基于Wnt5a/Ca<sup>2+</sup>/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca<sup>2+</sup>载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

丁芮; 周鹏; 王翔; 汤同娟; 王恩宇; 洪星辉; 王靓; 黄金玲

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20220727

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基于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca²⁺载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用

经典名方 | 更新时间：2022-05-18

- 基于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca²⁺载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用
  增强出版
- Xiao Xianxiongtang Regulates Ca²⁺ Load and Inhibits Epithelial-mesenchymal Transition， Invasion， and Migration of MGC-803 Cells： Based on Wnt5a/ Ca²⁺/NFAT Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2022年28卷第12期页码：1-11
- 作者机构：
  
  1.安徽中医药大学，合肥 230012
  2.安徽省中医药科学院中西医结合研究所，合肥 230012
  3.中药复方安徽省重点实验室，合肥 230012
- 作者简介：
  
  丁芮，在读博士，从事中药复方抗肿瘤作用研究，E-mail：584831330@qq.com
  黄金玲，教授，博士生导师，从事中药抗肿瘤作用及其分子机制研究，E-mail：jinling6181@126.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(81573864)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20220727
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 纸质出版日期：2022-06-20，
  
  网络出版日期：2022-01-29，
  
  收稿日期：2021-12-08，
- 稿件说明：
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丁芮,周鹏,王翔等.基于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca²⁺载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(12):1-11.

DING Rui,ZHOU Peng,WANG Xiang,et al.Xiao Xianxiongtang Regulates Ca²⁺ Load and Inhibits Epithelial-mesenchymal Transition， Invasion， and Migration of MGC-803 Cells： Based on Wnt5a/ Ca²⁺/NFAT Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(12):1-11.
丁芮,周鹏,王翔等.基于Wnt5a/Ca²⁺/NFAT信号通路研究小陷胸汤调控Ca²⁺载量抑制MGC-803细胞侵袭迁移和上皮间质转化作用[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(12):1-11. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220727.

DING Rui,ZHOU Peng,WANG Xiang,et al.Xiao Xianxiongtang Regulates Ca²⁺ Load and Inhibits Epithelial-mesenchymal Transition， Invasion， and Migration of MGC-803 Cells： Based on Wnt5a/ Ca²⁺/NFAT Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2022,28(12):1-11. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20220727.

摘要

目的

探讨小陷胸汤对转化生长因子-

（TGF-

）诱导胃癌MGC-803细胞侵袭转移及上皮间质转化的影响，并探讨其可能的机制。

方法

通过CB-DOCK在线平台（

http： //clab

http://clab

. labshare. cn /cb-dock /）预测小陷胸汤与活化T细胞核转录因子（NFAT）分子对接。使用质量浓度为10 μg·L

-1

的TGF-

建立人胃癌MGC-803细胞侵袭转移模型，将MGC-803细胞分为空白组、模型组、小陷胸汤组（0.1、0.2、0.4 g·L

-1

），为进一步探讨Wnt5a/Ca

/NFAT信号通路在小陷胸汤抑制胃癌中的关键参与作用，将Wnt5a过表达质粒转染MGC-803细胞，分为空白质粒组、Wnt5a-OE组、空白质粒+小陷胸汤（0.4 g·L

-1

）组和Wnt5a-OE+小陷胸汤（0.4 g·L

-1

）组。分别使用细胞增殖与活性检测（CCK-8）法、Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹法（Western blot）、免疫荧光法检测MGC-803细胞活力、侵袭能力、迁移能力、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、锌指蛋白（Snail）、Wnt5a/Ca

/NFAT信号通路关键蛋白Wnt5a、钙调神经磷酸酶（CaN）、NFAT1、磷酸化（p）-NFAT1和NFAT1核蛋白表达以及细胞Ca

浓度变化。

结果

分子对接提示小陷胸汤作用于Wnt5a/Ca

/NFAT信号通路。与模型组比较，小陷胸汤（0.1、0.2、0.4 g·L

-1

）能明显促进MGC-803细胞活力的丧失，可通过基质凝胶侵入Transwell下室抑制细胞，并以剂量依赖性的方式减缓细胞划痕愈合，并促进E-cadherin的表达，抑制N-cadherin、Vimentin和Snail的表达（

