芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响

殷茵; 刘珍洪; 高蔚; 佟海英; 郭蓉; 韩雪珍; 安致君; 杨桢; 赵红霞

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20192002

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芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响

药理 | 更新时间：2021-02-09

- 芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响
- Effect of Genkwa Flos on Transient Receptor Potential Vanilloid 1 of Thermosensitive Channel
- 中国实验方剂学杂志 2019年25卷第20期页码：56-62
- 作者机构：
  
  1.北京中医药大学，北京　 100029；
  2.中国中医科学院　中医基础理论研究所，北京　 100700
- 作者简介：
  
  殷茵，在读硕士，从事中医四气五味学研究，E-mail：916093950@qq.com
  杨桢，博士，教授，从事中医四气五味学研究，Tel：010-64286992，E-mail：for3000yz@aliyun.com；
  赵红霞，硕士，副研究员，从事经典名方中医理论诠释及中医四气五味学研究，E-mail：zhaohongxia7000@163.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金面上项目(81573847);北京中医药薪火传承“3＋3”工程李庆业名老中医工作站项目(2009-JC-31);中国中医科学院自主选题项目(YZ-1534)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20192002
  中图分类号： R2-0; R22; R285.5
- 收稿日期：2019-03-25，
  
  网络出版日期：2019-07-08，
  
  纸质出版日期：2019-10-20
- 稿件说明：
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殷茵, 刘珍洪, 高蔚, 等. 芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(20):56-62.

Yin YIN, Zhen-hong LIU, Wei GAO, et al. Effect of Genkwa Flos on Transient Receptor Potential Vanilloid 1 of Thermosensitive Channel[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(20): 56-62.
殷茵, 刘珍洪, 高蔚, 等. 芫花对热敏通道瞬时感受器电位香草素受体1的影响[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019,25(20):56-62. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20192002.

Yin YIN, Zhen-hong LIU, Wei GAO, et al. Effect of Genkwa Flos on Transient Receptor Potential Vanilloid 1 of Thermosensitive Channel[J]. Chinese journal of experimental traditional medical formulae, 2019, 25(20): 56-62. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20192002.

摘要

目的：

通过电生理全细胞膜片钳技术和动物行为学实验观察芫花对热敏通道瞬时变体电位香草素受体1(TRPV1)的影响，并探讨其机制。

方法：

以电生理全细胞膜片钳技术检测不同浓度中药芫花的75%乙醇提取物对瞬染人源TRPV1的HEK293细胞(hTRPV1/HEK293细胞)诱导产生的跨膜电流，运用TRPV1特异性拮抗剂辣椒平，观察其是否可以抑制中药芫花诱导产生的跨膜电流；行为学检测使用雄性C57BL/6小鼠30只，将其分为空白组6只，芫花高剂量组6只，芫花中剂量组6只和芫花低剂量组6只，布洛芬组6只。芫花治疗组以低、中、高(0.195，0.39，0.78 g·kg

－1

·d

－1

)3个剂量进行灌胃，1 h后，观察在(0±2) ℃冷板和(55±1) ℃热板中小鼠冷痛、热痛行为潜伏期的变化。

结果：

全细胞膜片钳实验显示在hTRPV1/HEK293细胞上芫花75%乙醇提取物可以激活TRPV1通道产生明显的跨膜电流，该跨膜电流与TRPV1激动剂辣椒素诱发的电流在电流密度和电流-电压关系各方面均类似；量效实验显示，与细胞外液对比，10 g·L

－1

芫花醇提物能够激活hTRPV1/HEK293细胞诱导其产生明显的跨膜电流(

0.01)。10 g·L

－1

芫花醇提物产生的跨膜电流

3 g·L

－1

(

0.01)。TRPV1特异性拮抗剂辣椒平可以完全抑制10 g·L

－1

芫花醇提物诱导产生的跨膜电流；小鼠冷热板实验中，芫花延长小鼠的冷痛和热痛行为潜伏期，与剂量呈现一定的量效关系。冷板实验中，与空白组小鼠比较，芫花中剂量组小鼠冷痛行为潜伏期延长(

0.01)，与空白组比较，芫花高剂量组冷痛时间也显著延长(

0.01)，布洛芬组小鼠冷痛行为潜伏期较空白组延长(

0.01)。在热板实验中，与空白组比较，芫花高剂量组热痛行为潜伏期显著延长(

0.01)，布洛芬组的热痛行为潜伏期明显延长(

0.05)。

结论：

芫花的75%乙醇提物中含有TRPV1的激动剂，芫花所具备的温性、止痛和抗炎功效可能是热敏通道TRPV1活化后产生的系列效应。

Abstract

Objective:

To study the effect of Genkwa Flos on the thermosensitive channel

transient receptor potential vanilloid 1 (TRPV1) by electrophysiological whole cell patch clamp technique and animal behavior experiment

in order to explore its mechanism.

Method:

The whole-cell patch clamp technique was used to measure transmembrane currents induced by 75%ethanol extract from different concentrations of Genkwa Flos in HEK293 cells that expressed human TRPV1.TRPV1 specific antagonist capsaicin was used to observe whether it could inhibit the transmembrane current induced by Genkwa Flos. Totally 30 C57BL/6 mice were taken for behavioral detection

and divided into blank group (6 mice)

high-dose group (6 mice)

medium-dose group (6 mice)

low-dose group (6 mice) and ibuprofen positive control group (6 mice). Genkwa Flos treatment group was given low dose (0.195 g·kg

-1

·d

-1

)

medium dose (0.39 g·kg

-1

·d

-1

) and high dose (0.78 g·kg

-1

·d

-1

) by gavage. One hour later

the changes of behavioral latency of cold pain and hot pain in mice were observed in cold plate at (0±2) ℃ and hot plate at (55±1) ℃.

Result:

Whole cell patch clamp experiment showed that 75%ethanol extract of Genkwa Flos in hTRPV1/HEK293 cells could activate TRPV1 channel to generate obvious transmembrane current

which was similar with that generated by the known TRPV1 agonist capsaicin in current density and current-voltage relationship. The dose-effect experiments showed that compared with extracellular fluid

10 g·L

-1

ethanol extract of Genkwa Flos could activate hTRPV1/HEK293 cells to induce significant transmembrane current (

0.01). The transmembrane current generated by 10 g·L

-1

ethanol extract of Genkwa Flos was more than 3 g·L

-1

(

0.01). The TRPV1 specific antagonist capsaicin could completely inhibit the transmembrane current induced by 10 g·L

-1

ethanol extract of Genkwa Flos. In the experiment of cold plate and hot plate in mice

there was a dose-effect relationship between the latencies of cold pain behavior and hot pain behavior in mice prolonged by Genkwa Flos. In the experiment of cold plate

compared with the blank group

the cold pain behavior latency of mice in the medium-dose group was significantly prolonged (

0.01)

and that of mice in the high-dose group was significantly prolonged (

0.01). Compared with the blank group

the cold pain behavior latency of mice in the ibuprofen positive control group was significantly prolonged (

0.01). In the hot plate experiment

the incubation period of hot pain behavior in the high-dose group of Genkwa Flos was significantly longer than that in the blank group (

0.01)

while that in the ibuprofen positive control group was significantly longer than that in the blank group (

0.05).

Conclusion:

More than one TRPV1 agonist was included in 75%ethanol extract of Genkwa Flos. The warm

analgesic and anti-inflammatory effects of Genkwa Flos may be a series of effects after activation of TRPV1.

关键词

Keywords

references

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