Molekulare quantitative Erkennung von Angelica sinensis und deren verarbeiteten Produkten basierend auf der Herb-Q-Methode

ZHANG Mingyu ,  

JIANG Wenjun ,  

JI Baoyu ,  

WANG Yue ,  

ZHANG Haitao ,  

ZHANG Haobo ,  

FENG Xue ,  

LI Xiwen ,  

摘要

Ziel: Angelica sinensis (当归) ist ein häufig verwendetes großvolumiges Arznei- und Nahrungsmittelrohstoff, bei dem auf dem Markt häufig Fälschungen vorkommen, die die klinische Wirksamkeit von Zubereitungen stark beeinträchtigen. Derzeit sind qualitative Identifikationstechniken für Fälschungen relativ ausgereift, jedoch fehlen quantitative Nachweismethoden für Fälschungen in verarbeiteten Produkten. Diese Studie führt anhand von Angelica sinensis und seinem hauptsächlich nah verwandten leicht zu verfälschenden Produkt „Erd-Angelica“ (朝鲜当归) eine quantitative Untersuchung durch, um eine molekulare quantitative Nachweismethode (Herb-Q) für Angelica sinensis und deren verarbeitete Produkte zu etablieren und ein Beispiel für die Entwicklung quantitativer Nachweistechnologien für Angelica sinensis und verwandte Gesundheitsprodukte zu bieten. Die Methode basiert auf der Auswahl spezifischer einzelner Nukleotidpolymorphismus-Stellen (SNP) von Angelica sinensis und der koreanischen Angelica basierend auf der vollständigen Sequenz des Chloroplastengenoms. Spezifische Angelica-Stellen wurden ausgewählt, um die quantitative Methodik mit Mischungen von Kräuterpulvern mit unterschiedlichen Fälschungsanteilen zu untersuchen (Linearität, Quantifizierungsgrenze, Nachweisgrenze und Reproduzierbarkeit). Die Genauigkeit der Herb-Q-Methode für die quantitative Bestimmung in chinesischen patentierten Arzneimitteln mit Angelica wurde mit drei verschiedenen Fälschungsanteilen (15 %, 25 %, 35 %) in einem für die Förderung der Durchblutung und Schmerzlinderung verwendeten aktiven Pulver validiert. Ergebnisse: Durch den Vergleich von 123 Chloroplastengenomsequenzen der Gattung Angelica wurden basierend auf innerartlicher Konservierung, artspezifischer Spezifität und den Anforderungen an die Pyrophosphat-Hochdurchsatz-Sequenzierung die Position 9674 (A/G) in der Chloroplastengenomsequenz NC_042826.1 und die Position 38592 (T/C) in der NC_029393.1 als spezifische molekulare Identifikationsstellen für Angelica sinensis bzw. koreanische Angelica bestimmt. Die Angelica-exklusive Position 9674 (A/G) wurde für die lineare Beziehung der Herb-Q-Methode ausgewählt, mit einem R²-Wert von 0,9974 (R² > 0,99), was auf eine gute Linearität hinweist. Die Quantifizierungs- und Nachweisgrenze betrugen jeweils 2,0 %, die Reproduzierbarkeit war gut [relative Standardabweichung (RSD) < 2,0 %]. Das auf der Herb-Q-Methode basierende quantitative System bestimmte den Anteil des gefälschten koreanischen Angelica in dem aktiven Verbessrungspulver für Durchblutung und Schmerzlinderung mit einer durchschnittlichen wiederholten Abweichung von 1,3 %. Fazit: Die Studie zeigt, dass die auf der Position 9674 (A/G) der Chloroplastengenomsequenz NC_042826.1 basierende Herb-Q-Methode eine gute Anwendbarkeit, Objektivität und Genauigkeit für Angelica sinensis und „Erd-Angelica“ sowie deren verarbeitete Produkte aufweist und technische Unterstützung für die quantitative Überwachung von auf dem Markt erhältlichen Angelica-Derivaten wie chinesischen Arzneimitteln, Nahrungsergänzungsmitteln und Gesundheitsprodukten bieten kann.

关键词

molekulare quantitative Nachweismethode für Kräuter (Herb-Q); Angelica sinensis; Fälschung; Pyrophosphat-Sequenzierung; quantitative Forschung

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