0.05，

0.01）。进一步实验表明，与模型组比较，小陷胸汤可以抑制Wnt5a、CaN、NFAT1和p-NFAT1的表达，降低NFAT1核表达和NFAT1介导的转录活性，从而降低细胞Ca

浓度，且可逆转Wnt5a的作用（

0.05，

0.01）。

结论

小陷胸汤可通过Wnt5a/Ca

/NFAT通路减弱人胃癌MGC-803细胞的侵袭转移和上皮间质转化（EMT），从而减弱TGF-

诱导的促瘤作用。这提示小陷胸汤可能通过调节胃癌的侵袭、转移和EMT来预防和治疗胃癌。

Abstract

Objective

To explore the effect of Xiao Xianxiongtang （XXXT） on the transforming growth factor （TGF）-

-induced invasion， metastasis， and epithelial-mesenchymal transition （EMT） of gastric cancer MGC-803 cells and the underlying mechanism.

Method

The molecular docking between XXXT

and nuclear factor of activated T cells （NFAT） was performed by CB-DOCK （

http：//clab.labshare.cn/cb-dock/

http://clab.labshare.cn/cb-dock/

）. The invasion and metastasis model of MGC-803 cells was established with 10 μg·L

-1

TGF-

. MGC-803 cells were classified into blank group， model group， 0.1 g·L

-1

XXXT group， 0.2 g·L

-1

XXXT group， and 0.4 g·L

-1

XXXT group. For further clarifying the key role of Wnt5a/Ca

/NFAT signaling pathway in the inhibition of XXXT on gastric cancer， MGC-803 cells were transfected with Wnt5a overexpression plasmid， and then the cells were classified into blank plasmid group， Wnt5a-OE group， blank plasmid + XXXT （0.4 g·L

-1

） group， and Wnt5a-OE + XXXT （0.4 g·L

-1

） group. Cell viability was determined by cell counting kit-8 （CCK-8） assay， cell invasion and migration ability by Transwell invasion assay and wound healing assay， expression of EMT-related proteins （E-cadherin， N-cadherin， Vimentin， Snail） and Wnt5a/Ca

/NFAT signaling pathway-related key proteins ［Wnt5a， calcineurin （CaN）， NFAT1， and p-NFAT1］ by Western blot， and changes in intracellular Ca

concentration by immunofluorescence assay.

Result

Molecular docking suggested that XXXT acted on Wnt5a/Ca

/NFAT signaling pathway. XXXT （0.1， 0.2， 0.4 g·L

-1

） significantly promoted the loss of MGC-803 cell viability （

0.05，

0.01）. It inhibited cells from invading the transwell lower chamber and slowed down the healing of cell wounds in a dose-dependent manner （

0.05，

0.01）. Moreover， it promoted the expression of E-cadherin while suppressed the expression of N-cadherin， Vimentin， and Snail （

0.05，

0.01）. Further experiments showed that XXXT could inhibit the expression of Wnt5a， CaN， NFAT1， and p-NFAT1， and reduce the nuclear expression of NFAT1 and the transcription activity mediated by NFAT1， so as to reduce the cellular Ca

concentration （

0.05，

0.01）. XXXT can reverse the effect of Wnt5a （

0.05，

0.01）.

Conclusion

XXXT can attenuate the invasion， metastasis， and EMT of MGC-803 cells via the Wnt5a/Ca

/NFAT pathway， thereby weakening the tumor-promoting effect of TGF-

. In summary， XXXT may exert therapeutic effect on gastric cancer by regulating the invasion， metastasis， and EMT of gastric cancer cells.

关键词

小陷胸汤胃癌侵袭转移上皮间质转化Wnt5a/Ca2+/活化T细胞核因子（NFAT）信号通路

Keywords

Xiao Xianxiongtanggastric cancerinvasion and metastasisepithelial-mesenchymal transitionWnt5a/Ca2+/ nuclear factor of activated T cells （NFAT） signaling pathway

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