基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制

汪坤; 马鸣; 杨艳华; 任权娜; 陈雨晗; 岳孟茹; 赵旭

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20231339

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基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制

药理 | 更新时间：2023-10-20

- 基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制
- Modified Sanpiantang Treats Nitroglycerin-induced Migraine in Rats via p38 MAPK/iNOS Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2023年29卷第22期页码：64-70
- 作者机构：
  
  1.河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院，郑州 450002
  2.河南中医药大学药学院，郑州 450000
- 作者简介：
  
  汪坤，博士，主管药师，从事中药炮制及临床应用研究，E-mail：13592533250@139.com
  赵旭，硕士，主任药师，从事中药质量标准及临床应用研究，E-mail：zhaoxu0163@163.com
- 基金信息：
  
  河南省重点研发与推广专项（科技攻关）(212102311114);中央本级重大增减支项目(2060302);河南省中医药科学研究专项(2022ZY1093);河南省中医药科学研究重大专项(20-21ZYZD08);河南省中医药拔尖人才培养项目(豫卫中医函［2021］15号)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20231339
  中图分类号： R2-0;R33;R747.2;R289
- 纸质出版日期：2023-11-20，
  
  网络出版日期：2023-09-18，
  
  收稿日期：2023-07-04，
- 稿件说明：
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汪坤,马鸣,杨艳华等.基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(22):64-70.

WANG Kun,MA Ming,YANG Yanhua,et al.Modified Sanpiantang Treats Nitroglycerin-induced Migraine in Rats via p38 MAPK/iNOS Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(22):64-70.
汪坤,马鸣,杨艳华等.基于p38 MAPK/iNOS信号通路探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛作用机制[J].中国实验方剂学杂志,2023,29(22):64-70. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231339.

WANG Kun,MA Ming,YANG Yanhua,et al.Modified Sanpiantang Treats Nitroglycerin-induced Migraine in Rats via p38 MAPK/iNOS Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2023,29(22):64-70. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20231339.

摘要

目的

探讨加味散偏汤对硝酸甘油诱导的大鼠偏头痛的作用机制。

方法

将72只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组（硝酸甘油，10 mg·kg

-1

）、利扎曲坦组（0.89 mg·kg

-1

）、加味散偏汤高、中、低剂量组（12.96、6.48、3.24 g·kg

-1

）。腹腔注射硝酸甘油建立大鼠偏头痛模型。测试大鼠眼眶和足底痛觉敏感［机械痛阈值（MPT）］行为学实验；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测大鼠血清一氧化氮（NO）、肿瘤坏死因子-

（TNF-

）、

干扰素（IFN-

）和白细胞介素-1

（IL-1

）等炎症因子水平；免疫组化法（IHC）检测大鼠三叉神经脊束核尾核（TNC）诱导性一氧化氮合酶（iNOS）的表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠TNC区磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 MAPK）/p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 MAPK）和iNOS蛋白表达；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠TNC区iNOS、p38 MAPK和IL-1

mRNA表达。

结果

与空白组比较，模型组大鼠机械痛阈值显著降低（

0.01）；血清NO、TNF-

、IFN-

和IL-1

炎症因子水平显著升高（

0.01），TNC区脑组织p38 MAPK、iNOS和IL-1

等炎症因子表达明显升高

（P

0.05，

0.01）。与模型组比较，各给药组大鼠MPT水平均明显提升

（P

0.05，

0.01），且加味散偏汤中剂量组效果最为显著（

0.01）。与模型组比较，经加味散偏汤治疗后，大鼠TNC区组织iNOS、p38 MAPK和IL-1

mRNA及p-p38 MAPK、iNOS蛋白表达水平明显降低

（P

0.05，

0.01），血清中NO、TNF-

、IFN-

和IL-1

等表达明显降低

（P

0.05，

0.01）。

结论

加味散偏汤可通过抑制p38 MAPK/iNOS通路，减少NO、TNF-

、IFN-

和IL-1

等促炎因子表达，减轻神经源性炎症反应，发挥治疗偏头痛的作用。

Abstract

Objective

To decipher the mechanism of modified Sanpiantang in the treatment of nitroglycerin-induced migraine in rats.

Method

Seventy-two Wistar rats were randomized into the control， model （nitroglycerin， 10 mg·kg

-1

）， positive control （rizatriptan， 0.89 mg·kg

-1

）， and high- （12.96 g·kg

-1

）， medium- （6.48 g·kg

-1

）， and low-dose （3.24 g·kg

-1

） modified Sanpiantang groups. The rat model of migraine was established by intraperitoneal injection of 10 mg·kg

-1

nitroglycerin. The behavioral test was carried out to measure the mechanical pain thresholds （MPT） of the periorbital region and hindpaw after successful modeling. The serum levels of nitric oxide （NO）， tumor necrosis factor-

（TNF-

）， interferon-

（IFN-

）， and interleukin-1

（IL-1

） in rats were determined by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Immunohistochemistry （IHC） was employed to determine the expression of inducible nitric oxide synthase （iNOS） in the trigeminal nucleus caudalis （TNC）. Western blot was employed to determine the protein levels of iNOS and phospho-p38 mitogen-activated protein kinase （p-p38 MAPK） in the TNC. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（Real-time PCR） was performed to measure the mRNA levels of iNOS， p38 MAPK， and IL-1

in the TNC.

Result

Compared with the control group， the model group showed decreased MPT （

0.01）， elevated serum levels of NO， TNF-

， IFN-

， and IL-1

（

0.01）， and up-regulated expression levels of p38 MAPK， iNOS， and IL-1

in the TNC （

0.05，

0.01）. Compared with the model group， modified Sanpiantang increased the MPT （

0.05）， and the medium-dose group showed the most significant effect （

0.01）. In addition， modified Sanpiantang down-regulated the mRNA levels of iNOS， p38 MAPK， and IL-1

and the protein levels of p-p38 MAPK and iNOS in the TNC of migraine rats （

0.05，

0.01） and lowered the serum levels of NO， TNF-

， IFN-

， and IL-1

（

0.05，

0.01）.

Conclusion

Modified Sanpiantang may treat migraine by down-regulating the expression of pro-inflammatory factors such as NO， TNF-

， IFN-

， and IL-1

in the p38 MAPK/iNOS signaling pathway to reduce the neurogenic inflammation.

关键词

加味散偏汤偏头痛p38丝裂原活化蛋白激酶/诱导性一氧化氮合酶（p38 MAPK/iNOS）信号通路神经源性炎症

Keywords

modified Sanpiantangmigrainep38 mitogen-activated protein kinase/inducible nitric oxide synthase signaling pathwayneurogenic inflammation

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