芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡

阳玉婷; 吴东升; 曹晖; 张彧; 谢念佳; 邹博; 陈大光; 刘尔乐; 芦易; 吕照文

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20250404

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芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡

芍药汤防治溃疡性结肠炎的机制研究专题 | 更新时间：2025-05-30

- 芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡
  增强出版
- Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells
- 中国实验方剂学杂志 2025年31卷第13期页码：62-69
- 作者机构：
  
  1.湖南中医药大学第一附属医院，长沙 410007
  2.宁乡市人民医院，湖南宁乡 410600
- 作者简介：
  
  阳玉婷，硕士，医师，从事肠道慢性疾病合并肛周病变的中医药研究，E-mail：997523001@qq.com
  曹晖，硕士，主任医师，从事中医药防治肠道慢性疾病合并肛周病变的研究，E-mail：Caohui001818@sina.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(82405420);湖南省自然科学基金部门联合基金项目(2023JJ60487);湖南省“神农人才”工程第一批中医药学科带头人培养计划项目（2022年）;湖南省中医药科研计划项目(B2023030);湖南省卫生健康委科研课题(202204134275;B202304138985);湖南中医药大学校院联合基金重点项目(2024XYLH004)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20250404
  中图分类号： R285;R289;R259
- 收稿日期：2024-12-19，
  
  网络出版日期：2025-03-06，
  
  纸质出版日期：2025-07-05
- 稿件说明：
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阳玉婷,吴东升,曹晖等.芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(13):62-69.

YANG Yuting,WU Dongsheng,CAO Hui,et al.Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(13):62-69.
阳玉婷,吴东升,曹晖等.芍药汤含药血清介导Fas/FasL信号通路抑制脂多糖诱导的Caco-2细胞炎症及凋亡[J].中国实验方剂学杂志,2025,31(13):62-69. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20250404.

YANG Yuting,WU Dongsheng,CAO Hui,et al.Shaoyaotang Containing Serum Mediates Fas/FasL Pathway to Inhibit Lipopolysaccharide Induced Inflammation and Apoptosis of Caco-2 Cells[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2025,31(13):62-69. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20250404.

摘要

目的

探讨不同浓度芍药汤含药血清激活肿瘤坏死因子（TNF）受体超族成员6（Fas）/Fas配体（FasL）信号通路抑制细胞凋亡对脂多糖（LPS）诱导人结直肠上皮腺癌细胞（Caco-2）炎症的影响。

方法

将Caco-2细胞分为对空白组，模型组（LPS，10 mg·L

-1

），芍药汤含药血清5%、10%、15%、20%组，Fas抑制剂组（KR-33493，20 mmol·L

-1

）。除空白组外，其他组用10 mg·L

-1

LPS刺激培养24 h制备细胞炎症模型，造模成功后，空白组、Fas抑制剂组和模型组给予空白血清，芍药汤含药血清组分别加入相应浓度含药血清处理24 h，Fas抑制剂组给予KR-33493预处理1 h。细胞增殖与活性检测-8（CCK-8）法检测各组细胞存活率；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测白细胞介素-6（IL-6）、IL-1

、肿瘤坏死因子-

（TNF-

）含量；流式细胞术检测细胞凋亡水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测组织Fas、FasL、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、Caspase-9、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测组织Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax mRNA表达水平。

结果

实验结果中，与空白组比较，模型组细胞存活率显著下降（

0.01）；与模型组比较，5%芍药汤含药血清组差异无统计学意义，10%、15%、20%芍药汤含药血清组细胞存活率显著增高（

0.01）。由于5%芍药汤含药血清组与模型组差异无统计学意义，故后续研究选取10%、15%、20%芍药汤含药血清进行实验。与空白组比较，模型组IL-6、IL-1

、TNF-

含量均显著增高（

0.01）；细胞凋亡率显著升高（

0.01），模型组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均升高（

0.01），Bcl-2蛋白及mRNA表达水平降低（

0.01）；与模型组比较，Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL-1

、TNF-

含量均显著降低（

0.01），Fas抑制剂组及10%、15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率显著降低（

0.01），Fas抑制剂组及各芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均明显降低（

0.05，

0.01），Bcl-2蛋白及mRNA表达水平明显升高（

0.05，

0.01），与10%芍药汤含药血清组比较，15%、20%芍药汤含药血清组IL-6、IL-1

、TNF-

含量均降低（

0.05，

0.01），15%、20%芍药汤含药血清组凋亡率明显降低（

0.05，

0.01），15%、20%芍药汤含药血清组Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax的蛋白及mRNA表达水平均降低（

