浏览全部资源
扫码关注微信
甘草酸通过RNA结合蛋白HuR调控p21表达对IEC-6细胞抗凋亡作用的影响
Glycyrrhizic Acid Protect IEC-6 Cells from Apoptosis Via HuR Mediated Posttranscription of p21
- 中国实验方剂学杂志 2020年26卷第12期 页码：85-93
- 作者机构：
广州中医药大学 第二临床医学院， 广州 510120
- 作者简介：
肖婷婷，在读硕士，从事中药分子药理研究，E-mail：1394614377@qq.com
张娴，博士，副研究员，硕士生导师，从事中药分子药理研究，E-mail：zhangx07@aliyun.com
- 基金信息：国家自然科学基金项目(81473440)
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20201238
中图分类号： R2-0;R289;R285-
网络出版日期：2020-04-08，
纸质出版日期：2020-06-20
- 稿件说明：
移动端阅览
肖婷婷,罗敏,曾星等.甘草酸通过RNA结合蛋白HuR调控p21表达对IEC-6细胞抗凋亡作用的影响[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(12):85-93.
XIAO Ting-ting,LUO Min,ZENG Xing,et al.Glycyrrhizic Acid Protect IEC-6 Cells from Apoptosis Via HuR Mediated Posttranscription of p21[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2020,26(12):85-93.
肖婷婷,罗敏,曾星等.甘草酸通过RNA结合蛋白HuR调控p21表达对IEC-6细胞抗凋亡作用的影响[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(12):85-93. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20201238.
XIAO Ting-ting,LUO Min,ZENG Xing,et al.Glycyrrhizic Acid Protect IEC-6 Cells from Apoptosis Via HuR Mediated Posttranscription of p21[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2020,26(12):85-93. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20201238.
摘要
目的
2
研究甘草酸（GA）通过RNA结合蛋白人类抗原R(HuR)调控p21转录后表达，探讨GA对肿瘤坏死因子-
α
（TNF-
α
）/放线菌酮（CHX）诱导的小肠上皮细胞凋亡的抵抗作用机制。
方法
2
采用大鼠小肠隐窝上皮细胞株（IEC-6），实验分空白组，GA(60 μmol·L
-1
)组，TNF-
α
+CHX组和GA+TNF-
α
+CHX组，分别用生物素标记RNA与蛋白结合实验（Biotin pull down）和RNA-免疫共沉淀（RNA IP）分析RNA结合蛋白HuR与p21 mRNA的外源性和内源性结合；构建含p21 3'-UTR-ARE的荧光素酶报告质粒，用双荧光素酶报告基因系统检测HuR对p21的转录后调控影响；实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测HuR及p21 mRNA水平；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HuR及p21蛋白表达水平。采用TNF-
α
+CHX诱导细胞凋亡，实时细胞功能分析仪检测细胞凋亡，免疫共沉淀（CO-IP）检测p21蛋白与半胱氨酸蛋白酶-3前体蛋白（proCaspase-3）结合。
结果
2
与空白组比较，GA处理后，能升高细胞浆内HuR蛋白的表达（
P
<
0.05）；GA能促进HuR与p21 mRNA 3'-UTR的结合(
P
<
0.05)；GA通过HuR升高了p21 mRNA和蛋白表达水平(
P
<
0.05)，同时增高对荧光素酶报告基因的表达(
P
<
0.01)，沉默HuR后GA对p21 mRNA和蛋白的上调表达作用消失，GA能促进p21与proCaspase-3的结合(
P
<
0.05)，部分降低TNF-
α
+CHX诱导的IEC-6细胞凋亡。
结论
2
GA能促进HuR向细胞浆内转位，促进HuR与p21 mRNA结合并调节其表达，增高荧光素酶表达活性以促进p21的翻译表达，增高p21与proCaspase-3的结合，从而提高IEC-6细胞的抗调亡能力。
Abstract
Objective
2
To investigate the protective effect of glycyrrhizic acid (GA) from tumor necrosis factor-
α+
actinomycetes ketone （TNF-
α+
CHX） induced apoptosis in rat small intestine crypt epithelial cell line (IEC-6) via AU rich element mRNA binding protein HuR mediated posttranscription of p21 and the potential mechanism.
Method
2
The cultured IEC-6 cells were observed. The experiment was divided into blank group
GA (60 μmol·L
-1
) group
TNF-
α
+CHX group and GA+TNF-
α
+CHX group. Cytoplasmic and nuclear HuR were measured by Western blot. The interaction of HuR and p21 mRNA was detected by biotin pull down and RNA IP. Luciferase activity was measured after transfection with construct with p21 3'-UTR cloned into downstream of luciferase reporter. Cell apoptosis was detected by real-time dynamic cell analyzer
p21 and cysteine proteinas-3 precursor protein（proCaspase-3） association was analysised by CO-IP.
