铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用

罗颖懿; 李运容; 雷胄熙; 袁媛; 黄月纯; 魏刚

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20182210

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铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用

铁皮石斛种质资源专题 | 更新时间：2021-02-09

- 铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用
- Antioxidation Activities in Vitro of Vicenin Ⅱ Isolated from Dendrobii Officinalis Caulis and Effect on HepG2 Cells
- 中国实验方剂学杂志 2019年25卷第1期页码：43-50
- 作者机构：
  
  1.广州中医药大学，广州　 510006
  2.广西国际壮医医院，南宁　 530021
  3.中国中医科学院　中药资源中心，北京　 100700
  4.广州中医药大学　第一临床医学院，广州　 510405
- 作者简介：
  
  罗颖懿，在读硕士，从事中药创新药物研究与指纹图谱分析，E-mail: 297036535@qq.com
  袁媛，研究员，从事中药鉴定与分子生药学研究，Tel：010-64087649，E-mail:y_yuan0732@163.com；
  魏刚，研究员，博士生导师，从事中药创新药物研究与指纹图谱分析，石斛类药材规范化研究，Tel：020-39358519，E-mail: weigang021@163.com
- 基金信息：
  
  中央本级重大增减支项目(2060302)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20182210
  中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5;R273
- 收稿日期：2018-05-09，
  
  网络出版日期：2018-08-28，
  
  纸质出版日期：2019-01-05
- 稿件说明：
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罗颖懿, 李运容, 雷胄熙, 等. 铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(1):43-50.

Ying-yi LUO, Yun-rong LI, Zhou-xi LEI, et al. Antioxidation Activities in Vitro of Vicenin Ⅱ Isolated from Dendrobii Officinalis Caulis and Effect on HepG2 Cells[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(1): 43-50.
罗颖懿, 李运容, 雷胄熙, 等. 铁皮石斛共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ的体外抗氧化与诱导HepG2细胞凋亡的作用[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(1):43-50. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20182210.

Ying-yi LUO, Yun-rong LI, Zhou-xi LEI, et al. Antioxidation Activities in Vitro of Vicenin Ⅱ Isolated from Dendrobii Officinalis Caulis and Effect on HepG2 Cells[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(1): 43-50. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20182210.

摘要

目的：

对不同道地种源铁皮石斛的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ（芹菜素-6，8-二-

-葡萄糖苷，vicenin Ⅱ）进行体外抗氧化及诱导肝癌HepG2细胞凋亡的活性研究。

方法：

采用2，2-联苯基-1-苦基肼法（DPPH），2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸法（ABTS）和铜离子还原法对vicenin Ⅱ（0.005～1 g·L

－1

）进行体外的抗氧化活性研究；采用噻唑蓝（MTT）比色法检测vicenin Ⅱ（12.5～100 μmol·L

－1

）对人6种不同的肿瘤细胞体外的增殖抑制作用；后续凋亡实验vicenin Ⅱ浓度为75 μmol·L

－1

，采用Hoechst33258染色，荧光显微镜进行HepG2细胞形态学观察；应用流式细胞术，磷脂结合蛋白V/碘化丙啶（AnnexinV-FITC/PI）检测HepG2细胞凋亡率；采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（Real-time PCR）检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路及相关凋亡基因的mRNA表达。

结果：

Vicenin Ⅱ质量浓度为1 g·L

－1

时，对DPPH的清除率和Cu

还原率为48.82%和22.01%（

0.01）；当vicenin Ⅱ质量浓度为0.5 g·L

－1

时，对ABTS清除率为86.88%（

0.01）；vicenin Ⅱ 显著抑制HepG2细胞增殖并诱导凋亡，75 μmol·L

－1

的vicenin Ⅱ作用48 h后，细胞存活率为45.69%（

0.01），细胞凋亡率为14.57%（

0.01），升高B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（Bax）/Bcl-2，半胱氨酸蛋白酶（Caspase）-8，p38，细胞外信号调节激（ERK），c-Jun氨基末端酶（JNK），核转录因子-

B（NF-

B）mRNA表达（

0.01）。

结论：

铁皮石斛不同道地种源的共性黄酮类成分新西兰牡荆苷Ⅱ在体外具有一定的抗氧化作用，能有效抑制HepG2 细胞增殖，并可能通过调控MAPK通路及Bax/Bcl-2途径诱导HepG2细胞凋亡。

Abstract

Objective:

To study the antioxidation activities

in vitro

of a comment flavonoid component named vicenin Ⅱ(Apigenin 6

8-di-C-glucoside)in Dendrobii Officinalis Caulis from different origin places and investigate its effects on apoptosis of HepG2 cells.

Method:

The antioxidation activities

in vitro

of vicenin Ⅱ (0.005-1 g·L

-1

)were evaluated by 2

2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH)

salicylic acid and 2-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid(ABTS)and copper ion reduction assays. Methye thiazolye telrazlium(MTT)assay was used to test the inhibitory effect of vicenin Ⅱ(12.5~100 μmol·L

-1

)on proliferation of 6 tumour cells

in vitro

. In subsequent apoptosis experiment

the concentration of vicenin Ⅱ was 75 μmol·L

-1

. The morphological changes of HepG2 cells were evaluated by Hoechst 33258 under fluorescence microscope; and the cell apoptosis rate was detected by flow cytometry with AnnexinV/PI apoptosis assay kit. The mRNA expressions of mitogen activated protein kinase (MAPK) pathway related apoptotic genes were detected by Real-time PCR assay.

