薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响及机制

邹鑫; 余霞; 付加伟; 周鑫; 李丽; 刘蔚; 李志

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20230222

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响及机制

经典名方 | 更新时间：2023-10-13

- 薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响及机制
- Effect and Mechanism of Yiyi Fuzi Baijiangsan on Apoptosis of Human Colon Cancer HCT116 Cells
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第21期页码：41-48
- 作者机构：
  
  1.西南医科大学中西医结合学院，四川泸州 646000
  2.西南医科大学附属中医医院，四川泸州 646000
- 作者简介：
  
  邹鑫，在读硕士，从事中西医结合防治消化系统疾病研究，E-mail：1209956325@qq.com
  李志，博士，主任中医师，从事中西医结合防治消化系统疾病研究，E-mail：72432536@qq.com
- 基金信息：
  
  四川省科技计划项目(2019YFS0163);四川大学-泸州市人民政府联合课题(2020CDLZ-18);西南医科大学附属中医医院中西医结合防治消化系统疾病创新团队项目(2022-CXTD-01)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230222
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2022-09-03，
  
  网络出版日期：2022-11-28，
  
  纸质出版日期：2023-11-05
- 稿件说明：
移动端阅览
邹鑫,余霞,付加伟等.薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响及机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(21):41-48.

ZOU Xin,YU Xia,FU Jiawei,et al.Effect and Mechanism of Yiyi Fuzi Baijiangsan on Apoptosis of Human Colon Cancer HCT116 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(21):41-48.
邹鑫,余霞,付加伟等.薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响及机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(21):41-48. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230222.

ZOU Xin,YU Xia,FU Jiawei,et al.Effect and Mechanism of Yiyi Fuzi Baijiangsan on Apoptosis of Human Colon Cancer HCT116 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(21):41-48. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230222.

摘要

目的

探究薏苡附子败酱散对结肠癌细胞HCT116凋亡的影响，并探讨其相关的细胞凋亡机制。

方法

不同质量浓度（0.5、1、2、4、6、8、10、12、14、16 g·L

-1

）薏苡附子败酱散干预结肠癌细胞24、48、72 h，细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测细胞体外增殖的影响；设空白组、卡培他滨组（1.8 g·L

-1

）和薏苡附子败酱散组（6、10、14 g·L

-1

），分别处理48 h，采用流式细胞技术检测细胞凋亡率，Hochest 33342荧光染色观察细胞凋亡形态，线粒体红色荧光探针（Mito-Tracker Red CMXRos）分析线粒体膜电位（MMP）变化，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测线粒体凋亡途径相关蛋白B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C（Cyt C）、胱天蛋白酶（Caspase）-9、Caspase-3、活化的（cleaved） Caspase-9、cleaved Caspase-3的表达水平，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Cyt C、Caspase-9和Caspase-3 mRNA的表达。

结果

与空白组比较，薏苡附子败酱散（8、10、12、14、16 g·L

-1

）在体外对结肠癌HCT116细胞增殖有明显抑制作用（

0.05），呈浓度依赖关系。与空白组比较，薏苡附子败酱散组（10、14 g·L

-1

）及卡培他滨组结肠癌细胞凋亡率明显升高（

0.05）；薏苡附子败酱散组（6、10、14 g·L

-1

）和卡培他滨组结肠癌细胞数目均减少，且细胞形态发生了明显的变化，细胞呈现较强深蓝色荧光、细胞核浓集、缩小、碎裂等细胞凋亡现象；随着薏苡附子败酱散质量浓度的增高，蓝色荧光强度均显著增强。与空白组比较，薏苡附子败酱散组（6、10、14 g·L

-1

）和卡培他滨组MMP均明显降低，呈浓度依赖关系；薏苡附子败酱散和卡培他滨组Bcl-2蛋白和mRNA表达明显下降，Bax、Cyt C、Caspase-9、cleaved Caspase-9、Caspase-3、cleaved Caspase-3蛋白和Bax、Cyt C、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达明显升高（

0.05）。

结论

薏苡附子败酱散可能通过线粒体凋亡途径诱导结肠癌细胞HCT116发生凋亡。

Abstract

Objective

To investigate the effect and mechanism of Yiyi Fuzi Baijiangsan （YYFZBJ） on the apoptosis of colon cancer cell line HCT116.