Result
2
After GA treatment for 48 h
cytoplasmic HuR protein expression increased（
P
<
0.05）
the binding between HuR and p21 mRNA expression up regulated(
P
<
0.05)
luciferase activity increased(
P
<
0.01)
and p21 mRNA and protein expression also increased(
P
<
0.05)
while these results were abolished by HuR silencing with siRNA. GA enhanced p21 and procaspase3 interaction(
P
<
0.05)
and attenuated TNF-
α
+CHX induced apoptosis in IEC-6 cells.
Conclusion
2
GA protected IEC-6 cells from TNF-
α
/CHX induced apoptosis via HuR mediated p21 posttranscription
which due to GA enhanced HuR binding to endogenous and recombinant p21 mRNA and increased p21 interaction with proCaspase3.
关键词
Keywords
references
宁宇 ， 王锋超 ， 刘登群 ， 等 . 在体分离小鼠小肠隐窝、绒毛上皮细胞的生化完整性研究 [J]. 现代生物医学进展 ， 2009 ， 9 ( 14 ): 2610 - 2612 .
王锋超 . 电离辐射与内毒素致小肠上皮细胞损伤机制的实验研究 [D]. 重庆 : 第三军医大学 ， 2006 .
张子理 ， 陈蔚文 . 小肠隐窝细胞株(IEC-6):中药生物活性成分筛选的药理模型 [J]. 中药药理与临床 ， 2006 ， 22 ( 3 ): 180 - 182 .
曹雨诞 ， 颜晓静 ， 张丽 ， 等 . 醋制降低京大戟对大鼠小肠隐窝上皮细胞IEC-6毒性研究 [J]. 中国中药杂志 ， 2014 ， 39 ( 6 ): 1069 - 1074 .
潘杰 ， 王晨习 ， 郎宇璜 ， 等 . 骨桥蛋白对大鼠小肠隐窝上皮细胞生物学性状的影响 [J]. 复旦学报:医学版 ， 2016 ， 43 ( 5 ): 580 - 585 .
YU C ， XIN W ， ZHEN J ， et al . HuR mediated post-transcriptional regulation of epithelial-mesenchymal transition related genes in diabetic nephropathy [J]. J Diabetes ， 2014 ， 7 ( 4 ): 562 - 572 .
张娴 . RNA结合蛋白HuR对IEC-6细胞XIAP转录后调节及多胺和甘草酸的作用研究 [D]. 广州 : 广州中医药大学 , 2009 .
贺毅 . 甘草通过RNA结合蛋白HuR对肠上皮细胞的p21、p53mRNA转录后调节研究 [D]. 广州 : 广州中医药大学 ， 2010 .
张娴 ， 曾星 ， 黄羽 . 甘草酸通过HuR介导的p21转录后表达对小肠上皮细胞抗凋亡作用 [C]//第十一次中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编. 2013 .
张娴 ， 黄羽 ， 曾星 . 甘草酸对H 2 O 2 诱导小肠上皮细胞DNA损伤的保护作用 [J]. 中药新药与临床药理 ， 2012 ， 23 ( 3 ): 239 - 242 .
CHATTERJI P ， RUSTGI A K . RNA binding proteins in intestinal epithelial biology and colorectal cancer [J]. Trends Mol Med ， 2018 ， 24 ( 5 ): 490 - 506 .
WANG Z L ， LI B ， LUO Y X ， et al . Comprehensive genomic characterization of RNA-binding proteins across human cancers [J]. Cell Rep ， 2018 ， 22 ( 1 ): 286 - 298 .
GERSTBERGER S ， HAFNER M ， TUSCHL T . A census of human RNA-binding proteins [J]. Nat Rev Genet ， 2014 ， 15 ( 12 ): 829 - 845 .
SUREBAN S M ， NABENDU M ， PAVEL R ， et al . Functional antagonism between RNA binding proteins HuR and CUGBP2 determines the fate of COX-2 mRNA translation [J]. Gastroenterology ， 2007 ， 132 ( 3 ): 1055 - 1065 .
BRENNAN C M ， STEITZ J A . HuR and mRNA stability [J]. Cell Mol Life Sci ， 2001 ， 58 ( 2 ): 266 - 277 .
WANG W ， FURNEAUX H ， CHENG H ， et al . HuR p21 mRNA stabilization by UV light [J]. Mol Cell Biol ， 2000 ， 20 ( 3 ): 760 - 769 .
YAMAN I ， FERNANDEZ J ， SARKAR B ， et al . Nutritional control of mRNA stability is mediated by a conserved AU-rich element that binds the cytoplasmic shuttling protein HuR [J]. J Biol Chem ， 2002 ， 277 ( 44 ): 41539 - 41546 .
