浏览全部资源
扫码关注微信
加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-
β 1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移Extract from Modified Xiao Xianxiongtang Inhibits Epithelial-mesenchymal Transition and Invasion and Migration Mediated by TGF-
β 1 of Human Gastric Cancer MGC-803 Cells via Wnt5a/Ca2+/NFAT Signaling Pathway- 中国实验方剂学杂志 2021年27卷第4期 页码：37-46
- 作者机构：
1.安徽中医药大学，合肥 230012
2.中药复方安徽省重点实验室，合肥 230012
- 作者简介：
丁芮，在读硕士，从事中药复方抗肿瘤作用研究，E-mail：584831330@qq.com
* 黄金玲，博士生导师，教授，从事中药抗肿瘤作用及其分子机制研究，E-mail：jinling6181@126.com
- 基金信息：国家自然科学基金面上项目(81573864)
DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20202326
中图分类号： R22;R242;R2-031;R285.5收稿日期：2020-06-18，
网络出版日期：2020-09-17，
纸质出版日期：2021-02-20
- 稿件说明：
移动端阅览
丁芮,葛瑞瑞,王恩宇等.加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(04):37-46.
DING Rui,GE Rui-rui,WANG En-yu,et al.Extract from Modified Xiao Xianxiongtang Inhibits Epithelial-mesenchymal Transition and Invasion and Migration Mediated by TGF-β1 of Human Gastric Cancer MGC-803 Cells via Wnt5a/Ca2+/NFAT Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(04):37-46.
丁芮,葛瑞瑞,王恩宇等.加味小陷胸汤水提物通过Wnt5a/Ca2+/NFAT信号通路抑制TGF-β1介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化及侵袭迁移[J].中国实验方剂学杂志,2021,27(04):37-46. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20202326.
DING Rui,GE Rui-rui,WANG En-yu,et al.Extract from Modified Xiao Xianxiongtang Inhibits Epithelial-mesenchymal Transition and Invasion and Migration Mediated by TGF-β1 of Human Gastric Cancer MGC-803 Cells via Wnt5a/Ca2+/NFAT Signaling Pathway[J].Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae,2021,27(04):37-46. DOI： 10.13422/j.cnki.syfjx.20202326.
摘要
目的
2
观察加味小陷胸汤水提物对转化生长因子-
β
1
（transforming growth factor-
β
1
，TGF-
β
1
）介导的人胃癌MGC-803细胞上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）及侵袭迁移能力的影响，探讨其调控Wnt5a/Ca
2+
/活化T细胞核因子（nuclear factor of activated T-cells，NFAT）信号通路抑制MGC-803细胞EMT和侵袭转移的作用机制。
方法
2
用TGF-
β
1
（10 μg·L
-1
）诱导人胃癌MGC-803细胞EMT及侵袭转移模型，分别采用Transwell小室实验、划痕愈合实验、蛋白免疫印迹和免疫荧光法检测细胞侵袭迁移能力，EMT标志蛋白表达和Wnt5a/Ca
2+
/NFAT信号通路关键蛋白表达以及细胞内Ca
2+
浓度。
结果
2
TGF-
β
1
能够显著增强MGC-803细胞侵袭迁移能力（
P
<
0.01），下调上皮细胞黏附分子（E-cadherin）水平（
P
<
0.01），上调间质细胞标志蛋白（N-cadherin），转录因子（Snail）和细胞骨架蛋白（Vimentin）表达（
P
<
0.01），并诱导细胞Wnt5a，钙调神经磷酸酶（calcineurin，CaN），活化T细胞核因子1（nuclear factor of activated T-cells1，NFAT1）总蛋白，磷酸化蛋白p-NFAT1和NFAT1核蛋白表达上调及Ca
2+
胞内蓄积（
P
<
0.01）；而加味小陷胸汤（10，20，40 mg·L
-1
）均可明显抑制这一现象，且40 mg·L
-1
效果最佳（
P
<
0.05，
P
<
0.01）；Wnt5a/Ca
2+
/NFAT信号通路特异性抑制剂（
R
）-（+）-Bay-K-8644与加味小陷胸汤40 mg·L
-1
均可明显抑制MGC-803细胞经TGF-
β
1
介导后的侵袭迁移，上调E-cadherin水平，下调N-cadherin，Snail，Vimentin，Wnt5a，CaN，NFAT1蛋白表达及减少Ca
2+
在胞内蓄积（
P
<
0.05，
P
<
0.01），且（
R
）-（+）-Bay-K-8644协同加味小陷胸汤40 mg·L
-1
抑制作用效果更强（
P
<
0.05，
P
<
0.01）。
结论
2
以上结果提示加味小陷胸汤能通过Wnt5a/Ca
2+
/NFAT信号通路抑制TGF-
β
1
介导的EMT，进而降低MGC-803细胞侵袭迁移能力。
Abstract
Objective
2
This studu aims to investigate the effect of aqueous extract of modified Xiao Xianxiongtang on the epithelial mesenchymal transition（EMT） and the change of its invasion and migration ability of human gastric cancer MGC-803 cells mediated by transforming growth factor-
β
1
（TGF-
β
1
），and to explore the mechanism of regulating Wnt5a/Ca
2+
/ activated T-cell nuclear factor（NFAT） signaling pathway to inhibit EMT and invasion and metastasis of MGC-803 cells.
