头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化

周涛; 吴钰; 金艳蕾; 江维克; 陈美兰

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头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化

更新时间：2024-09-23

- 头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化
- Optimization for ISSR-PCR System of Buch-Ham.ex D.Don by Orthogonal Design
- 中国实验方剂学杂志 2010年16卷第6期页码：50-53
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  贵州省科技重大专项计划(黔科合重大专项字 20080620);贵州省教育厅自然科学研究项目(黔教科2008026)
- DOI：
  中图分类号：
- 纸质出版日期：2010
- 稿件说明：
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周涛, 吴钰, 金艳蕾, 等. 头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化[J]. 中国实验方剂学杂志, 2010,16(6):50-53.

ZHOU Tao, WU Yu, JING Yan-lei, et al. Optimization for ISSR-PCR System of Buch-Ham.ex D.Don by Orthogonal Design[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2010, 16(6): 50-53.
周涛, 吴钰, 金艳蕾, 等. 头花蓼重复片段多态性分析-多聚酶链式反应体系建立与正交优化[J]. 中国实验方剂学杂志, 2010,16(6):50-53. DOI：

ZHOU Tao, WU Yu, JING Yan-lei, et al. Optimization for ISSR-PCR System of Buch-Ham.ex D.Don by Orthogonal Design[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2010, 16(6): 50-53. DOI：

摘要

目的: 建立头花蓼ISSR的反应体系。方法: 通过正交试验

研究了Mg2+浓度、dNTP 浓度、Taq DNA聚合酶浓度、引物浓度这4个因素在3个水平上对ISSR-PCR的影响。结果: 确立了适合于头花蓼ISSR PCR的优化体系:25 μL PCR反应体系中含有1×buffer 缓冲液(10 mmol ·L-1 KC1

8 mmol ·L-1 (NH4)2SO4

10 mmol ·L-1 Tris ·HC1

pH 8.0)

3.0 mmol ·L-1 MgC12

d NTP 200 μmol ·L-1

2.0 U ·25 μL-1 Taq酶

0.25 mmol ·L-1引物

40 ng ·L-1模板DNA。利用温度梯度PCR

确定了最适宜的退火温度为48 ℃。结论: 该优化体系的建立为进一步对头花蓼进行种质资源的遗传多样性分析奠定了基础。

Abstract

Objective: To establish the optimum ISSR-PCR system of Polygonum capitatum. Method: The Mg2+

dNTPs

primers and Taq DNA polymerase

were investigated to optimize the ISSR-PCR reaction system of Polygonum capitatum by orthogonal tests. Result: The optimized ISSR-PCR system of P.capitatum included 1×DNA polymerase buffer (10 mmol ·L-1 KCl

8 mmol ·L-1 (NH4)2SO4

10 mmol ·L-1 Tris ·HC1

pH 8.0)

3.0 mmol ·L-1 MgCl2 200 μmol ·L-1 dNTPs

2.0 U ·25 μL-1 Taq DNA polymerase

0.25 mmol ·L-1 primer

40 ng ·L-1 DNA template

in 25 μL PCR reaction systerm. By temperature gradient PCR

the optimum annealing temperature was determined as 48 ℃. Conclusion: The optimized system laid the groundwork for ISSR molecular analysis of P.capitatum Buch-Ham.ex D.Don.

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