基于AMPK/ULK1自噬通路探讨人参败毒散对溃疡性结肠炎黏膜屏障的干预机制

熊珮宇; 钟春; 张培旭; 刘兴隆; 陈旭; 贾波

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20222142

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基于AMPK/ULK1自噬通路探讨人参败毒散对溃疡性结肠炎黏膜屏障的干预机制

人参败毒散治疗溃疡性结肠炎机制研究专题 | 更新时间：2023-09-08

- 基于AMPK/ULK1自噬通路探讨人参败毒散对溃疡性结肠炎黏膜屏障的干预机制
- Renshen Baidusan Protects Mucosal Barrier in Ulcerative Colitis via AMPK/ULK1 Autophagy Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第19期页码：52-59
- 作者机构：
  
  1.成都中医药大学基础医学院，成都 610075
  2.四川省第二中医医院，成都 610014
- 作者简介：
  
  熊珮宇，在读博士，从事溃疡性结肠炎中医药治疗与作用机制研究，E-mail：649716671@qq.com
  贾波，教授，博士生导师，从事脾胃病证的方剂配伍理论与临证运用研究，E-mail：jiabocdutcm@126.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(82074327);四川省科学技术项目(2018JY0446)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20222142
  中图分类号： R2-0;R33;R289;R318.14
- 收稿日期：2022-04-30，
  
  网络出版日期：2022-09-01，
  
  纸质出版日期：2023-10-05
- 稿件说明：
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熊珮宇,钟春,张培旭等.基于AMPK/ULK1自噬通路探讨人参败毒散对溃疡性结肠炎黏膜屏障的干预机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(19):52-59.

XIONG Peiyu,ZHONG Chun,ZHANG Peixu,et al.Renshen Baidusan Protects Mucosal Barrier in Ulcerative Colitis via AMPK/ULK1 Autophagy Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(19):52-59.
熊珮宇,钟春,张培旭等.基于AMPK/ULK1自噬通路探讨人参败毒散对溃疡性结肠炎黏膜屏障的干预机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(19):52-59. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222142.

XIONG Peiyu,ZHONG Chun,ZHANG Peixu,et al.Renshen Baidusan Protects Mucosal Barrier in Ulcerative Colitis via AMPK/ULK1 Autophagy Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(19):52-59. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20222142.

摘要

目的

研究人参败毒散调控腺苷酸活化蛋白激酶/Unc-51样激酶1（AMPK/ULK1）自噬通路抑制溃疡性结肠炎小鼠黏膜屏障损伤的作用机制。

方法

将60只SD大鼠随机分为6组，分为正常组，模型组，柳氮磺胺吡啶肠溶片组（西药组），人参败毒散高、中、低剂量组。通过2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）/50%乙醇诱导UC模型，西药组（0.3125 g·kg

-1

）、人参败毒散高、中、低剂量组（31.2、15.6、7.8 g·kg

-1

）灌胃2周后，检测结肠组织病理学改变；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测腺苷酸活化蛋白（AMPK

）mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测紧密连接蛋白中闭合蛋白（Occludin）、紧密连接蛋白蛋白-2（Claudin-2）、自噬标志蛋白p62、微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）及AMPK/ULK1通路磷酸化蛋白p-AMPK、p-ULK1的表达水平。

结果

与正常组比较，模型组结肠损伤评分明显上调（

0.05），AMPK

mRNA表达明显下调（

0.05），p-AMPK、p-ULK1、Occludin蛋白水平及LC3Ⅱ/Ⅰ明显下调（

0.05），而p62、Claudin-2蛋白水平明显上调（

0.05）；与模型组比较，人参败毒散高、中、低剂量组的结肠损伤评分下降，AMPK

mRNA明显上调，p-AMPK、p-ULK1、Occludin蛋白水平及LC3Ⅱ/Ⅰ上升，而p62、Claudin-2蛋白表达下降，以人参败毒散中剂量组干预效应最明显（

0.05）。

结论

人参败毒散可抗肠道黏膜屏障损伤，以人参败毒散中剂量组疗效最佳，其机制可能与激活AMPK/ULK1自噬通路有关，通过加速LC3Ⅰ向LC3Ⅱ转化，促进p62降解，从而改善紧密连接蛋白Occludin、Claudin-2功能，修复肠道机械屏障损伤。

Abstract

Objective

To study the mechanism of Renshen Baidusan in regulating adenylate-activated protein kinase （AMPK）/Unc-51-like kinase 1 （ULK1） autophagy pathway to inhibit mucosal barrier damage in the mouse model of ulcerative colitis （UC）.

Method

Sixty SD rats were randomized into normal， model， sulfasalazine enteric-coated tablets （0.312 5 g·kg

-1

， western medicine）， and high-， medium-， and low-dose （31.2， 15.6， 7.8 g·kg

-1

， respectively） Renshen Baidusan groups. The UC model was induced by 2，4，6-trinitrobenzenesulfonic acid （TNBS）/50% ethanol. The drugs were administrated by gavage for 2 weeks， and then the histopathological changes of the colon were examined. Real-time quantitative polymerase chain reaction was conducted to measure the mRNA level of AMP-activated protein kinase subunit alpha （AMPK

）. Western blot was employed to determine the protein levels of closure protein （Occludin）， compact linking protein-2 （Claudin-2）， autophagy marker p62， microtubule-associated protein 1 light chain 3B （LC3B）， phosphorylated AMPK （p-AMPK）， and phosphorylated ULK1 （p-ULK1）.

Result

Compared with the normal group， the model group showed increased colon injury score （

0.05）， down-regulated mRNA level of AMPK

（

0.05） and protein levels of p-AMPK， p-ULK1， and Occludin， decreased LC3Ⅱ/Ⅰ ratio （

0.05）， and up-regulated protein levels of p62 and Claudin-2 （

0.05）. Compared with the model group， all the doses of Renshen Baidusan lowered the colon injury score， up-regulated the mRNA level of AMPK

and the protein levels of p-AMPK， p-ULK1， and Occluding， increased LC3Ⅱ/Ⅰ ratio， and down-regulated the protein levels of p62 and Claudin-2. Moreover， the medium-dose group showed a significant intervention effect （

0.05）.

Conclusion

Renshen Baidusan can protect the intestinal mucosal barrier from damage， and the medium dose showed the best efficacy. It may activate the AMPK/ULK1 pathway to accelerate the transformation of LC3Ⅰ to LC3Ⅱ and promote the degradation of p62， so as to improve the function of Occludin and Claudin-2 and repair the mechanical damage of the intestinal barrier.

关键词

Keywords

references

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