补肾健脾方对再生障碍性贫血患者细胞自噬的影响

王文儒; 丁晓庆; 杨秀鹏; 许勇钢; 王洪志; 唐旭东

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20231190

您当前的位置：

首页 >

文章列表页 >

补肾健脾方对再生障碍性贫血患者细胞自噬的影响

再生障碍性贫血的临床及相关机制研究专题 | 更新时间：2023-06-20

- 补肾健脾方对再生障碍性贫血患者细胞自噬的影响
- Bushen Jianpi Prescription Regulates Autophagy in Patients with Aplastic Anemia
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第14期页码：80-87
- 作者机构：
  
  1.北京中医药大学东方医院，北京 100078
  2.中国中医科学院西苑医院，北京 100091
- 作者简介：
  
  王文儒，博士，主治医师，从事中西医结合治疗血液病研究，E-mail：943227342@qq.com
  唐旭东，博士，教授，博士生导师，从事中西医结合血液病临床和科研研究，E-mail：tangxudong001@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(81673819;82074258);中国中医科学院科技创新工程项目(CI2021A01701);北京中医药大学新教师启动基金项目(2023-JYB-XJSJJ044)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231190
  中图分类号： R242;R2-031;R287;R259;R556.5
- 收稿日期：2022-12-03，
  
  网络出版日期：2023-06-04，
  
  纸质出版日期：2023-07-20
- 稿件说明：
移动端阅览
王文儒,丁晓庆,杨秀鹏等.补肾健脾方对再生障碍性贫血患者细胞自噬的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(14):80-87.

WANG Wenru,DING Xiaoqing,YANG Xiupeng,et al.Bushen Jianpi Prescription Regulates Autophagy in Patients with Aplastic Anemia[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(14):80-87.
王文儒,丁晓庆,杨秀鹏等.补肾健脾方对再生障碍性贫血患者细胞自噬的影响[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(14):80-87. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231190.

WANG Wenru,DING Xiaoqing,YANG Xiupeng,et al.Bushen Jianpi Prescription Regulates Autophagy in Patients with Aplastic Anemia[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(14):80-87. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231190.

摘要

目的

探索补肾健脾方改善再生障碍性贫血（AA）患者细胞自噬水平，以及对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路的影响。

方法

收集2020年9月至2021年8月期间就诊于西苑医院的AA患者30例及304医院预备行外周血造血干细胞移植的健康供者6例，分为AA组和对照组。AA组予以3个月的补肾健脾方联合环孢素A（CsA）、雄激素治疗，收集AA组（治疗前后）骨髓及对照组外周血的单个核细胞，采用透射电子显微镜检测自噬小体、实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测微管相关蛋白1轻链3（LC3）、mTOR、Akt、PI3K mRNA水平及蛋白免疫印迹法（Western blot）检测LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、mTOR、磷酸化（p）-mTOR、Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K蛋白水平。

结果

AA组实际完成29例，总有效率为51.72%（15/29）。①与对照组比较，AA患者治疗前外周血中白细胞（WBC）、血红蛋白（HGB）、血小板（PLT）、中性粒细胞绝对计数（ANC）均显著降低（

0.01），自噬小体偏少，LC3 mRNA水平显著降低（

0.01），mTOR、Akt和PI3K

mRNA水平显著升高（

0.01），LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白水平均显著降低（

0.01），Akt、p-Akt、PI3K、p-PI3K、mTOR和p-mTOR蛋白水平均显著升高（

0.01）；②与本组治疗前比较，AA患者治疗后，血红蛋白（HGB）和血小板计数（PLT）水平均明显升高（

0.05），自噬小体增多，LC3 mRNA水平显著升高（

0.01），mTOR、Akt和PI3K

mRNA水平均显著降低（

0.01），LC3Ⅰ和LC3Ⅱ蛋白水平显著增高（

0.01），Akt、p-PI3K蛋白水平显著降低（

0.01），p-Akt、PI3K、mTOR、p-mTOR蛋白水平明显降低（

0.05）。

结论

AA患者细胞自噬水平降低，补肾健脾方能有效改善AA患者低水平细胞自噬状态，降低PI3K/Akt/mTOR信号通路的表达。

Abstract

Objective

To explore the effects of Bushen Jianpi prescription on the autophagy and phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin （PI3K/Akt/mTOR） signaling pathway in the patients with aplastic anemia （AA）.

