斑蝥素诱导HCT116细胞形态改变及脱黏附机制

张鑫; 赵慧; 魏洁; 郭君; 胡刚; 林雅军

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20191024

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斑蝥素诱导HCT116细胞形态改变及脱黏附机制

药理 | 更新时间：2021-02-09

- 斑蝥素诱导HCT116细胞形态改变及脱黏附机制
- Mechanism of Cantharidin-induced Morphological Changes and Dissociation of HCT116 Cells
- 中国实验方剂学杂志 2019年25卷第10期页码：20-25
- 作者机构：
  
  北京医院　国家老年医学中心　卫生部老年医学重点实验室，北京　 100730
- 作者简介：
  
  张鑫，博士，助理研究员，从事人体衰老与肿瘤研究，E-mail：303063231@qq.com
  *林雅军，博士，副研究员，从事人体衰老与肿瘤研究，E-mail：linyajun2000@126.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81671391)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20191024
  中图分类号： R22; R242; R2-031; R285.5
- 收稿日期：2018-12-03，
  
  网络出版日期：2019-02-12，
  
  纸质出版日期：2019-05-20
- 稿件说明：
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张鑫, 赵慧, 魏洁, 等. 斑蝥素诱导HCT116细胞形态改变及脱黏附机制[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(10):20-25.

Xin ZHANG, Hui ZHAO, Jie WEI, et al. Mechanism of Cantharidin-induced Morphological Changes and Dissociation of HCT116 Cells[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(10): 20-25.
张鑫, 赵慧, 魏洁, 等. 斑蝥素诱导HCT116细胞形态改变及脱黏附机制[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(10):20-25. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20191024.

Xin ZHANG, Hui ZHAO, Jie WEI, et al. Mechanism of Cantharidin-induced Morphological Changes and Dissociation of HCT116 Cells[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(10): 20-25. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20191024.

摘要

目的：

探讨斑蝥素(cantharidin，CTD)引起人结肠癌HCT116细胞形态改变及脱黏附作用的分子机制与抑制肿瘤转移的相关性，为CTD的临床使用提供新依据。

方法：

将HCT116细胞接种于6孔板后，每孔加入不同浓度CTD (0，2.5，5，10，15，20 μmol·L

－1

)培养7～10 d，使用结晶紫染色液染色，对形成的克隆进行计数及统计分析，确定CTD对HCT116细胞的抑制效果；使用鬼笔环肽(phalloidin)特异性染色检测10 μmol·L

－1

CTD对HCT116细胞聚合态微丝骨架(F-actin)的影响，间接免疫荧光染色法观察CTD作用后整合素蛋白含量的改变；蛋白免疫印迹法分析10 μmol·L

－1

CTD作用前后Rho家族RhoA，RhoB，RhoC，Cdc42，Rac1/2/3蛋白表达量变化，根据实验结果确定RhoA为研究目标蛋白；使用质粒瞬时转染方法构建过表达RhoA的HCT116结肠癌细胞，观察10 μmol·L

－1

CTD对过表达细胞骨架形态及黏附的影响。

结果：

CTD可引起HCT116结肠癌细胞微丝骨架重构及整合素含量减少；RhoA蛋白是CTD作用后含量变化最大的Rho酶家族成员，构建的RhoA过表达细胞中带绿色荧光的转染细胞比例约为60%，与野生型细胞相比，目标蛋白含量显著增高(

0.01)，CTD通过降低RhoA含量，逆转这一过表达效应(

0.01)，对细胞的形态及黏附均产生影响。

结论：

CTD可通过抑制RhoA蛋白的表达，引起HCT116结肠癌细胞形态改变及与基底的黏附减弱，游离的肿瘤细胞无法锚定于继发部位，从而抑制细胞迁移。

Abstract

Objective:

To explore the molecular mechanism of cantharidin(CTD) in inducing morphological changes and dissociation in human colon cancer HCT116 cells

in order to study the correlation with tumor metastasis and provide a new basis for clinical use of cantharidin.

Method:

Different concentrations of CTD (0

2.5

20 μmol·L

-1

) were added to each hole to culture for 7 to 10 days

so as to determine the inhibitory effect of CTD on HCT116 cells; and changes of F-actin cytoskeleton and integrin in HCT116 cells were detected by immunofluorescence staining. Western blot analysis of protein expressions of RhoA

RhoB

RhoC

Cdc42 and Rac1/2/3 of Rho family were performed before and after cantharidin treatment. overexpression of RhoA was constructed by plasmid transient transfection

and effect of 10 μmol·L

-1

cantharidin on the morphology and adhesion of overexpressing cells was also observed.

Result:

Cantharidin induced cytoskeletal remodeling and decreased integrin content in HCT116 colon cancer cells. RhoA protein was a member of Rho enzyme family with the greatest variation after cantharidin action. The proportion of transfected RhoA cells with green fluorescence was about 60%

the expression of RhoA protein in constructed RhoA overexpression cells was significantly increased

compared with wild-type HCT116 cells (

0.01). However

cantharidin can act on RhoA overexpressed HCT116 cells

reverse its overexpression(

0.01)

and affect its morphology.

Conclusion:

Cantharidin can inhibit the expression of RhoA protein

induce the morphological changes of HCT116 cells and weaken the adhesion to the basement

thereby inhibiting cell migration.

关键词

Keywords

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