Method
2
TGF-
β
1
（10 μg·L
-1
）was used to induce EMT and the invasion and metastasis model of human gastric cancer MGC-803 cells. Transwell chamber experiment， scratchhealing experiment， Western blot and immunofluorescence assay were used to detect cell invasion and migration ability， expression of EMT marker protein and key protein expression of Wnt5a/Ca
2+
/NFAT signaling pathway， and intracellular Ca
2+
concentration.
Result
2
Compared with the blank group， TGF-
β
1
could significantly enhance the invasion and migration ability of MGC-803 cells（
P
<
0.01）， down-regulate the level of E-cadherin（
P
<
0.01）， up-regulate protein expressions of N-cadherin， Snail and Vimentin（
P
<
0.01）， and induce cell Wnt5a， calcineurin （CaN）， total protein of activated T-cell nuclear factor 1（NFAT1）， up-regulation of phosphorylated proteins p-NFAT1 and NFAT1 nucleoprotein and intracellular accumulation of Ca
2+
（
P
<
0.01）. Compared with the TGF-
β
1
group， modified Xiao Xianxiongtang （10， 20， 40 mg·L
-1
） could significantly inhibit this phenomenon，and 40 mg·L
-1
had the best effect（
P
<
0.05，
P
<
0.01）.The specific inhibitors of Wnt5a/Ca
2+
/NFAT signaling pathway （
R
）-（+）-Bay-K-8644 and modified Xiao Xianxiongtang （40 mg·L
-1
） could significantly inhibit theinvasion and migration of MGC-803 cells mediated by TGF-
β
1
， up-regulate the level of E-cadherin， and down-regulate expressions of N-cadherin， Snail， Vimentin， Wnt5a， CaN and NFAT1 proteins and reduce the intracellular accumulation of Ca
2+
（
P
<
0.05，
P
<
0.01）.Moreover， （
R
）-（+）-Bay-K-8644 combined with modified Xiao Xianxiongtang （40 mg·L
-1
） had stronger inhibitory effect（
P
<
0.05，
P
<
0.01）.
Conclusion
2
These results suggest that modified Xiao Xianxiongtang can inhibit the EMT mediated by TGF-
β
1
via Wnt5a/Ca
2+
/NFAT signaling pathway，thereby reducing the invasion and migration ability of MGC-803 cells.
关键词
Keywords
references
BRAY F ， FERLAY J ， SOERJOMATARAM I ， et al . Global cancer statistics 2018：GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36 cancers in 185 countries ［J］. CA Cancer J Clin ， 2018 ， 68 （ 6 ）： 394 - 424 .
MARTINS-ANDRADE B ， DOS SANTOS COSTA S F ， SANT'ANA M S P ， et al . Prognostic importance of the lymphovascular invasion in head and neck adenoid cystic carcinoma：a systematic review and Meta-analysis ［J］. Oral Oncol ， 2019 ， 93 （ 4 ）： 52 ‐ 58 .
ISER I C ， PEREIRA M B ， LENZ G ， et al . The epithelial-to-mesenchymal transition-like process in glioblastoma：an updated systematic review and in silico investigation ［J］. Med Res Rev ， 2017 ， 37 （ 2 ）： 271 - 313 .
GE Q ， HU Y ， HE J ， et al . Zic1 suppresses gastric cancer metastasis by regulating Wnt/ β- catenin signaling and epithelial-mesenchymal transition ［J］. FASEB J ， 2020 ， 34 （ 2 ）： 2161 - 2172 .
CAI M ， SIKONG Y ， WANG Q ， et al . Gpx3 prevents migration and invasion in gastric cancer by targeting NF κ B/Wnt5a/JNK signaling ［J］. Int J Clin Exp Pathol ， 2019 ， 12 （ 4 ）： 1194 - 1203 .
范晓芸 ， 彭佳 ， 黄金玲 ， 等 . 化痰通瘀解毒方水提取物通过Wnt/ β -catenin信号通路抑制人胃癌细胞株MKN-45上皮-间质转化及侵袭迁移 ［J］. 中药药理与临床 ， 2018 ， 34 （ 6 ）： 163 - 168 .
黄金玲 ， 王靓 ， 王桐生 ， 等 . 化痰通瘀解毒方对S180小鼠移植瘤MVD及VEGF表达的影响 ［J］. 中医药临床杂志 ， 2011 ， 23 （ 3 ）： 255 - 256 .
方海雁 ， 刘蕾 ， 施慧 ， 等 . 化痰通瘀解毒方提取物对人胃癌细胞SGC-7901侵袭转移能力的影响 ［J］. 安徽中医药大学学报 ， 2016 ， 35 （ 3 ）： 67 - 70 .