Method

A total of 30 AA patients admitted to Xiyuan Hospital and 6 healthy donors who were prepared to undergo peripheral blood hematopoietic stem cell transplantation in 304 Hospital from September 2020 to August 2021 were enrolled and assigned into an AA group and a control group. The AA group was treated with Bushen Jianpi prescription combined with cyclosporin A （CsA） and androgen for 3 months. The mononuclear cells from bone marrow in the AA group before and after treatment and the peripheral blood of the control group were collected. Transmission electron microscopy was then employed to detect autophagosomes. Western blotting was employed to determine the protein levels of microtuble-associated protein 1 light chain 3 （LC3）Ⅰ， LC3Ⅱ， mTOR， phosphorylated （p）-mTOR， Akt， p-Akt， PI3K， and p-PI3K， and real-time polymerase chain reaction （PCR） to determine the mRNA levels of LC3， mTOR， Akt， and PI3K.

Result

In the AA group， the treatment was completed in 29 patients， and the total response rate was 51.72% （15/29）. ① The AA group showed lower levels of white blood cell （WBC）， hemoglobin （HGB）， platelet （PLT）， and absolute neutrophil count （ANC） in the peripheral blood （

0.01） and lower number of intracellular autophagosomes than the control group before treatment. Moreover， the AA group showed lower mRNA level of LC3 （

0.01） and protein levels of LC3Ⅰ and LC3Ⅱ （

0.01） and higher mRNA levels of mTOR， Akt， and PI3K

（

0.01） and protein levels of Akt， p-Akt， PI3K， p-PI3K， mTOR， and p-mTOR （

0.01） than the control group. ② In AA group， the levels of HGB and PLT elevated （

0.05） and the number of intracellular autophagosomes increased after treatment compared with those before treatment. Moreover， the mRNA level of LC3 and the protein levels of LC3Ⅰ and LC3Ⅱ were up-regulated （

0.01）， the mRNA levels of mTOR， Akt， and PI3Kα （

0.01） and the protein levels of Akt， p-PI3K （

0.01）， p-Akt， PI3K， mTOR， p-mTOR （

0.05） were down-regulated after treatment.

Conclusion

AA patients show lower autophagy levels， while Bushen Jianpi prescription can effectively improve the autophagy level and down-regulated the expression of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway in AA patients.

关键词

Keywords

references

BODDU P C ， KADIA T M . Molecular pathogenesis of acquired aplastic anemia ［J］. Eur J Haematol ， 2019 ， 102 （ 2 ）： 103 - 110 .

YOUNG N S . Aplastic anemia ［J］. N Engl J Med ， 2018 ， 379 （ 17 ）： 1643 - 1656 .

GUERRERO-ROS I ， CLEMENT C C ， REYNOLDS C A ， et al . The negative effect of lipid challenge on autophagy inhibits T cell responses ［J］. Autophagy ， 2020 ， 16 （ 2 ）： 223 - 238 .

MURERA D ， ARBOGAST F ， ARNOLD J ， et al . CD4 T cell autophagy is integral to memory maintenance ［J］. Sci Rep ， 2018 ， 8 （ 1 ）： 5951 .

DING Q W ， ZHOU J C ， LI Y ， et al . Highly engrafting cord blood hematopoietic stem cells are enriched in CD34 cell population with high autophagy activity ［J］. Stem Cell Rev Rep ， 2023 ， 19 （ 2 ）： 578 - 581 .

VALLION R ， DIVOUX J ， GLAUZY S ， et al . Regulatory T cell stability and migration are dependent on mTOR ［J］. J Immunol ， 2020 ， 205 （ 7 ）： 1799 - 1809 .

罗雅琴，于新阳，张月明，等 . 基于AMPK/mTOR/ULK1信号通路介导的自噬探讨芪黄益气摄血方治疗免疫性血小板减少症模型小鼠的作用机制［J］. 中国实验方剂学杂志， 2022 ， 28 （ 17 ）： 43 - 51 .

吴正翔 . 第三届全国中西医结合血液病学术会议纪要［J］. 中国中西医结合杂志， 1992 （ 5 ）： 319 - 320 .

唐旭东，刘锋，李柳，等 . 补肾中药联合ATG或ALG治疗重型再生障碍性贫血预后因素分析［J］. 中国实验方剂学杂志， 2011 ， 17 （ 8 ）： 250 - 254 .

唐旭东，张姗姗，麻柔，等 . 补肾中药为主的中西医结合治疗再生障碍性贫血的免疫学机制及疗效预测指标探讨［J］. 中华中医药杂志， 2012 ， 27 （ 4 ）： 1101 - 1105 .

唐旭东，张姗姗，许勇钢，等 . T细胞亚群在重型再生障碍性贫血治疗中的疗效预测价值［J］. 中医杂志， 2013 ， 54 （ 20 ）： 1755 - 1758 .

唐旭东，许勇钢，李柳，等 . 慢性再生障碍性贫血患者的细胞因子水平与中医证型的相关性研究［J］. 世界中西医结合杂志， 2014 ， 9 （ 6 ）： 648 - 650 .