Method

YYFZBJ at different concentrations （0.5， 1， 2， 4， 6， 8， 10， 12， 14， 16 g·L

-1

） was used to intervene in HCT116 cells for 24， 48， 72 h. The cell counting kit-8 （CCK-8） method was used to determine the effect of YYFZBJ on cell proliferation

in vitro

. The cells were divided into a blank group， a capecitabine group（1.8 g·L

-1

）， and low-， medium-， and high-dose YYFZBJ groups （6， 10， and 14 g·L

-1

） and treated for 48 hours. Flow cytometry was used to detect the apoptosis. Hoechst 33342 staining was used to observe the apoptotic morphology of cells. Mitochondrial membrane potential （MMP） was analyzed by a mitochondrial-targeted deep-red fluorescent probe （Mito-Tracker Red CMXRos）. The expression of proteins related to the mitochondrial apoptosis pathway， such as B-cell lymphoma-2 （Bcl-2）， Bcl-2-associated X protein （Bax）， cytochrome C （Cyt C）， cysteinyl aspartate-specific protease （Caspase）-9， Caspase-3， cleaved Caspase-9， and cleaved Caspase-3 was detected by Western blot. The mRNA levels of Bcl-2， Bax， Cyt C， Caspase-9， and Caspase-3 were determined by real-time polymerase chain reaction （Real-time PCR）.

Result

Compared with the blank group， YYFZBJ （8， 10， 12， 14， 16 g·L

-1

） significantly inhibited the proliferation of HCT116 cells

in vitro

（

0.05） in a dose-dependent manner. Compared with the blank group， the medium- and high-dose YYFZBJ groups and the capecitabine group showed increased apoptosis rates of colon cancer cells （

0.05）. The YYFZBJ groups and the capecitabine group showed reduced number of colon cancer cells with significantly changed cellular morphology and cell apoptosis manifestations， such as strong dark blue fluorescence， nucleus concentration， shrinkage， and fragmentation. With the increase in the mass concentration of YYFZBJ， the blue fluorescence intensity was significantly enhanced. Compared with the blank group， the YYFZBJ groups and the capecitabine group showed reduced MMP in a dose-dependent manner， decreased protein and mRNA levels of Bcl-2， and increased protein expression of Bax， Cyt C， Caspase-9， Caspase-3， cleaved Caspase-9， and cleaved Caspase-3 and mRNA expression of Bax， Cyt C， Caspase-9， and Caspase-3 （

0.05）.

Conclusion

YYFZBJ can induce the apoptosis of colon cancer HCT116 cells through the mitochondrial apoptosis pathway.

关键词

Keywords

references

SUNG H ， FERLAY J ， SIEGEL R L ， et al . Global Cancer Statistics 2020： GLOBOCAN estimates of incidence and mortality world- wide for 36 cancers in 185 countries ［J］. CA Cancer J Clin ， 2021 ， 71 （ 3 ）： 209 - 249 .

刘宗超，李哲轩，张阳等 . 2020全球癌症统计报告解读［J］. 肿瘤综合治疗电子杂志， 2021 ， 7 （ 2 ）： 1 - 13 .

GBD 2019 Colorectal Cancer Collaborators . Global， regional， and national burden of colorectal cancer and its risk factors， 1990-2019： A systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2019 ［J］. Lancet Gastroenterol Hepatol ， 2022 ， 7 （ 7 ）： 627 - 647 .

LEWANDOWSKA A ， RUDZKI G ， LEWANDOWSKI T ， et al . Risk factors for the diagnosis of colorectal cancer ［J］. Cancer Control ， 2022 ， 29 ， doi： 10.1177/10732748211056692 http://dx.doi.org/10.1177/10732748211056692 .

公小蕾，赵林 . 免疫检查点抑制剂治疗结直肠癌的临床试验梳理［J］. 中华胃肠外科杂志， 2022 ， 25 （ 3 ）： 205 - 213 .

ZHANG L ， CAO F ， ZHANG G ， et al . Trends in and predictions of colorectal cancer incidence and mortality in China from 1990 to 2025 ［J］. Front Oncol ， 2019 ， doi： 10.3389/fonc.2019.00098 http://dx.doi.org/10.3389/fonc.2019.00098 .

YIN J ， BAI Z ， ZHANG J ， et al . Burden of colorectal cancer in China， 1990-2017： Findings from the global burden of disease study 2017 ［J］. Chin J Cancer Res ， 2019 ， 31 （ 3 ）： 489 - 498 .

JOHDI N A ， SUKOR N F . Colorectal cancer immunotherapy： Options and strategies ［J］. Front Immunol ， 2020 ， doi： 10.3389/fimmu.2020.01624 http://dx.doi.org/10.3389/fimmu.2020.01624 .

张保国，刘庆芳 . 薏苡附子败酱散（汤）及其加味临床应用的研究进展［J］. 中成药， 2015 ， 37 （ 9 ）： 2026 - 2028+2090 .

富晓旭，谢春光 . 薏苡附子败酱散的临床研究进展［J］. 中国中医基础医学杂志， 2016 ， 22 （ 4 ）： 579 - 580 .

