温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

田真真; 徐义勇; 朱金华; 叶喜德; 高源; 万红娇

doi:10.13422/j.cnki.syfjx.20201867

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温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响

经典名方 | 更新时间：2020-12-10

- 温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响
- Effect of Wendantang-containing Serum on CREB Gene Silencing Hippocampal Neuron Apoptosis and BDNF/TrkB/CREB Signaling Pathway
- 中国实验方剂学杂志 2020年26卷第22期页码：1-6
- 作者机构：
  
  江西中医药大学，南昌 330004
- 作者简介：
  
  田真真，在读博士，讲师，从事中医基础理论与诊治规律研究工作，E-mail：27939115@qq.com
  万红娇，博士，教授，从事中医基础理论与诊治规律研究工作，E-mail：635056254@qq.com
- 基金信息：
  
  国家自然科学基金项目(81860814);江西省教育厅科技计划项目(GJJ170741);江西省卫计委中医药科研课题(2017A235);江西中医药大学博士科研启动基金课题(2018WBZR020);江西省自然科学基金项目(20192BAB20509 6)
- DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20201867
  中图分类号： R2-0;R22;R285.5;R289
- 收稿日期：2020-03-06，
  
  网络出版日期：2020-07-25，
  
  纸质出版日期：2020-11-20
- 稿件说明：
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田真真,徐义勇,朱金华等.温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(22):1-6.

TIAN Zhen-zhen,XU Yi-yong,ZHU Jin-hua,et al.Effect of Wendantang-containing Serum on CREB Gene Silencing Hippocampal Neuron Apoptosis and BDNF/TrkB/CREB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2020,26(22):1-6.
田真真,徐义勇,朱金华等.温胆汤含药血清对CREB mRNA沉默海马神经元细胞凋亡及BDNF/TrkB/CREB信号通路的影响[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(22):1-6. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20201867.

TIAN Zhen-zhen,XU Yi-yong,ZHU Jin-hua,et al.Effect of Wendantang-containing Serum on CREB Gene Silencing Hippocampal Neuron Apoptosis and BDNF/TrkB/CREB Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2020,26(22):1-6. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20201867.

摘要

目的

探讨温胆汤对环磷腺苷效应元件结合蛋白（CREB） mRNA沉默海马细胞活性、凋亡及海马脑源性神经营养因子/原肌球蛋白相关受体激酶/CREB（BDNF/TrkB/CREB）信号通路作用的影响。

方法

制备温胆汤含药血清，将SD雄性大鼠随机分为温胆汤高、中、低剂量组、氯氮平组、正常生理盐水组，每组10只，其中每组15只。正常组予20 mL·kg

-1

生理盐水灌胃，氯氮平组给予0.02 g·kg

-1

氯氮平原药灌胃，温胆汤高、中、低剂量组分别予质量浓度为2，1，0.5 g·mL

-1

的等量温胆汤浓缩生药灌胃，1次/d，连续灌胃8 d后，股动脉取血，5 000 r·min

-1

离心15 min，倾取上清液，灭活，-80 ℃保存，备用。通过脂质体转染至海马细胞中，构建CREB mRNA沉默海马神经元细胞系，实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）验证小分子干扰核糖核酸（siRNA）转录后效果。检测海马细胞周期和凋亡，正常海马细胞和CREB基因沉默海马细胞内BDNF，TrkB，CREB，钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ） mRNA表达水平。

结果

对于细胞凋亡，与正常大鼠血清组比较，各组别在24，48 h时，细胞凋亡显著降低（

0.01）；与正常大鼠血清-siRNA组比较，各给药组细胞凋亡显著降低（

0.01）。对于BDNF，TrkB，CREB，CaMKⅡ mRNA表达，与正常大鼠血清组比较，基因沉默正常组CREB，BDNF mRNA表达均显著下降（

0.01）；与正常大鼠血清-siRNA组比较，各给药组可显著提高BDNF mRNA表达（

0.01），其中TrkB，CaMKⅡ各组间差异无明显统计学意义。

结论

温胆汤含药血清可提高BDNF mRNA表达，通过调控BDNF/TrkB/CREB信号通路，以保护海马神经元，达到防治精神分裂症认知障碍的目的。

Abstract

Objective

To investigate the effect of Wendantang on cyclic adenosine monophosphate （cAMP）-response element binding protein（CREB） gene silencing hippocampal cell activity， apoptosis and signal pathway of brain-derived neurotrophic factor/protomyosin related receptor kinase B/adenosine cyclophosphate effector binding protein （BDNF/TrkB/CREB）.

Method

Wendantang-containing serum was prepared. Animal grouping： SD male rats were randomly divided into high， medium， low-dose groups， clozapine group and normal saline group， with 10 rats in each group， while 15 rats for the normal group. Dosage： 20 mL·kg

-1

normal saline was given to normal group N， clozapine 0.02 g·kg

-1

was given to dozapine group X， while high， medium and low-dose Wendantang groups were respectively given the same amount of Wendantang concentrated crude drug， with concentrations of 2， 1 and 0.5 g·mL

-1

respectively once a day for 8 days continuously， and then blood was taken from femoral artery， and centrifuged for 15 min at 5 000 r·min

-1

. Supernatant was taken， inactivated， stored at -80 ℃ for standby. The CREB gene silenced hippocampal neuron cell line was constructed through transfection of liposomes into hippocampal cells， and Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-time PCR） was used to verify the effect of small interfering RNA （siRNA） transcription. The mRNA expressions of BDNF， TrkB， CREB and CaMKⅡ in normal hippocampal cells and CREB gene silenced hippocampal cells were measured.

Result

Compared with normal group， the apoptosis of the normal gene silencing group was significantly increased （

0.01）， compared with the normal gene silencing group， the apoptosis of each group was significantly reduced （

0.01）. As for the mRNA expressions of BDNF， TrkB， CREB and CaMKⅡ， compared with the normal group， the mRNA expression of CREB， BDNF in the normal gene silencing group was significantly decreased （

0.01）. Compared with the normal gene silencing group， the mRNA expression of BDNF in each administration group was highly increased （

0.01）， but with no statistically significant difference between TrkB and CaMKⅡ groups.

Conclusion

The Wendantang-containing serum could improve the mRNA expression of BDNF， protect hippocampal neurons and prevent cognitive impairment of schizophrenia by regulating BDNF/TrkB/CREB signal pathway.

关键词

Keywords

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