Result:

The 1 g·L

-1

vicenin Ⅱ showed 48.82% and 22.01% for DPPH scavenging rate and Cu

reduction rate respectively(

0.01). 0.5 g·L

-1

vicenin Ⅱ showed 86.88% for ABTS scavenging rate(

0.01). vicenin Ⅱ could significantly inhibit the proliferation and increase the apoptosis rate on HepG2 cells; after treatment for 48 h with 75 μmol·L

-1

Vicenin Ⅱ

the cells survival rate was 45.69%(

0.01)and apoptotic rate was 14.57%(

0.01). Meanwhile

the mRNA expression levels of B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) related X protein (Bax)/Bcl-2

Caspase-8

p38

extracellular signal-regulated kinases (ERK)

c-Jun

-terminal kinase (JNK)

and nuclear transcription factor (NF)-

B were increased(

0.01).

Conclusion:

The general flavone glycosides component vicenin Ⅱ of Dendrobii Officinalis Caulis from different origins has a certain antioxidation effect and significant inhibitory effect on proliferation

and could induce apoptosis on HepG2 cells probably by regulating the expression of related genes in MAPK pathway and Bax/Bcl-2.

关键词

Keywords

references

国家药典委员会 . 中华人民共和国药典.一部 [M]．北京：中国医药科技出版社， 2015 ： 282 - 283 .

包雪声，顺庆生，陈立钻，等 . 中国药用石斛 [M]. 上海：上海医科大学出版社， 2001 ： 56 .

周桂芬，吕圭源．铁皮石斛不同部位黄酮碳苷类成分及清除DPPH自由基能力比较研究 [J]．中国中药杂志， 2012 ， 37 ( 11 ): 1536 - 1540 .

黄月纯，谢镇山，任晋，等 . 3种种源铁皮石斛叶黄酮类成分HPLC特征图谱比较 [J]. 中国实验方剂学杂志， 2015 ， 21 ( 24 ): 37 - 40 .

魏述永．葛根素心血管保护作用及其机制研究进展 [J]．中国中药杂志， 2015 ， 40 ( 12 ): 2278 - 2284 .

朱开梅，陈丹，李美波，等 . 构树叶总黄酮调控Bcl-2与Bax蛋白表达及Caspase-3活性诱导HepG-2细胞凋亡的研究 [J]. 中国实验方剂学杂志， 2014 ， 20 ( 19 ): 128 - 133 .

张骏艳，张磊，李俊，等．野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠氧自由基代谢的影响 [J]．中国中药杂志， 2010 ， 35 ( 3 ): 344 - 347 .

KU S K. Vicenin-2 and scolymoside inhibit high-glucose-induced vascular inflammation in vitro and in vivo [J]. Can J Physiol Pharm , 2016 , 94 ( 3 ): 287 - 295 .

Hassan N , Ali A , Withycombe C ,et al . TET-2 up-regulation is associated with the anti-inflammatory action of vicenin-2 [J]. Cytokine , 2018 , 108 : 37 - 42 .

Lee I C. Anti-inflammatory effects of vicenin-2 and scolymoside on polyphosphate-mediated vascular inflammatory responses [J]. Inflamm Res , 2016 , 65 ( 3 ): 203 - 212 .

Lee W , Ku S K , Bae J S. Ameliorative effect of vicenin-2 and scolymoside on TGFBI p-induced septic responses [J]. Inflammation , 2015 , 38 ( 6 ): 2166 - 2177 .

Lee W. Antithrombotic and antiplatelet activities of vicenin-2 [J]. Blood Coagul Fibrin , 2015 , 26 ( 6 ): 628 - 634 .

Islam M N , Ishita I J , Jung H A ,et al . Vicenin 2 isolated from Artemisia capillaris exhibited potent anti-glycation properties [J]. Food Chem Toxicol , 2014 , 69 : 55 - 62 .

Verspohl E J , Fujii H , Homma K , et al . Testing of Perilla frutescens extract and Vicenin 2 for their antispasmodic effect [J]. Phytomedicine , 2013 , 20 ( 5 ): 427 - 431 .

Nagaprashantha L D , Vatsyayan R , Singhal J , et al . Anti-cancer effects of novel flavonoid vicenin-2 as a single agent and in synergistic combination with docetaxel in prostate cancer [J]. Biochem Pharmacol , 2011 , 82 ( 9 ): 1100 - 1109 .

刘延祥，张学武 . 中药诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展 [J]. 时珍国医国药， 2007 ， 18 ( 7 ): 1563 - 1565 .

王华清 . 茶叶籽中黄酮类化合物的分离鉴定及其抗氧化活性研究 [D]. 南京：南京师范大学， 2012 .

LIU Y , CHANG C C , Marsh G M ,et al . Population attributable risk of aflatoxin-related liver cancer: systematic review and Meta-analysis [J]. Eur J Cancer , 2012 , 48 ( 14 ): 2125 - 2136 .

邓鹏裔 . 芝麻素对人肝癌细胞系HepG2的抑制作用及机理研究 [D]．武汉：华中科技大学， 2013 .

李娜，高俊岩，刘敏 . 细胞凋亡和肿瘤的关系研究进展 [J]．当代医学， 2009 ， 15 ( 16 ): 13 - 14 .

Platanias L C. Map kinase signaling pathways and hematologic malignancies [J]. Blood , 2003 , 101 ( 12 ): 4667 - 4679 .

陈建勇，王聪，王娟，等． MAPK信号通路研究进展 [J]．中国医药科学， 2011 ， 1 ( 8 ): 32 - 34 .

Bachegowda L , Gligich O , Mantzaris I ,et al . Signal transduction inhibitors in treatment of myelodysplastic syndromes [J]. J Hematol Oncol , 2013 , 6 : 50 .

Eckhart L , Ballaun C , Hermann M ,et al . Identification of novel mammalian Caspases reveals an important role of gene loss in shaping the human Caspase repertoire [J]. Mol Biol Evol , 2008 , 25 ( 5 ): 831 - 841 .

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