柴妮，朱惠蓉，叶进 . 薏苡附子败酱散的文献分析及研究评述［J］. 时珍国医国药， 2020 ， 31 （ 4 ）： 1001 - 1004 .

张双喜，史仁杰 . 薏苡附子败酱散对TNBS结肠炎模型大鼠Treg/Th17的影响［J］. 世界华人消化杂志， 2014 ， 22 （ 11 ）： 1542 - 1546 .

周政，刘丽萍，刘海涛，等 . 正交试验优选薏苡附子败酱散提取工艺［J］. 中药材， 2016 ， 39 （ 4 ）： 829 - 832 .

王金丹 . 薏苡仁中有效成分提取工艺的研究发展［J］. 农业科技与装备， 2021 （ 2 ）： 43 - 45 .

KONG M Y ， LI L Y ， LOU Y M ， et al . Chinese herbal medicines for prevention and treatment of colorectal cancer： From molecular mechanisms to potential clinical applications ［J］. J Integr Med ， 2020 ， 18 （ 5 ）： 369 - 384 .

YE L ， JIA Y ， JI K E ， et al . Traditional Chinese medicine in the prevention and treatment of cancer and cancer metastasis ［J］. Oncol Lett ， 2015 ， 10 （ 3 ）： 1240 - 1250 .

吴继萍 . 大肠癌的中医病证治疗学探讨［J］. 国医论坛， 2014 ， 29 （ 5 ）： 6 - 8 .

张锁，贾瑞林，陈晶 . 薏苡附子败酱散加味对盆腔炎性疾病后遗症模型大鼠JNK/p38信号通路表达影响［J］. 中华中医药杂志， 2022 ， 37 （ 6 ）： 3584 - 3589 .

孙燕，张露蓉，姚霏，等 . 薏苡附子败酱散抗肝癌作用的实验研究［J］. 云南中医学院学报， 2019 ， 42 （ 5 ）： 1 - 6 .

张璐，隋华，伏杰，等 . 经方对条件性基因敲除APC Min/+ 小鼠肠道腺瘤发生和肠道菌群的影响［J］. 中华中医药杂志， 2020 ， 35 （ 5 ）： 2327 - 2332 .

聂丹 . 薏苡附子败酱散加减方联合XELOX方案治疗Ⅳ期结直肠癌（寒热错杂型）的临床研究［D］. 成都：成都中医药大学， 2020 .

KACZANOWSKI S . Apoptosis： Its origin， history， maintenance and the medical implications for cancer and aging ［J］. Phys Biol ， 2016 ， 13 （ 3 ）： 031001 .

XU X ， LAI Y ， HUA Z C . Apoptosis and apoptotic body： Disease message and therapeutic target potentials ［J］. Biosci Rep ， 2019 ， 39 （ 1 ）： BSR20180992 .

RATHORE R ， MCCALLUM J E ， VARGHESE E ， et al . Overcoming chemotherapy drug resistance by targeting inhibitors of apoptosis proteins （IAPs）［J］. Apoptosis ， 2017 ， 22 （ 7 ）： 898 - 919 .

GREEN D R ， LLAMBI F . Cell death signaling ［J］. Cold Spring Harb Perspect Biol ， 2015 ， 7 （ 12 ）： a006080 .

SHAMAS-DIN A ， KALE J ， LEBER B ， et al . Mechanisms of action of Bcl-2 family proteins ［J］. Cold Spring Harb Perspect Biol ， 2013 ， 5 （ 4 ）： a008714 .

VAN OPDENBOSCH N ， LAMKANFI M . Caspases in cell death， inflammation， and disease ［J］. Immunity ， 2019 ， 50 （ 6 ）： 1352 - 1364 .

ZHENG Z ， ZUO Z ， ZHU P ， et al . A study on the expression of apoptotic molecules related to death receptor and endoplasmic reticulum pathways in the jejunum of AFB1-intoxicated chickens ［J］. Oncotarget ， 2017 ， 8 （ 52 ）： 89655 - 89664 .

MODI S ， KIR D ， BANERJEE S ， et al . Control of apoptosis in treatment and biology of pancreatic cancer ［J］. J Cell Biochem ， 2016 ， 117 （ 2 ）： 279 - 288 .

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

重楼皂苷Ⅰ对结肠癌HCT116细胞凋亡及Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达的影响

芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡

黑逍遥散级联调控氧化应激和细胞凋亡对阿尔茨海默病大鼠的神经保护作用

基于PI3K/Akt信号通路探讨酸枣仁皂苷A改善血管性认知障碍模型大鼠认知功能的作用机制