异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响

郝雨蒙; 王若瑜; 仲启明; 仝立国; 宋美卿; 杨钤; 冯玛莉

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20191302

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异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响

药理 | 更新时间：2021-02-09

- 异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响
- Effect of Isopimpinellin on Expression of Inhibitory Neurotransmitter and Receptor Genes in Primary Hippocampal Neurons
- 中国实验方剂学杂志 2019年25卷第14期页码：93-98
- 作者机构：
  
  山西省中医药研究院，太原　 030012
- 作者简介：
  
  郝雨蒙，在读硕士，从事中药药理与内分泌疾病研究，Tel：0351-4174328，E-mail：630380521@qq.com
  冯玛莉，硕士生导师，主任医师，从事中药药理和内分泌疾病的研究工作，Tel: 0351-4174328，E-mail: fengmali1@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81173574);山西省实验动物专项(2013 （K05）;2014 （K02）)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20191302
  中图分类号： R2-0; R22; R285.5
- 收稿日期：2018-12-10，
  
  网络出版日期：2019-03-19，
  
  纸质出版日期：2019-07-20
- 稿件说明：
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郝雨蒙, 王若瑜, 仲启明, 等. 异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(14):93-98.

Yu-meng HAO, Ruo-yu WANG, Qi-ming ZHONG, et al. Effect of Isopimpinellin on Expression of Inhibitory Neurotransmitter and Receptor Genes in Primary Hippocampal Neurons[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(14): 93-98.
郝雨蒙, 王若瑜, 仲启明, 等. 异虎耳草素对原代海马神经元细胞抑制性神经递质及其受体基因表达的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(14):93-98. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20191302.

Yu-meng HAO, Ruo-yu WANG, Qi-ming ZHONG, et al. Effect of Isopimpinellin on Expression of Inhibitory Neurotransmitter and Receptor Genes in Primary Hippocampal Neurons[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(14): 93-98. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20191302.

摘要

目的：

观察异虎耳草素对原代海马神经元细胞

-氨基丁酸(GABA)，5-羟色胺(5-HT)含量及受体基因表达的影响，探讨其催眠作用机制。

方法：

体外培养SD乳鼠原代海马神经元细胞，在细胞生长状态最佳时，经神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫组化鉴定纯度并给药。分为空白组，地西泮组(25 mg·L

－1

)，异虎耳草素低、中、高剂量组(5，10，20 mg·L

－1

)，共5组，给药24 h后流式细胞术检测海马神经元细胞早期凋亡率，酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞上清液GABA，5-HT含量，实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测细胞内

-氨基丁酸A型受体(GABAA)基因GABRA

，GABRA

，GABRB

，

-氨基丁酸 B型受体(GABAB)基因GABBR1，5-羟色胺1A型受体(5-HT1

)基因5-HT1

A(A)

，5-HT1

A(B)

，5-HT1

A(C)

表达的变化。

结果：

第7天海马神经元细胞生长状态良好，鉴定纯度

90%；与空白组比较，海马神经元细胞早期凋亡率异虎耳草素中、高剂量组显著降低(

0.01)，GABA含量异虎耳草素高剂量组显著升高(

0.01)，GABRA

，GABRA

，5-HT1

A(A)

，5-HT1

A(C)

mRNA表达异虎耳草素中、高剂量组显著升高(

0.05，

0.01)，GABBR

，5-HT1

A(B)

mRNA表达异虎耳草素各组均显著升高(

0.05，

0.01)。

结论：

异虎耳草素催眠作用机制可能与抑制海马神经元细胞凋亡，升高抑制性神经递质GABA含量，上调GABA与5-HT相关受体基因表达有关。

Abstract

Objective:

To observe the effect of isopimpinellin on primary hippocampal neuron cells

-aminobutyric acid (GABA)

5-hydroxytryptamine (5-HT) and receptor genes expressions

in order to explore its hypnotic mechanism.

Method:

The primary hippocampal neurons of neonatal Sprague-Dawley rats were cultured

in vitro

. And subsequent experiments were conducted in the optimal state of cell growth

and the purity was identified by immunohistochemistry of neuron-specific enolase. Hippocampal neurons were randomly divided into five groups

namely blank control group

diazepam group (25 mg·L

-1

)

and low-dose (5 mg·L

-1

)

moderate-dose (10 mg·L

-1

) and high-dose (20 mg·L

-1

) isopimpinellin groups. Early apoptosis of hippocampus neuron cells were detected using flow cytometry technique after 24 h administration

and the changes in the levels of GABA and 5-HT were detected using enzyme-linked immunosorbent. The changes in mRNA expressions of receptor genes relating to gamma-aminobutyric acid type A receptor(GABAA) genes GABRA

GABRA

GABBR

gamma-aminobutyric acid type B receptor genes (GABAB) GABRB

5-hydroxytryptamine 1A receptor (5-HT1

)5-HT1

A(A)

5-HT1

A(B)

5-HT1

A(C)

were detected by real-time quantitative PCR(Real-time PCR).

Result:

On the 7

day

the hippocampal neurons grew in a good condition

and the purity was above 90%. Apoptosis rates of hippocampal neurons in the low-dose and moderate-dose groups were significantly lower than that in the blank control group (

0.01). The level of GABA secreted by hippocampal neurons in the high-dose isopimpinellin group were significantly higher than that in the blank control group (

0.01). The mRNA expression levels of GABRA

GABRA

5-HT1

A(A)

5-HT1

A(C)

in the moderate-dose and high-dose isopimpinellin groups were significantly higher than those in the blank control group (

0.05

0.01). The mRNA expression levels of GABBR

5-HT1

A(B)

in the low-dose

moderate-dose and high-dose isopimpinellin groups were significantly higher than those in the blank control group (

0.05

0.01).

Conclusion:

The hypnotic mechanism of isopimpinellin may be related to the inhibition of hippocampal neuron apoptosis

the increase of the content of inhibitory neurotransmitter GABA

and the up-regulation of GABA and 5-HT-related receptor genes.

关键词

Keywords

references

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