中华医学血液学分会红细胞疾病学组 . 再生障碍性贫血诊断治疗专家共识［J］. 中华血液血杂志， 2017 ， 38 （ 1 ）： 1 - 5 .

国家中医药管理局医政司 . 22个专业92个病种中医诊疗方案（合订本）［M］. 北京：中国医药科技出版社， 2017 ： 384 - 388 ．

MIZUSHIMA N . A brief history of autophagy from cell biology to physiology and disease ［J］. Nat Cell Biol ， 2018 ， 20 （ 5 ）： 521 - 527 .

GOMEZ-PUERTO M C ， FOLKERTS H ， WIERENGA A T ， et al . Autophagy proteins ATG5 and ATG7 are essential for the maintenance of human CD34 + hematopoietic stem-progenitor cells ［J］. Stem Cells ， 2016 ， 34 （ 6 ）： 1651 - 1663 .

CHATTERJEE R ， LAW S . Epigenetic and microenvironmental alterations in bone marrow associated with ROS in experimental aplastic anemia ［J］. Eur J Cell Biol ， 2018 ， 97 （ 1 ）： 32 - 43 .

ØYNEBRÅTEN I . Involvement of autophagy in MHC class Ⅰ antigen presentation ［J］. Scand J Immunol ， 2020 ， 92 （ 5 ）： e12978 .

DIKIC I ， ELAZAR Z . Mechanism and medical implications of mammalian autophagy ［J］. Nat Rev Mol Cell Biol ， 2018 ， 19 （ 6 ）： 349 - 364 .

曹婷，韩梅 . 32例再生障碍性贫血患者的临床分析［J］. 吉林医学， 2021 ， 42 （ 3 ）： 558 - 561 .

陈婉淑，张梦露，韩冰 . 环孢素联合重组人促红细胞生成素治疗慢性再生障碍性贫血的疗效评价［J］. 中国医学科学院学报， 2021 ， 43 （ 5 ）： 736 - 742 .

杨文睿，韩冰，常红，等 . 艾曲泊帕治疗再生障碍性贫血的疗效与安全性：中国多中心调查结果［J］. 中华血液学杂志， 2020 ， 41 （ 11 ）： 890 - 895 .

田永军，胡慧萍，刘建梅，等 . 156例再生障碍性贫血临床分析［J］. 实用诊断与治疗杂志， 2007 ， 21 （ 6 ）： 466 - 468 .

AMARAVADI R K ， KIMMELMAN A C ， DEBNATH J . Targeting autophagy in cancer： Recent advances and future directions ［J］. Cancer Discov ， 2019 ， 9 （ 9 ）： 1167 - 1181 .

DIKIC I ， ELAZAR Z . Mechanism and medical implications of mammalian autophagy ［J］. Nat Rev Mol Cell Biol ， 2018 ， 19 （ 6 ）： 349 - 364 .

ALISSAFI T ， BANOS A ， BOON L ， et al . Tregs restrain dendritic cell autophagy to ameliorate autoimmunity ［J］. J Clin Invest ， 2017 ， 127 （ 7 ）： 2789 - 2804 .

DIKIC I ， ELAZAR Z . Mechanism and medical implications of mammalian autophagy ［J］. Nat Rev Mol Cell Biol ， 2018 ， 19 （ 6 ）： 349 - 364 .

WALLROTH A ， KOCH P A ， MARAT A L ， et al . Protein kinase N controls a lysosomal lipid switch to facilitate nutrient signalling via mTORC1 ［J］. Nat Cell Biol ， 2019 ， 21 （ 9 ）： 1093 - 1101 .

KMA L ， BARUAH T J . The interplay of ROS and the PI3K/Akt pathway in autophagy regulation ［J］. Biotechnol Appl Biochem ， 2022 ， 69 （ 1 ）： 248 - 264 .

LV B K ， HUA T ， LI F ， et al . Hypoxia-inducible factor 1 α protects mesenchymal stem cells against oxygen-glucose deprivation-induced injury via autophagy induction and PI3K/Akt/mTOR signaling pathway ［J］. Am J Transl Res ， 2017 ， 9 （ 5 ）： 2492 - 2499 .

浏览量

下载量

CSCD

文章被引用时，请邮件提醒。

提交

工具集

关联资源

疏肝化浊振阳方治疗慢性前列腺炎合并勃起功能障碍的临床观察

逍遥散加减方及有效成分治疗甲状腺疾病的临床及作用机制研究进展

基于生物信息学探讨泄浊解毒方调控细胞自噬治疗溃疡性结肠炎的机制

肾虚证临床与动物实验研究进展

黄连阿胶汤治疗失眠的研究进展