基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制

许皖; 李娜; 柳海艳; 修琳琳; 于雪; 陈绍红; 钟赣生

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20222140

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基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制

配伍 | 更新时间：2022-12-08

- 基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制
- Flos Puerariae，Hoveniae Semen and Their Combinations Treat Oxidative Stress in Mice with Acute Alcoholic Liver Injury via Keap1/Nrf2/ARE Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第1期页码：37-44
- 作者机构：
  
  1.北京中医药大学，北京 100029
  2.宁波卫生职业技术学院，浙江宁波 315100
- 作者简介：
  
  许皖，博士，讲师，从事中药药性理论研究，E-mail：18810959097@163.com
  陈绍红，博士，副教授，从事中药药性理论研究，E-mail：chshh77@163.com
  钟赣生，教授，博士生导师，从事中药配伍禁忌本质的研究，E-mail：zhonggansheng@sohu.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81703723);宁波卫生职业技术学院人才科研启动经费项目(2022101)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222140
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R575
- 纸质出版日期：2023-01-05，
  
  网络出版日期：2022-08-31，
  
  收稿日期：2022-05-29，
- 稿件说明：
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许皖,李娜,柳海艳等.基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(01):37-44.

XU Wan,LI Na,LIU Haiyan,et al.Flos Puerariae，Hoveniae Semen and Their Combinations Treat Oxidative Stress in Mice with Acute Alcoholic Liver Injury via Keap1/Nrf2/ARE Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(01):37-44.
许皖,李娜,柳海艳等.基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(01):37-44. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222140.

XU Wan,LI Na,LIU Haiyan,et al.Flos Puerariae，Hoveniae Semen and Their Combinations Treat Oxidative Stress in Mice with Acute Alcoholic Liver Injury via Keap1/Nrf2/ARE Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(01):37-44. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222140.

摘要

目的

观察葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝病的改善作用，为临床用药提供科学依据，并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。

方法

采用一次性灌胃给予56%（V/V）红星二锅头酒（12 mL·kg

-1

）建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，120只雄性ICR小鼠按体质量随机分成空白组、模型组、水飞蓟宾组、葛花组、枳椇子组、葛花-枳椇子1∶1组、葛花-枳椇子1∶2组、葛花-枳椇子2∶1组，每组15只。各给药组按10 mL·kg

-1

预防性灌胃相应药物3 d，除空白组外，其余各组小鼠按12 mL·kg

-1

分别灌胃给予二锅头酒，于酒后12 h处死小鼠，并观察药物对小鼠肝功能、抗氧化应激能力的影响；苏木素-伊红（HE）染色观察肝脏病理变化；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组小鼠Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）/核因子E

相关因子2（Nrf2）/抗氧化响应元件（ARE）信号通路相关蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测相关各指标mRNA表达。

结果

与正常组比较，模型组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）水平，肝组织中丙二醛（MDA）、活性氧（ROS）含量显著升高（

0.01）；谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）活性显著降低（

0.01），Keap1 mRNA及蛋白表达明显升高（

0.05，

0.01），Nrf2 mRNA及蛋白表达显著降低（

0.01）；与模型组比较，葛花-枳椇子2∶1组小鼠ALT、AST和ALP水平显著减低（

0.01），肝脏组织中MDA、ROS水平均显著减低（

0.01），GSH、SOD水平均显著升高（

0.01）；肝脏脂肪变损伤均减轻，显著上调Nrf2 mRNA及蛋白表达（

0.01），显著下调Keap1 mRNA及蛋白表达（

0.01）。

结论

葛花、枳椇子及其配伍组合对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预防作用，其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路，恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关，从而有效遏制酒精性肝病的发展。

Abstract

Objective

To observe the effect of Hoveniae Semen， Flos Puerariae and their combinations on acute alcoholic liver disease and provide a scientific basis for the drug use in clinical practice and the research on other alcoholic diseases.

Method

The acute alcoholic liver injury model of mice was established by one-time gavage with 56% （V/V） Hongxing Erguotou liquor （12 mL·kg

-1

）. One hundred and twenty male ICR mice were randomly assigned into blank group， model group， silybin group， Flos Puerariae group， Hoveniae Semen group， and Flos Puerariae-Hoveniae Semen combination groups （ratios of 1∶1， 1∶2 and 2∶1， respectively）， with 15 mice in each group. Each group was administrated with 10 mL·kg

-1

corresponding preventive drugs for 3 days by gavage. Except the blank group， the other groups were given Erguotou liquor by gavage at 12 mL·kg

-1

. The mice were sacrificed 12 h after drinking for the observation of liver function and oxidative stress. The pathological changes of liver were observed via hematoxylin-eosin （HE） staining. Western blot was employed to determine the expression levels of proteins in the Kelch-like Ech-associated protein 1 （Keap1）/nuclear factor E

-related factor 2 （Nrf2）/antioxidant response element （ARE） signaling pathway. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） was used to detect mRNA levels of related genes.

Result

Compared with control group， the modeling elevated the levels of alanine aminotransferase （ALT）， aspartate aminotransferase （AST） and alkaline phosphatase （ALP） in the serum and the content of malondialdehyde （MDA） and reactive oxygen species （ROS） in liver tissue （

0.01） and decreased the activities of glutathione （GSH） and superoxide dismutase （SOD）（

0.01）. The mRNA and protein expressions of Keap1 were significantly increased （

0.05，

0.01），

mRNA and protein expressions of Nrf2 were significantly decreased （

0.01）. Compared with model group，

Flos Puerariae-Hoveniae Semen 2∶1 lowered the levels of ALT， AST and ALP in the serum （

0.01） and MDA and ROS in the liver （

0.01）， and increased the activities of GSH and SOD （

0.01）. Moreover， it alleviated the hepatic steatosis injury， up-regulated mRNA and protein levels of Nrf2 （

0.01）， and down-regulated the mRNA and protein levels of Keap1 （

0.01）.

Conclusion

Flos Puerariae， Hoveniae Semen

and their combinations may exert the pre-protective effect on acute alcoholic liver injury in mice by regulating the Keap1/Nrf2/ARE pathway in the liver and restoring the liver oxidative balance destroyed by ethanol to inhibit the development of alcoholic liver disease .

关键词

葛花枳椇子急性酒精性肝损伤抗氧化Kelch样ECH相关蛋白1（Keap1）/核因子E2相关因子2（Nrf2）/抗氧化响应元件ARE信号通路

Keywords

Flos PuerariaeHoveniae Semenacute alcoholic liver injuryantioxidationKelch-like ECH-associated protein 1 （Keap1）/nuclear factor E2-related factor 2 （Nrf2）/antioxidant response element （ARE） signaling pathway

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