LI C ， SONG L ， ZHANG Z ， et al . MicroRNA-21 promotes TGF- β 1 -induced epithelial-mesenchymal transition in gastric cancer through up-regulating PTEN expression ［J］. Oncotarget ， 2016 ， 7 （ 41 ）： 66989 - 67003 .
PENG S ， SONG C ， LI H ， et al . Circular RNA SNX29 Sponges miR-744 to regulate proliferation and differentiation of myoblasts by activating the Wnt5a/Ca 2+ signaling pathway ［J］. Mol Ther Nucleic Acids ， 2019 ， 16 （ 2 ）： 481 ‐ 493 .
TALEBI A ， MASOODI M ， MIRZAEI A ， et al . Biological and clinical relevance of Metastasis-associated long noncoding RNAs in esophageal squamous cell carcinoma： a systematic review ［J］. J Cell Physiol ， 2020 ， 235 （ 2 ）： 848 - 868 .
CHEN D ， ZHOU H ， LIU G ， et al . SPOCK1 promotes the invasion and Metastasis of gastric cancer through Slug-induced epithelial-mesenchymal transition ［J］. J Cell Mol Med ， 2018 ， 22 （ 2 ）： 797 - 807 .
CHEN X ， LI J ， HU L ， et al . The clinical significance of snail protein expression in gastric cancer： a Meta-analysis ［J］. Hum Genomics ， 2016 ， doi： 10.1186/s40246-016-0070-6 http://dx.doi.org/10.1186/s40246-016-0070-6 .
宋卓 ， 苏春雨 ， 徐竞男 ， 等 . 扶正解毒法防治胃癌的理论基础及循证依据 ［J］. 中医杂志 ， 2016 ， 57 （ 10 ）： 829 - 833 .
李星 ， 樊巧玲 . 胃癌中医辨证与方药应用的文献研究 ［J］. 中医杂志 ， 2017 ， 58 （ 8 ）： 693 - 696 .
CHATTOPADHYAY S ， CHATTERJEE R ， LAW S . Noncanonical Wnt5a-Ca 2+ -NFAT signaling axis in pesticide induced bone marrow aplasia mouse model： A study to explore the novel mechanism of pesticide toxicity ［J］. Environ Toxicol ， 2016 ， 31 （ 10 ）： 1163 - 1175 .
DEJMEK J ， SäFHOLM A ， KAMP NIELSEN C ， et al . Wnt-5a/Ca 2+ -induced NFAT activity is counteracted by Wnt-5a/Yes-Cdc42-casein kinase 1alpha signaling in human mammary epithelial cells ［J］. Mol Cell Biol ， 2006 ， 26 （ 16 ）： 6024 - 6036 .
KIM J ， KIM D W ， CHANG W ， et al . Wnt5a is secreted by follicular dendritic cells to protect germinal center B cells via Wnt/Ca 2+ /NFAT/NF- κ B-B cell lymphoma 6 signaling ［J］. J Immunol ， 2012 ， 188 （ 1 ）： 182 - 189 .
CHEN M ， ZHANG W ， SHI J ， et al . TGF-beta1-induced airway smooth muscle cell proliferation involves TRPM7-dependent calcium influx via TGFbetaR/Smad3 ［J］. Mol Immunol ， 2018 ； 103 （ 1 ）： 173 ‐ 181 .
YU L ， LIN Q ， LIAO H ， et al . TGF- β 1 induces podocyte injury through Smad3-ERK-NF- κ B pathway and Fyn-dependent TRPC6 phosphorylation ［J］. Cell Physiol Biochem ， 2010 ， 26 （ 6 ）： 869 - 878 .
ISHII T ， UCHIDA K ， HATA S ， et al . TRPV2 channel inhibitors attenuate fibroblast differentiation and contraction mediated by keratinocyte-derived TGF-beta1 in an in vitro wound healing model of rats ［J］. J Dermatol Sci ， 2018 ， 90 （ 3 ）： 332 - 342 .
LI Y ， LIU C ， LI B ， et al . Electrical stimulation activates calpain 2 and subsequently upregulates collagens via the integrin beta1/TGF-beta1 signaling pathway ［J］. Cell Signal ， 2019 ， 59 （ 3 ）： 141 ‐ 151 .
0
浏览量
12
下载量
4
CSCD
- 印刷PDF下载
- 网络PDF下载
- BibTeX下载
- Endnote下载
- RefMan 下载
- NoteExpress下载
- NoteFirst下载
关联资源
相关文章
相关作者
相关机构
AI问答- 地址：北京市东城区东直门内南小街16号 邮编：100700
- 联系电话：010-84076882 Email：syfjx_2010@188.com
- 技术支持由北京北大方正电子有限公司提供 京ICP备11006657号-10
京公网安备11010802024621 - 本系统建议在Chrome、 IE9+ 以上版本浏览器阅读本站内容，360浏览器请切换至极速模式
- Cookies帮助我们提供服务并提供个性化体验。使用本网站，即表示您同意我们使用Cookies
