基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-<italic style="font-style: italic">κ</italic>B信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制

刘建鑫; 揭珊珊; 陈冰; 曾辉; 马雅銮

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20230802

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基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制

经典名方 | 更新时间：2023-11-07

- 基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制
- Huanglian Jiedutang Treats Acute Gouty Arthritis via NLRP3 Inflammasome and TLR4/NF-κB Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第23期页码：1-7
- 作者机构：
  
  1.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700
  2.首都医科大学附属北京世纪坛医院，北京 100038
- 作者简介：
  
  刘建鑫，博士，从事中西医结合基础研究，E-mail：jianxinliu7@163.com
  马雅銮，博士，研究员，从事中医药抗炎与免疫药理研究，Tel：010-64089027，E-mail：yaluanma@163.com
- 基金信息：
  
  中国中医科学院自主选题研究项目(YZ-202046);国家自然科学基金面上项目(81072938)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20230802
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289;R33
- 纸质出版日期：2023-12-05，
  
  网络出版日期：2023-03-25，
  
  收稿日期：2022-12-05，
- 稿件说明：
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刘建鑫,揭珊珊,陈冰等.基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(23):1-7.

LIU Jianxin,JIE Shanshan,CHEN Bing,et al.Huanglian Jiedutang Treats Acute Gouty Arthritis via NLRP3 Inflammasome and TLR4/NF-κB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(23):1-7.
刘建鑫,揭珊珊,陈冰等.基于NLRP3炎性小体和TLR4/NF-κB信号通路探讨黄连解毒汤治疗急性痛风性关节炎的作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(23):1-7. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230802.

LIU Jianxin,JIE Shanshan,CHEN Bing,et al.Huanglian Jiedutang Treats Acute Gouty Arthritis via NLRP3 Inflammasome and TLR4/NF-κB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(23):1-7. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20230802.

摘要

目的

观察黄连解毒汤对急性痛风性关节炎（AGA）模型小鼠炎性损伤的影响，探讨黄连解毒汤治疗AGA的作用机制。

方法

40只雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组和黄连解毒汤组。采用踝关节注射单钠尿酸盐（MSU）晶体混悬液建立小鼠AGA模型，给药组分别给予黄连解毒汤水煎液（5 g·kg

-1

）和秋水仙碱（0.83 mg·kg

-1

），每天测量小鼠右踝关节肿胀程度，7 d后苏木素-伊红（HE）染色检测踝关节组织病理改变。另外40只C57BL/6J小鼠同样分组处理，造模18 h后，取右踝关节，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测关节炎症因子白细胞介素（IL）-1

、肿瘤坏死因子（TNF）-

、IL-6和NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase‑1）mRNA的表达；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测炎症因子IL-1

、TNF-

和IL-6含量；蛋白免疫印迹法（Western bolt）检测NLRP3炎性小体和Toll样受体4/核转录因子-

B（TLR4/NF-

B）信号通路蛋白的表达。

结果

与正常组比较，模型组小鼠右踝关节显著肿胀（

0.01），HE染色观察到踝关节明显异物肉芽肿，其间有炎症细胞浸润，黄连解毒汤干预后可以缓解踝关节肿胀（

0.05，

0.01），异物肉芽肿减小。与正常组比较，模型组踝关节组织中炎症因子IL-1

含量和IL-1

、TNF-

、IL-6 mRNA表达显著升高（

0.01），NLRP3炎性小体、Caspase‑1 mRNA表达明显升高（

0.05，

0.01），NLRP3、Caspase-1、TLR4和NF-

B蛋白表达明显升高（

0.05，

0.01）；与模型组比较，黄连解毒汤干预明显降低炎症因子IL-1

、TNF-

、IL-6和NLRP3炎性小体、Caspase‑1 mRNA表达（

0.05，

0.01），显著降低关节组织中炎症因子IL-1

、TNF-

和IL-6含量（

0.01），下调NLRP3、Caspase‑1、TLR4、NF-

B蛋白的表达（

0.05，

0.01）。

结论

注射MSU晶体导致AGA小鼠关节局部炎性免疫损伤，黄连解毒汤干预减轻炎性免疫损伤，可能与其调控NLRP3炎性小体和TLR4/NF-

B信号通路相关。

Abstract

Objective

To observe the effect of Huanglian Jiedutang on the inflammatory injury in the mouse model of acute gouty arthritis （AGA） and to explore the mechanism of Huanglian Jiedutang in treating AGA.

Method

Forty male C57BL/6J mice were randomized into blank， model， colchicine （0.83 mg·kg

-1

）， and Huanglian Jiedutang （5 g·kg

-1

） groups. The mouse model of AGA was established by injecting monosodium urate （MSU） crystals into the ankle joint. The swelling degree of the right ankle joint of each mouse was measured every day for 7 days， and the pathological changes of the ankle joint were detected by hematoxylin-eosin （HE） staining after 7 days. The other 40 C57BL/6J mice were grouped as above. After 18 hours of modeling， the right ankle joint was collected， and real-time polymerase chain reaction was employed to measure the mRNA levels of interleukin （IL）-1

， tumor necrosis factor （TNF）-

， IL-6， NOD-like receptor protein 3 （NLRP3）， apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD （ASC）， and Caspase-1. The expression levels of IL-1

， TNF-

， and IL-6 were measured by the enzyme-linked immunosorbent assay. Western blot was employed to determine the protein levels of NLRP3 inflammasome， Toll-like receptor 4 （TLR4）， and nuclear factor-

B （NF-

B）.

Result

Compared with the blank group， the model group showed swelling right ankle joint （

0.01）， obvious foreign body granuloma in the ankle joint with inflammatory cell infiltration. After the treatment with Huanglian Jiedutang， the ankle joint swelling was relieved （

0.05，

0.01）， and the size of foreign body granuloma was reduced. Compared with the blank group， the model group showed up-regulated mRNA levels of IL-1

， TNF-

， and IL-6 in the ankle joint tissue （

0.01）， up-regulated mRNA levels of NLRP3 and Caspase-1 in the NLRP3 inflammasome （

0.05，

0.01）， and up-regulated protein levels of NLRP3， Caspase-1， TLR4， and NF-

B （

0.05，

0.01）. Huanglian Jiedutang down-regulated the mRNA levels of IL-1

， TNF-

， IL-6， NLRP3， and Caspase-1 （

0.05，

0.01） and the protein levels of IL-1

， TNF-

， IL-6， NLRP3， Caspase-1， TLR4， and NF-

B （

0.05 or

0.01）.

Conclusion

Injecting MSU crystal resulted in local inflammatory injury of the joints in the mouse model of AGA. The treatment with Huanglian Jiedutang may alleviate the inflammatory injury by regulating the NLRP3 inflammasome and TLR4/NF-

B signaling pathway.

关键词

急性痛风性关节炎黄连解毒汤NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎性小体Toll样受体4/核转录因子-κB（TLR4/NF-κB）信号通路

Keywords

acute gouty arthritisHuanglian JiedutangNOD-like receptor protein 3 （NLRP3） inflammasomeToll-like receptor 4/nuclear factors-κB （TLR4/NF-κB） signaling pathway

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