黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

蔺婷; 彭佳欣; 陶阳阳; 周芳亮; 何迎春

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20230726

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黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

药理 | 更新时间：2023-11-20

- 黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡
- Astragaloside Ⅳ Induces Autophagy and Apoptosis in Nasopharyngeal Carcinoma Cells via PI3K/Akt/mTOR Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第24期页码：113-121
- 作者机构：
  
  1.湖南中医药大学中医药防治眼耳鼻喉疾病湖南省重点实验室，长沙 410208
  2.湖南中医药大学湖南省中医药防治眼耳鼻喉疾病与视功能保护工程技术研究中心，长沙 410208
  3.湖南中医药大学中西医结合院，长沙 410208
  4.湖南中医药大学医学院，长沙 410208
- 作者简介：
  
  蔺婷，在读博士，从事中医药防治耳鼻咽喉疾病研究，E-mail：834426640@qq. com
  何迎春，博士，教授，从事恶性肿瘤的分子机制及中医药防治研究，E-mail：1305851329@qq. com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81874408);湖南省卫计委科研项目(202207015049);湖南省教育厅科研项目(21C0234);2022年度湖南中医药大学中医学开放基金项目(2022ZYX22);湖南省自然科学基金项目(2020JJ5419)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230726
  中图分类号： R2-0;R22;R242;R2-031;R285.5
- 收稿日期：2022-10-28，
  
  网络出版日期：2023-02-01，
  
  纸质出版日期：2023-12-20
- 稿件说明：
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蔺婷,彭佳欣,陶阳阳等.黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(24):113-121.

LIN Ting,PENG Jiaxin,TAO Yangyang,et al.Astragaloside Ⅳ Induces Autophagy and Apoptosis in Nasopharyngeal Carcinoma Cells via PI3K/Akt/mTOR Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(24):113-121.
蔺婷,彭佳欣,陶阳阳等.黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(24):113-121. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230726.

LIN Ting,PENG Jiaxin,TAO Yangyang,et al.Astragaloside Ⅳ Induces Autophagy and Apoptosis in Nasopharyngeal Carcinoma Cells via PI3K/Akt/mTOR Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(24):113-121. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230726.

摘要

目的

探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。

方法

在体外实验中，通过单丹磺酰戊二胺（MDC）染色和透射电镜观察黄芪甲苷（AS-Ⅳ）对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中，建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法（IF）及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组别中自噬和凋亡情况的变化及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路关键蛋白的表达变化。

结果

与空白组比较，不同浓度AS-Ⅳ（5、10、20 μmol·L

-1

）作用于5-8F细胞后，各AS-Ⅳ组的自噬荧光强度均明显增强，其中，干预24 h，各AS-Ⅳ组的自噬荧光表达最强，10 μmol·L

-1

AS-Ⅳ组的荧光表达最明显；与空白组比较，透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素（RAPA）诱导5-8F细胞内出现较多自噬体；3-甲基腺嘌呤（3-MA）作为自噬抑制剂，透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成；AS-Ⅳ 10 μmol·L

-1

组细胞内结构和细胞膜完整、清楚，可见自噬体形成；与空白组比较，AS-Ⅳ各组的肿瘤体积明显受到抑制（

0.05，

0.01），微管相关蛋白l轻链3 Ⅱ/微管相关蛋白l轻链3 Ⅰ（LC3 Ⅱ/Ⅰ）和活化的胱天蛋白酶-3（cleaved Caspase-3）荧光信号明显增强（

0.05，

0.01），自噬相关蛋白酵母ATG6同源物（Beclin-1）、LC3 Ⅱ/Ⅰ和凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、活化的多腺苷二磷酸多聚酶（cleaved PARP）的表达量均明显升高（

0.05，

0.01），而自噬相关蛋白泛素结合蛋白（p62）的表达明显下调（

0.05，

0.01）；磷酸化（p）-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达量明显降低（

0.05，

0.01）。

结论

黄芪甲苷可诱导鼻咽癌细胞发生自噬和凋亡，其机制可能是通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路。

Abstract

Objective

To investigate the effect and underlying molecular mechanism of astragaloside-Ⅳ （AS-Ⅳ） on autophagy and apoptosis of nasopharyngeal carcinoma cells.

Method

experiments

in vitro

， the effect of AS-Ⅳ on the autophagy of nasopharyngeal carcinoma cells was observed by monodansylcadaverine （MDC） staining and transmission electron microscopy （TEM）. In experiments

in vivo

， immunofluorescence （IF） and Western blot were used to detect the changes in autophagy and apoptosis and the expression of key proteins in the phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin （PI3K/Akt/mTOR） signaling pathway after the establishment of a xenograft tumor model in nude mice.

Result

After 5-8F cells were treated with AS-Ⅳ of different doses （5， 10， 20 μmol·L

-1

）， the fluorescence intensity of autophagy in AS-Ⅳ groups significantly increased as compared with that in the blank group. The fluorescence expression of autophagy in AS-Ⅳ groups was the strongest after intervention for 24 hours， and the fluorescence expression in the 10 μmol·L

-1

AS-Ⅳ group was the most obvious. The autophagy activator rapamycin （RAPA） induced more autophagosomes in 5-8F cells under the transmission electron microscope， and 3-methyladenine （3-MA）， an autophagy inhibitor， did not induce autophagosome formation in 5-8F cells under the transmission electron microscope as compared with the results in the blank group. In the 10 μmol·L

-1

AS-Ⅳ group， the intracellular structure and cell membrane were intact and clear， and autophagosome formation was observed. Compared with the blank group， the AS-Ⅳ groups showed inhibited tumor volume （

0.05，

0.01）， potentiated fluorescence signals of microtubule-associated protein l light chain 3 type Ⅱ/microtubule-associated protein l light chain 3 type Ⅰ （LC3 Ⅱ/Ⅰ） and cleaved Caspase-3 （

0.05，

0.01）， increased expression levels of the mammalian homolog of yeast ATG6 （Beclin-1）， LC3 Ⅱ/Ⅰ， cleaved Caspase-3， and cleaved PARP （

0.05，

0.01）， down-regulated expression of ubiquitin-binding protein （p62）（

0.05，

0.01）， and reduced protein expression levels of phosphorylated PI3K （p-PI3K）， phosphorylated Akt （p-Akt）， and phosphorylated mTOR （p-mTOR）（

0.05，

0.01）.

Conclusion

AS-Ⅳ can induce autophagy and apoptosis of nasopharyngeal carcinoma cells， and the mechanism is presumably attributed to the activation of the PI3K/Akt/mTOR signaling pathway.

关键词

Keywords

references

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