MAZAN-MAMCZARZ K ， GALBAN S ， DE SILANES I L ， et al . RNA-binding protein HuR enhances p53 translation in response to ultraviolet light irradiation [J]. Proc Natl Acad Sci USA ， 2003 ， 100 ( 14 ): 8354 - 8359 .
WANG W ， CALDWELL M C ， LIN S ， et al . HuR regulates cyclin A and cyclin B1 mRNA stability during cell proliferation [J]. Embo J ， 2014 ， 19 ( 10 ): 2340 - 2350 .
MA W J ， CHUNG S ， FURNEAUX H . The Elav-like proteins bind to AU-rich elements and to the poly(A) tail of mRNA [J]. Nucleic Acids Res ， 1997 ， 25 ( 18 ): 3564 - 3569 .
ABDELMOHSEN K ， GOROSPE M . Posttranscriptional regulation of cancer traits by HuR [J]. Wires RNA ， 2010 ， 1 ( 2 ): 214 - 229 .
DURIE D ， LEWIS S M ， LIWAK U ， et al . RNA-binding protein HuR mediates cytoprotection through stimulation of XIAP translation [J]. Oncogene ， 2011 ， 30 ( 12 ): 1460 - 1469 .
HAN D ， GAO J ， GA X ， et al . P21Waf1/Cip1 depletion promotes dexamethasone-induced apoptosis in osteoblastic MC3T3-E1 cells by inhibiting the Nrf2/HO-1 pathway [J]. Arch Toxicol ， 2017 ， 92 ( 6 ): 1 - 14 .
ZHANG C ， KAVURMA M M ， LAI A ， et al . Ets-1 protects vascular smooth muscle cells from undergoing apoptosis by activating p21 WAF1/Cip1:ETS-1 regulates basal and inducible p21 WAF1/Cip:ETS-1 regulates basal and inducible p21 WAF1/Cip1 transcription via distinct cis-acting elements in the p21 WAF/Cip1 promoter [J]. J Biol Chem ， 2003 ， 278 ( 30 ): 27903 - 27909 .
CHO S J ， ZHANG J ， CHEN X B . RNPC1 modulates the RNA-binding activity of，and cooperates with，HuR to regulate p21 mRNA stability [J]. Nucleic Acids Res ， 2010 ， 38 ( 7 ): 2256 - 2267 .
ROGERS C ， FERNANDES-ALNEMRI T ， MAYES L ， et al . Cleavage of DFNA5 by caspase-3 during apoptosis mediates progression to secondary necrotic/pyroptotic cell death [J]. Nat Commun ， 2017 ， 8 : 14128 .
LIU B ， JIAN Z ， LI Q ， et al . Baicalein protects human melanocytes from H 2 O 2 -induced apoptosis via inhibiting mitochondria-dependent caspase activation and the p38 MAPK pathway [J]. Free Radical Bio Med ， 2012 ， 53 ( 2 ): 183 - 193 .
李斌霞 ， 佟杰 . 甘草酸药理作用及机制的研究进展 [J]. 数理医药学杂志 ， 2007 ， 20 ( 2 ): 228 - 231 .
李开龙 ， 何娅妮 ， 王惠明 ， 等 . 甘草酸18 α 体对缺血再灌注损伤后肾小管上皮细胞p21蛋白表达的影响 [J]. 重庆医学 ， 2008 ， 37 ( 22 ): 2550 - 2552 .
李开龙 ， 何娅妮 ， 赵玲 ， 等 . 甘草酸18 α 体上调p53的表达保护肾脏缺血再灌注损伤的实验研究 [J]. 第三军医大学学报 ， 2008 ， 30 ( 22 ): 2078 - 2081 .
HE Y ， ZHANG X ， ZENG X ， et al . HuR-mediated posttranscriptional regulation of p21 is involved in the effect of Glycyrrhiza uralensis licorice aqueous extract on polyamine-depleted intestinal crypt cells proliferation [J]. J Nutr Biochem ， 2012 ， 23 ( 10 ): 1285 - 1293 .
0
浏览量
16
下载量
1
CSCD
- 印刷PDF下载
- 网络PDF下载
- BibTeX下载
- Endnote下载
- RefMan 下载
- NoteExpress下载
- NoteFirst下载
关联资源
相关文章
相关作者
相关机构
AI问答- 地址：北京市东城区东直门内南小街16号 邮编：100700
- 联系电话：010-84076882 Email：syfjx_2010@188.com
- 技术支持由北京北大方正电子有限公司提供 京ICP备11006657号-10
京公网安备11010802024621 - 本系统建议在Chrome、 IE9+ 以上版本浏览器阅读本站内容，360浏览器请切换至极速模式
- Cookies帮助我们提供服务并提供个性化体验。使用本网站，即表示您同意我们使用Cookies
