冬虫夏草蛋白提取物抗A549肺癌细胞及免疫活性分析

王玉贤; 王艺璇; 陈蓉; 万德光; 彭成; 沈才洪; 童芯锌; 国锦琳

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.2018010079

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冬虫夏草蛋白提取物抗A549肺癌细胞及免疫活性分析

药理 | 更新时间：2024-01-04

- 冬虫夏草蛋白提取物抗A549肺癌细胞及免疫活性分析
- Effect of Protein Extracts of Cordyceps on Growth of A549 Cells and Immune Activity of Mouse Peritoneal Macrophages
- 中国实验方剂学杂志 2018年24卷第1期页码：79-84
- 作者机构：
- 作者简介：
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目（81373920，30801522）;四川省中医药科学技术研究专项（2016Q056）;成都市科技计划项目（2015-HM01-00205-SF）
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.2018010079
  中图分类号： R285
- 纸质出版日期：2018
- 稿件说明：
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王玉贤, 王艺璇, 陈蓉, 等. 冬虫夏草蛋白提取物抗A549肺癌细胞及免疫活性分析[J]. 中国实验方剂学杂志, 2018,24(1):79-84.

WANG Yu-xian, WANG Yi-xuan, CHEN Rong, et al. Effect of Protein Extracts of Cordyceps on Growth of A549 Cells and Immune Activity of Mouse Peritoneal Macrophages [J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2018, 24(1): 79-84.
王玉贤, 王艺璇, 陈蓉, 等. 冬虫夏草蛋白提取物抗A549肺癌细胞及免疫活性分析[J]. 中国实验方剂学杂志, 2018,24(1):79-84. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.2018010079.

WANG Yu-xian, WANG Yi-xuan, CHEN Rong, et al. Effect of Protein Extracts of Cordyceps on Growth of A549 Cells and Immune Activity of Mouse Peritoneal Macrophages [J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2018, 24(1): 79-84. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.2018010079.

摘要

目的：观察冬虫夏草蛋白提取物（OSPE）对肺癌细胞A549的抑制作用，研究其对免疫功能的影响。方法：以OSPE低、中、高质量浓度（100，200，500 mg·L-1）处理A549细胞24 h；以200 mg·L-1OSPE分别处理A549细胞12，24，48，72 h噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力；Hoechst 33258染色和流式细胞术检测细胞凋亡；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA表达。利用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒，检测不同质量浓度OSPE对巨噬细胞分泌的肿瘤坏死因子-α（TNF-α），白细胞介素-1（IL-1），白细胞介素-12（IL-12）的影响。结果：OSPE具有明显抑制A549细胞活力的作用，OSPE（100，200，500 mg·L-1）组抑制率分别为19.29%，58.70%，94.91%；200 mg·L-1 OSPE处理A549细胞（12~72 h），抑制率呈时间依赖性；Hoechst染色后，细胞呈现典型的凋亡形态变化，流式细胞检测凋亡率显示，200 mg·L-1 OSPE呈现时间依赖性地增加A549细胞凋亡率（P<0.01）；Real-time PCR结果显示OSPE明显上调Bax mRNA表达量，Bcl-2/Bax显著减小（P<0.01）。ELISA检测结果显示，OSPE对正常巨噬细胞TNF-α，IL-1，IL-12具有显著促进分泌作用（P<0.01）。结论：OSPE可通过上调Bax诱导凋亡，抑制A549细胞增殖；也可促进正常巨噬细胞分泌因子TNF-α，IL-1，IL-12的分泌，推测OSPE可通过诱导凋亡和激活免疫2种方式抑制肿瘤。

Abstract

Objective:To investigate the effects of Cordyceps protein extract (OSPE) on the growth of A549 lung cancer cells and immune activity of mouse peritoneal macrophage in vitro. Method:A549 cells were treated with low

medium

and high concentrations (100

200

500 mg·L-1) OSPE for 24 h

and 200 mg·L-1 OSPE was used to treat A549 cells for 12

72 h

respectively. Cell viability was detected by methyl thiazolyl tetrazolium (MTT) method; cell apoptosis and necrosis were evaluated by Hoechst 33258 staining and flow cytometry. Real-time PCR was used to detect the mRNA expression of Bcl-2 associated X protein (Bax) and B cell leukemia 2 (Bcl-2).Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) was optimized to detect the effect of OSPE on macrophage secretion of tumor necrosis factor-α (TNF-α)

interleukin-1 (IL-1) and interleukin-12 (IL-12) levels. Result:The (100

200

500 mg·L-1) OSPE remarkably inhibited the A549 cell growth with an inhibitory rate of 19.29%

58.70% and 94.91% respectively

and 200 mg·L-1 OSPE (12-72 h) decreased significantly cell growth by increasing apoptosis in a time dependent manner. After Hoechst staining

the cells showed typical morphological changes of apoptosis

and the flow cytometry results showed that 200 mg·L-1 OSPE increased the apoptosis of A549 cells in a time dependent manner (P<0.01). Real-time PCR results showed that OSPE significantly increased Bax mRNA expression and significantly decreased Bcl-2/Bax expression (P<0.01). The results of ELISA showed that OSPE significantly promoted TNF-α

IL-1 and IL-12 levels in normal macrophages (P<0.01). Conclusion:OSPE inhibited the growth of A549 cells by inducing apoptosis

also probably by promoting the secretion of the macrophage secretion factors.

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