0.05，

0.01），Bcl-2蛋白及mRNA表达水平升高（

0.05，

0.01）。

结论

芍药汤含药血清能减少LPS干预下Caco-2细胞炎症因子的含量，下调Fas、FasL、Caspase-3、Caspase-9、Bax蛋白及mRNA表达水平，上调Bcl-2蛋白及mRNA表达水平，其作用机制可能与其调控Fas/FasL信号通路，抑制溃疡性结肠炎肠上皮细胞凋亡有关。

Abstract

Objective

To investigate the effects of different concentrations of Shaoyaotang-containing serum on lipopolysaccharide （LPS）-induced inflammation of human colorectal adenocarcinoma （Caco-2） cells by inhibiting apoptosis via activating the tumor necrosis factor （TNF） receptor superfamily member 6 （Fas）/Fas ligand （FasL） pathway.

Methods

Caco-2 cells were allocated into blank， model （LPS， 10 mg·L

-1

）， Shaoyaotang-containing serum （5%， 10%， 15%， 20%）， and Fas inhibitor （KR-33493， 20 mmol·L

-1

） groups. Except the blank group， the other groups were stimulated with 10 mg·L

-1

LPS for 24 h for the modeling of inflammation. After successful modeling， the blank， Fas inhibitor， and model groups were treated with blank serum， and the Shaoyaotang-containing serum groups were treated with the serum samples at corresponding concentrations for 24 h. The Fas i

nhibitor group was subjected to KR-33493 pretreatment for 1 h. Cell proliferation and viability were examined by the cell-counting kit-8 （CCK-8） method. The levels of interleukin （IL）-6， IL-1

， and TNF-

were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Apoptosis was detected by flow cytometry. The protein and mRNA levels of Fas， FasL， cysteinyl aspartate-specific proteinase （Caspase）-3， Caspase-9， B-cell lymphoma 2 （Bcl-2）， and Bcl-2-associated X protein （Bax） were determined by Western blot and Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR）， respectively.

Results

Compared with the blank group， the model group presented a decrease in cell survival rate （

0.01）. Compared with that in the model group， the cell survival rate showed no significant change in the 5% Shaoyaotang-containing serum group but increased in the 10%， 15%， and 20% Shaoyaotang-containing serum groups （

0.01）. Since there was no statistical difference between the 5% Shaoyaotang-containing serum group and the model group， 10%， 15%， and 20% Shaoyaotang-containing sera were selected for the follow-up study. Compared with the blank group， the model group showed risen levels of IL-6， IL-1

， and TNF-

（

0.01）， an increased apoptosis rate （

0.01）， up-regulated protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax （

0.01）， and down-regulated protein and mRNA levels of Bcl-2 （

0.01）. Compared with the model group， the Fas inhibitor group and the 10%， 15%， and 20% Shaoyaotang-containing serum groups showed declined levels of IL-6， IL-1

， and TNF-

（

0.01）， decreased apoptosis rates （

0.01）， down-regulated protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax （

0.05，

0.01）， and up-regulated protein and mRNA levels of Bcl-2 （

0.05，

0.01）. In addition， the 15% and 20% Shaoyaotang-containing serum groups had lower levels of IL-6， IL-1

， and TNF-

（

0.05，

0.01）， lower apoptosis rates （

0.05，

0.01）， lower protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax （

0.05，

0.01）， and higher protein and mRNA levels of Bcl-2 （

0.05，

0.01） than the 10% Shaoyaotang-containing serum group.

Conclusion

The Shaoyaotang-containing serum can reduce the content of inflammatory factors in Caco-2 cells， down-regulate the protein and mRNA levels of Fas， FasL， Caspase-3， Caspase-9， and Bax， and up-regulate the protein and mRNA levels of Bcl-2 under the intervention of LPS by regulating the Fas/FasL pathway and inhibiting the apoptosis of intestinal epithelial cells in ulcerative colitis.

关键词

Keywords

references

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