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柚皮素对A
β 25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响Effect of Naringenin on Oxidative Stress and Tau Protein Phosphorylation of A
β 25-35-induced PC12 Cell Injury- 中国实验方剂学杂志 2020年26卷第21期 页码：92-99
- 作者机构：
1.黑龙江中医药大学 药学院，哈尔滨 150040
2.黑龙江中医药大学 佳木斯学院，黑龙江 佳木斯 154007
- 作者简介：
邱琦，在读硕士，从事中药药效物质基础及体内代谢研究，E-mail：343871098@qq.com
* 张宁，博士，研究员，博士生导师，从事中药药效物质基础及体内代谢研究，E-mail：zhangning0454@163.com； *
雷霞，博士，副教授，从事中药治疗中枢退行性疾病机制研究，E-mail：leixia2006@163.com
- 基金信息：国家自然科学基金面上项目(81673581);黑龙江省属高校科技成果研发、培育项目(TSTAU-C2018020);黑龙江省大学生创新创业训练计划项目(201910228083);黑龙江中医药大学基金项目(2018RCD19;2018jkcy05)
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20202140
中图分类号： R2-0;R289;R742收稿日期：2020-03-14，
网络出版日期：2020-08-27，
纸质出版日期：2020-11-05
- 稿件说明：
移动端阅览
邱琦,胡中花,徐红丹等.柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(21):92-99.
QIU Qi,HU Zhong-hua,XU Hong-dan,et al.Effect of Naringenin on Oxidative Stress and Tau Protein Phosphorylation of Aβ25-35-induced PC12 Cell Injury[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2020,26(21):92-99.
邱琦,胡中花,徐红丹等.柚皮素对Aβ25-35损伤PC12细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响[J].中国实验方剂学杂志,2020,26(21):92-99. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20202140.
QIU Qi,HU Zhong-hua,XU Hong-dan,et al.Effect of Naringenin on Oxidative Stress and Tau Protein Phosphorylation of Aβ25-35-induced PC12 Cell Injury[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2020,26(21):92-99. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20202140.
摘要
目的
2
探讨柚皮素对
β
淀粉样蛋白（A
β
）
25-35
损伤大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞氧化应激及Tau蛋白磷酸化的影响及其与雌激素受体（ER）及磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的关系。
方法
2
采用A
β
25-35
干预PC12细胞制备损伤模型。实验分为空白组、模型组、柚皮素（400，40，4，0.4，0.04，4×10
-3
，4×10
-4
，4×10
-5
μmol·L
-1
）组、阳性药雌二醇（E
2
）（1 nmol·L
-1
）+A
β
25-35
组、柚皮素（0.4，0.04，4×10
-3
，4×10
-4
，4×10
-5
μmol·L
-1
）+A
β
25-35
组，E
2
+A
β
25-35
+ER拮抗剂（ICI182780）（1 μmol·L
-1
）组，柚皮素+A
β
25-35
+ICI182780组，E
2
+A
β
25-35
+PI3K阻断剂（LY294002）（50 μmol·L
-1
）组、柚皮素+A
β
25-35
+LY294002组。噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖率，2'，7'-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）作为荧光探针检测细胞中总活性氧（ROS）含量，硫代巴比妥酸（TBA）法和氧化酶法分别检测细胞中丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性，蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组细胞中磷酸化Tau蛋白/总Tau蛋白（p-Tau/t-Tau）的表达。
结果
2
根据MTT实验结果，筛选0.4 μmol·L
-1
为柚皮素最佳有效浓度；与空白组比较，模型组细胞增殖率显著降低（
P
<
0.01），与模型组比较，柚皮素+A
β
25-35
组细胞增殖率显著升高（
P
<
0.01）。此外，与空白组比较，模型组细胞中ROS，MDA的含量及p-Tau/t-Tau表达显著升高（
P
<
0.01），SOD活性显著降低（
P
<
0.01），与模型组比较，柚皮素+A
β
25-35
组细胞中ROS，MDA的含量及p-Tau/t-Tau表达显著降低（
P
<
0.01），SOD活性显著升高（
P
<
0.01），与柚皮素+A
β
25-35
组比较，ICI182780，LY294002的加入显著逆转了柚皮素在上述指标中的作用（
P
<
0.01）。柚皮素的作用效果与E
2
相似。
结论
2
柚皮素可提高细胞增殖率，对A
β
25-35
损伤PC12细胞有保护作用，其作用可能是通过激活ER及PI3K/Akt信号通路降低A
β
25-35
损伤PC12细胞中ROS，MDA含量及p-Tau/t-Tau表达、促进SOD活性来实现的。
Abstract
Objective
2
To investigate the effects of naringenin on oxidative stress and Tau protein phosphorylation of adrenal pheochromocytoma（PC12） cells injured by
β
-amyloid（A
β
）
25-35
and its relationship with estrogen receptor（ER） and phosphatidylinositol -3 kinase/protein kinase B（PI3K/Akt） signaling pathway.
Method
2
The PC12 cells were intervened with A
β
25-35
to prepare the injury model. The experiment was divided into blank group， model group， naringenin（400，40，4，0.4，0.04，4×10
-3
，4×10
-4
，4×10
-5
μmol·L
-1
）group， positive drugs estradiol（E
2
）（1 nmol·L
-1
）+A
β
25-35
group， naringenin（0.4，0.04，4×10
-3
，4×10
-4
，4×10
-5
μmol·L
-1
）+A
β
25-35
group， E
2
+A
β
25-35
+ER antagonist（ICI182780）（1 μmol·L
-1
） group， naringenin+A
β
25-35
+ICI182780 group， E
2
+A
β
25-35
+PI3K blocker（LY294002）（50 μmol·L
-1
） group， naringenin+A
β
25-35
+LY294002 group. Methye thiazolye telrazlium（MTT）method was used to detect the cell proliferation index， 2'，7'-Dichlorodi -hydrofluorescein diacetate（DCFH-DA） was used as a fluorescent probe to detect the content of reactive osygen species（ROS）， the content of malondialdehyde（MDA） and the activity of superoxide dismutase（SOD） were measured by thiobarbituric acid（TBA） and oxidase methods， Western blot was used to detect the expression of phosphorylated Tau protein/total Tau protein（p-Tau/t-Tau）.
Result
2
According to the results of MTT experiment， 0.4
μmol·L
-1
was selected as the best effective concentration of naringenin， compared with the blank group， the cell proliferation index of model group decreased significantly （
P
<
0.01）， compared with model group， the cell proliferation index of naringenin+A
β
25-35
group increased significantly （
P
<
0.01）. In addition， compared with blank group， the content of ROS， MDA and the expression of p-Tau/t-Tau in the model group increased significantly （
P
<
0.01）， and the activity of SOD decreased significantly （
P
<
0.01）， compared with model group， the content of ROS， MDA and the expression of p-Tau/t-Tau in naringenin+A
β
25-35
group decreased significantly （
P
<
0.01）， and the activity of SOD increased significantly （
P
<
0.01）， compared with naringenin+A
β
25-35
group， the addition of ICI182780 and LY294002 significantly reversed the role of naringenin in the above indicators （
P
<
0.01）. The effect of naringenin was similar to that of E
2
.
Conclusion
2
Naringenin can improve the cell proliferation index and protect PC12 cells from A
β
25-35
injury， which may be achieved by activating ER and PI3K/Akt signaling pathway to reduce ROS， MDA content， p-Tau/t-Tau expression and promote SOD activity.
关键词
Keywords
references
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