见大量肝细胞变性坏死，炎性细胞浸润，肝小叶结构不清，胶原纤维沉积；透射电镜显示模型组肝组织线粒体数量明显减少，线粒体局部损害显著，可见线粒体嵴断裂或者消失。用药干预后可见肝组织病理形态及线粒体结构有不同程度的恢复。Western blot结果提示，与正常组比较，模型组肝组织p-JNK、p-JNK/JNK、Caspase-3、Bax表达水平明显上调，Bcl-2表达明显下调（

0.05）；GDFMD中、高剂量组及青霉胺组p-JNK、p-JNK/JNK、Caspase-3、Bax表达水平显著下调，Bcl-2表达显著上调（

0.01）。

结论

GDFMD可以减轻TX

肝纤维化小鼠氧化应激损伤，恢复线粒体功能，其机制可能与调控JNK信号通路及其下游因子表达，抑制细胞凋亡有关。

Abstract

Objective

To identify the protective effect and possible mechanism of Gandou Fumu decoction （GDFMD） on liver fibrosis in mice with Wilson's disease.

Method

A total of 50 homozygous TX

mice were randomly divided into five groups， with 10 mice in each group. Ten wild-type mice were selected as a normal group. The GDFMD high， medium， and low-dose groups were given 13.92， 6.96， 3.48 g·kg

-1

of GDFMD， respectively. The penicillamine group were given 0.1 g·kg

-1

of penicillamine. The model group and the normal group were given the same volume of 0.9% sodium chloride solution once a day for 4 consecutive weeks. The enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） method was performed to detect serum superoxide dismutase （SOD） activity and malondialdehyde （MDA） content. Corresponding kits were used to detect the mitochondrial adenine triphosphate （ATP） content and Na

-K

-ATPase activity in liver tissues. Hematoxylin-eosin （HE） and Masson staining were used to observe the pathological morphology of liver tissue， and transmission electron microscope was used to observe ultrastructural changes of liver tissues in mice. Western blot was used to detect the c-Jun N-terminal kinase， the phosphorylated protein， and the expressions of Caspase-3， B cell lymphoma-2 （Bcl-2）， and Bcl-2 associated X protein （Bax） in c-Jun N-terminal kinase （JNK） signaling pathway.

Result

Compared with the normal group， MDA content increased and SOD activity decreased in the model group （

0.05）. Compared with the model group， SOD activities in the GDFMD high-， medium-， and low-dose groups and the penicillamine group significantly increased （

0.01）， and MDA content significantly decreased （

0.05，

0.01）. Compared with the normal group， ATP content and Na

-K

-ATPase activity significantly decrease in the model group （

0.05）. Compared with the model group， ATP content and Na

-K

-ATPase activity in the GDFMD medium and high-dose groups and the penicillamine group significantly increased （

0.05，

0.01）. The results of the pathological morphology of liver tissue showed that a large number of liver cells degeneration and necrosis， inflammatory cell infiltration， unclear liver lobule structure， and collagen fiber deposition were observed in the model group. Transmission electron microscopy showed that the number of mitochondria in liver tissues significantly reduced， the mitochondria were locally damaged， and the cristae of mitochondria were broken even disappear in the model group. The pathological morphology of liver tissue and mitochondrial structure recovered to varying degrees after medicinal intervention. The results of Western blot suggested that， compared with the normal group， the expression levels of phosphorylation-JNK （p-JNK）， p-JNK/JNK， Caspase-3， and Bax in the liver tissues were up-regulated， while the expression of Bcl-2 was down-regulated in the model group （

0.05）. The expression levels of p-JNK， p-JNK/JNK， Caspase-3 and Bax were down-regulated and the expression of Bcl-2 was up-regulated in the GDFMD high and medium-dose groups and the penicillamine group （

0.01）.

Conclusion

GDFMD can alleviate oxidative stress damage and recover mitochondrial function of TX

mice with liver fibrosis. The mechanism of GDFMD may be related to regulating the JNK signaling pathway and downstream factors and inhibiting cell apoptosis.

关键词

肝豆扶木汤肝豆状核变性TXJ小鼠线粒体氧化应激c-Jun氨基末端激酶（JNK）

Keywords

Gandou Fumu decoctionWilson's diseaseTXJ micemitochondriaoxidative stressc-Jun N-terminal kinase（JNK）

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